山茱萸糖蛋白的纯化及部分理化性质研究

α- 淀粉酶抑制剂广泛存在于高等植物中,能抑制糖类在消化道内的吸收,是一种潜在的治疗糖尿病、肥胖和高血脂的药物。本文采用D10 1大孔吸附树脂,从山茱萸干果中提取得到粗提物,再经SPSepharose和SephacrylS 30 0柱层析,得到一种具有抑制α淀粉酶活性的糖蛋白(CoGP)。SephacrylS 30 0柱层析,PAGE电泳均证明该糖蛋白为单一组分;在还原条件下的SDS PAGE电泳中呈现两条蛋白带,其分子量分别是6 2 .OkD和5 6 .8kD ,利用SephacrylS 30 0柱层析测定表观分子量为15 8.9kD ,表明CoGP由两个亚基组成;利用苯酚 硫酸法测得其糖含量约为5 1% ;在α淀粉酶的抑制实验中,山茱萸糖蛋白表现出反竞争的抑制特性。

动物源杂合肽P18对白血病K562细胞的致死作用研究

通过其致死白血病K562细胞过程,对动物源杂合肽P18的分子结构与功能进行了研究。MTT实验表明P18显著致死K562细胞;Western blot实验和流式细胞分析提示P18导致K562细胞坏死,而非依赖于caspases的传统凋亡;荧光探针标记后,观察到P18显著增加K562细胞的膜通透性;圆二(CD)图谱分析,在模拟细胞膜环境的溶液中,P18分子出现α-螺旋。综上所述,P18肽分子可能在细胞膜微环境的介导下产生α-螺旋,产生或暴露了肽分子的破膜结构,导致膜通透性显著增加,最终导致K562细胞的坏死。

一株产纤维素酶绿色木霉的筛选及发酵条件优化

从土壤中筛选到一株具有较高纤维素酶活性的绿色木霉,对其液态发酵条件进行了优化.以羧甲基纤维素钠为碳源,含量0.75%,(NH4)2SO4为氮源,含量0.4%,250mL三角瓶20%装量,5%接种量,培养基初始pH为4,28℃,180r/min培养96h,优化后发酵液中Cx酶活达到277.7U/mL发酵液.

马铃薯酪氨酸酶的性质

用硫酸铵分级沉淀、DEAE SepharoseFF和SephadexG 150柱层析,从马铃薯中分离纯化出酪氨酸酶,纯化倍数50,比活170.03U mg蛋白。SDS PAGE检测呈现一条带。分子量42KD。酶的最适pH7 5,最适温度30℃。该酶具有单酚酶和二酚酶活性,其中以邻苯二酚为底物活性最高,以L DOPA为底物Km值为3 70mmol·L-1。Hg2+、Zn2+、Fe2+为激活剂,K+、Ga2+、Mg2+是抑制剂。Ga2+为非竞争性抑制,抑制常数ki为116 8mmol·L-1,K+为竞争性抑制,抑制常数ki为10mmol·L-1。

秋水仙碱与胃蛋白酶相互作用的光谱性质研究

采用紫外光谱法和荧光光谱法研究了秋水仙碱与胃蛋白酶的结合作用。观测到秋水仙碱使胃蛋白酶的紫外吸收峰增强,特征荧光峰淬灭。Stern-Volmer淬灭曲线显示,秋水仙碱对胃蛋白酶的荧光淬灭很可能是一个单一的静态淬灭过程。当λex=295nm时,秋水仙碱可以淬灭胃蛋白酶中95.5%的Trp残基。

泛酸研究及其应用

本文对泛酸的理化性质、生理功能、吸收机制、营养与药用价值、发酵制备及市场前景等问题作了较系统的综述。

非纯培养物细菌蛋白酶DNA片段的克隆与表达(英文)

为了构建更多的蛋白酶基因工程菌，以及进行蛋白酶基因的直接进化研究，从非纯培养细菌总DNA中扩增各种编码蛋白酶的DNA片段．根据MEROPS和GenBank数据库中的枯草杆菌类蛋白酶的编码区和成熟肽编码序列设计并合成了10条引物．富集培养胞外蛋白酶产生菌并提取了12个总DNA样品，分别用每对引物在降落PCR（Touchdown PCR，TD-PCR）条件下进行蛋白酶编码序列的扩增．选择了19个长800～1200bp的扩增片段测序，其结果为：8个是蛋白酶DNA片段，它们应属于4种不同的蛋白酶基因序列；同一对引物扩增到的基因序列差异性可达到32％，说明只使用基于已知序列的PCR方法从混合菌中获得新蛋白酶基因是可行的．将克隆到的1个与碱性蛋白酶E（GenBank No．AJ539133）的编码区99％相似的蛋白酶DNA片段插入pTWIN1载体，在大肠杆菌ER2566中进行表达．结果表明，表达的成熟蛋白酶可分泌到培养基中，能在牛奶平板上产生水解圈，对大肠杆菌有致死作用．

人工设计GAV-6短肽自组装形成淀粉样纤维的研究

淀粉样纤维是一类与人类疾病密切相关的蛋白异常聚集体,从一些核心短肽序列入手研究天然蛋白形成淀粉样纤维的分子机制是近年来的研究热点。本文设计了一个由甘氨酸(G)、丙氨酸(A)、缬氨酸(V)三种疏水性氨基酸构成的六肽GGAAVV(GAV-6),并研究其形成淀粉样纤维的能力。以原子力显微镜(AFM)和动态光散射(DLS)为手段的纳米结构表征发现,GAV-6能够在水溶液中自组装形成光滑不分叉的纳米纤维。通过刚果红染色/结合实验和硫磺素T结合实验,我们证实了这些纳米纤维具有典型的淀粉样纤维的特征。上述结果表明,人工设计的GAV-6短肽能够自组装形成淀粉样纤维,这可能为今后深入研究天然蛋白形成淀粉样纤维的机制提供一种简单的模式分子。