乳腺癌HER-2基因扩增及其蛋白表达与临床病理特征的关系

目的 分析乳腺癌组织中人表皮生长因子受体-2（human epidermal growth factor receptor-2,HER-2）基因扩增与HER-2/neu蛋白表达的一致性与相关性,探讨其与各临床病理特征的关系.方法 采用荧光原位杂交（fluorescent in situ hybridization,FISH）及免疫组织化学（immunohistochemistry,IHC）法分别检测164例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因扩增与蛋白表达,分析二者检测结果的一致性、相关性及其临床病理特征的关系.结果 FISH与IHC检测结果符合率为59.75％,结果存在一致性（Kappa=0.099,P=0.008）,且呈正相关（r=0.293,P=0.000）.ER表达与HER-2基因扩增及蛋白表达呈负相关（r=-0.481,P=0.000;r=-0.172,P=0.028）;PR表达及ER/PR状态与HER-2基因扩增呈负相关（r=-0.401,P=0.000;r=-0.382,P=0.000）,与HER-2蛋白表达无关（P＞0.05）.另外,肿瘤大小与HER-2蛋白表达有关（r=0.189,P=0.015）,与HER-2基因扩增状态无关;Ki-67增殖指数、患者年龄、淋巴结转移及肿瘤分级与HER-2基因扩增及蛋白表达均无关.结论 FISH与IHC两种检测结果存在一致性,但IHC（＋～（卅））的患者均应以FISH检测作为评价HER-2基因是否扩增的标准.

大鼠肝癌细胞C2不同途径接种造模及比较

目的探讨大鼠肝癌细胞系C2肝、脾原位接种成瘤及肠系膜静脉注射在不同内环境情况下对肿瘤发生和侵袭转移能力的影响,并筛选最佳C2肝细胞癌肺转移动物模型。方法 C2进行体外培养。将雌性BALB/cA裸鼠随机分为肝、脾原位接种及肠系膜静脉注射3组。观察裸鼠肝、脾成瘤率、裸鼠存活率、肿瘤病理学特点及远处脏器转移率及强度。结果肝原位接种组成瘤率为100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,周围肝组织和腹壁有粘连和侵袭,肺转移率为100%。脾原位接种组脾成瘤率为50%,肉眼未见明显的肿瘤形成,但部分肝表面可见转移灶;镜下肝、肺肿瘤转移率分别为67%和33%。肠系膜静脉注射组肉眼未见转移灶,镜下示肝、肺肿瘤转移率均为25%。结论三种不同方法构建的C2肝癌肺转移动物模型均有肺转移灶的出现,其中,肝原位接种模型最适合于肝细胞癌体内及肺转移机制及药物干预研究。

C6细胞肝与脾原位接种模型的建立及比较

目的探讨大鼠肝癌细胞系C6肝与脾原位接种成瘤在不同内环境情况下对肿瘤发生与侵袭转移等能力的影响,并筛选最佳C6肝细胞癌肺转移动物模型。方法 C6进行体外培养。将雌性BALB/cA裸鼠随机分为肝与脾原位接种2组。观察裸鼠C6成瘤率、裸鼠存活率、肿瘤病理学特点和远处脏器癌细胞转移等情况。结果肝原位接种组成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,对周围肝组织和腹壁有粘连、侵袭,肺转移率100%。脾原位接种组脾成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,对周围组织和腹壁亦有粘连、侵袭,肝、肺转移率分别为100%和71.4%。结论 C6细胞肝和脾原位接种均易成瘤和转移,可作为肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)体内研究和转移模型。脾原位接种模型可能与HCC自发性肿瘤发生和转移的生物学特性更相似,更适合于HCC发生和转移的机制,以及治疗干预等研究。

C1细胞肝、脾原位接种及肠系膜静脉注射造模的比较

目的比较大鼠肝癌细胞系C1肝、脾原位接种及肠系膜静脉注射造模致肿瘤发生及侵袭转移的能力,筛选理想的C1肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生及肺转移动物模型。方法 24只雌性BALB/cA裸鼠随机分为肝、脾原位接种及肠系膜静脉注射3组(8只/组)。观察裸鼠存活率,裸鼠肝、脾成瘤率及肿瘤病理学特征和远处脏器癌转移与强度。结果C1细胞肝原位接种组肝成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,肝组织和腹壁有粘连及侵袭,肺转移率63%,镜下见肺门淋巴结转移率25%;C1细胞脾原位接种组脾成瘤率100%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,脾组织和腹壁有粘连及侵袭,未见肝、肺转移。C1细胞肠系膜静脉注射组镜下仅见1只裸鼠有肝转移。结论以上3种不同方式构建的C1模型中,肝、脾原位接种模型均易成瘤,其中肝接种模型更适合作为HCC发生及肺转移机制和药物干预研究的动物模型。

肝癌细胞系L2不同途径接种造模的比较

目的比较大鼠肝癌细胞系L2肝、脾原位接种肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)发生及侵袭转移情况,筛选理想的L2 HCC肺转移动物模型。方法将20只7周龄雌性BALB/cA裸鼠随机分为2组,应用肝癌细胞系L2分别对2组小鼠进行肝、脾原位接种造模,观察裸鼠存活率,HCC的发生与侵袭转移率以及肿瘤病理学特点。结果肝原位接种组肝成瘤率100%,肿瘤呈结节膨胀性生长,与周围肝组织和腹壁侵袭粘连明显,肺转移率为60%,未见脾转移;脾原位接种组脾成瘤率78%,肝转移率67%,肿瘤亦呈结节膨胀性生长,与周围组织和腹壁也有侵袭粘连,肺转移率11%,明显低于肝接种组(P<0.05)。镜下肺门淋巴结转移率为33%。结论肝癌细胞系L2肝、脾原位接种均易成瘤且有肺转移发生,其中肝原位接种动物模型更适用于HCC肺转移机制及体内药物干预等实验分析。

泸州地区人乳头瘤病毒多重感染与宫颈病变的相关性分析

目的探讨四川泸州地区人乳头瘤病毒(HPV)多重感染与宫颈病变的关系。方法 2011-2013年在泸州地区各医院收集宫颈病变患者的宫颈脱落细胞或石蜡样本,采用基因芯片技术检测患者HPV感染情况及基因分型。结果 795例宫颈样本中,HPV阳性435例,阳性率为54.7%,HPV阳性率随着宫颈病变程度加重而呈上升趋势(P<0.05)。HPV多重感染比例为42.8%(186/435),其中慢性宫颈炎35.5%(60/169),CINⅠ44.9%(22/49),CINⅡ47.8%(22/46),CINⅢ50.0%(25/50),宫颈乳头瘤样病变45.8%(11/24),宫颈癌47.4%(46/97),不同宫颈病变患者HPV多重感染比例差异无统计学意义(P>0.05)。感染单一高危(低危)亚型HPV与感染多种高危(低危)亚型HPV不同宫颈疾病构成比差异无统计学意义(P>0.05)。结论泸州地区妇女HPV多重感染比例较高。宫颈病变严重程度与感染HPV密切相关,且主要取决于HPV亚型的致病力,与是否为单一或多重感染无关,感染高危亚型HPV需警惕宫颈癌的发生。

295例宫颈病变患者HPV亚型多重感染与宫颈病变的关系

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)不同亚型多重感染与宫颈病变的关系。方法采用基因芯片技术对手术切除宫颈石蜡组织及液基细胞技术所获宫颈脱落细胞进行基因分型检查,同时检测其宫颈病变程度。结果 295例宫颈病变样本总的HPV阳性率为58.98%(174/295)。仅感染高危HPV或高、低混合型HPV组的宫颈病变程度构成比与仅感染低危型HPV组的对应构成比差异有统计学意义(x2=16.801,P<0.05;x2=11.303,P<0.05);多重感染高危或多重低危HPV组分别与单一感染高、低危HPV组之间,其宫颈病变程度的构成比差异无统计学意义(x2=7.325,P>0.05;x2=4.362,P>0.05);单一高、低危亚型之间有统计学差异(x2=16.369,P<0.05)。结论高危型HPV感染增加了宫颈癌的患病风险,而多重感染并未促进宫颈病变的发展。

富顺地区宫颈病变患者HPV感染与宫颈病变程度的关系

目的探讨四川富顺地区不同程度宫颈病变患者人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈病变的关系。方法应用基因芯片技术对富顺地区295例妇女不同程度宫颈病变样本,分为慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、乳头状瘤及宫颈癌6组,分别进行HPV基因分型检测。结果(1)HPV总感染率为58.98%,各组独立性x2及线性趋势x2检验差异均有统计学意义(P<0.05),其中,慢性炎症组为28.10%,与其余各组差异有统计学意义(P<0.05),乳头状瘤组为92.86%,与慢性炎症和CINI组差异有统计学意义(P<0.05)。(2)HR-HPV感染率为63.73%,独立x2及线性趋势x2检验差异均有统计学意义(P<0.05),其中,宫颈癌组(95.35%)与炎症(35.54%)、CINI(77.27%)及乳头状瘤组(57.14%)差异有统计学意义(P<0.05)。(3)LR-HPV感染率为21.36%,乳头状瘤组(92.86%)与其余各组差异均有统计学意义(P<0.05),宫颈癌组(27.91%)与炎症组(13.22%)差异有统计学意义(P<0.05)。结论富顺地区妇女不同程度的宫颈病变与HPV及HR-HPV感染率有关,且有随感染率升高而病变程度加重的趋势。乳头状瘤的高危因素为LR-HPV感染。

349例乳腺癌HER-2基因扩增与蛋白表达相关性研究

目的了解乳腺癌组织中人表皮生长因子受体2(HER-2)基因扩增与Her-2/neu蛋白表达的一致性与相关性。方法采用荧光原位杂交(FISH)法及免疫组化(IHC)法分别检测349例浸润性乳腺癌患者的HER-2基因扩增与蛋白表达情况,分析二者检测结果的一致性与相关性。结果 FISH与IHC符合率为55.3%,结果存在一致性(Kappa=0.189,P=0.000),呈正相关(r=0.434,P=0.000)。结论 FISH与IHC两种检测结果存在一致性,但IHC(+^+++)患者均应以FISH检测作为评价HER-2基因是否扩增的标准方法。

泸州地区妇女HPV感染与宫颈病变程度的关系

目的分析泸州地区妇女不同宫颈病变程度与人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法采用基因芯片技术对泸州地区783例妇女不同程度宫颈病变样本分为慢性宫颈炎、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、乳头状瘤及宫颈癌6组,并行HPV基因分型检测。结果 783例宫颈病变样本的总感染率为54.79%(429/783),其中宫颈癌感染率84.07%(95/113),显著高于其余各组(P<0.05);慢性宫颈炎感染率为42.21%(168/398),显著低于除CINⅠ组以外的各组(P<0.05);乳头状瘤组感染率79.31%(23/29),显著高于慢性宫颈炎及CINⅠ组(P<0.05)。429例阳性患者样本中,高危感染率80.89%(374/429),其中乳头状瘤组感染率显著低于其余各组(P<0.05),宫颈癌感染率显著高于其余各组(P<0.05)。HPV阳性患者亚型分布中,仅高危型感染者乳头瘤样病变感染率显著低于其余各组(P<0.05),仅低危感染者乳头状瘤感染率显著高于其余各组(P<0.05)。结论泸州地区宫颈病变妇女高危HPV感染与宫颈癌及宫颈上皮内瘤变有关,并有随宫颈病变程度加重而升高的趋势。低危HPV感染为尖锐湿疣等良性性传播疾病的主要病原因子。

乳腺癌17号染色体多体在HER-2基因状态及临床病理特征中的意义

目的分析乳腺癌17号染色体多体在HER-2基因状态及临床病理特征中的意义。方法应用荧光原位杂交(FISH)技术检测186例浸润性乳腺癌患者石蜡切片中HER-2基因扩增与17号染色体多体情况,并分析17号染色体多体与HER-2基因扩增及各临床病理特征的关系。结果 186例样本中,17号染色体多体比例为43.0%(80/186),其中HER-2基因扩增组66.3%(53/80),HER-2基因未扩增组25.5%(27/106),前者显著高于后者(x2=30.929,P=0.000);17号染色体多体与肿瘤大小及肿瘤分级显示相关(r=-0.188,P=0.001;r=0.159,P=0.03),而与年龄、Ki67、淋巴结转移﹑ER、PR表达及ER/PR状态无关。结论 17号染色体多体与HER-2基因扩增者相关;并且可能提示乳腺癌患者预后不良。

大鼠肝癌细胞系C5F肝与脾原位接种造模及比较

目的:建立大鼠肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)细胞系C5F肝与脾原位接种模型,并比较其在不同内环境情况下对肿瘤发生和侵袭转移等能力的影响,筛选最佳C5F大鼠HCC肺转移动物模型。方法:20只雌性BALB/cA裸鼠随机分为肝、脾原位接种2组,观察裸鼠肝与脾成瘤率、裸鼠存活率、肿瘤病理学特点及远处脏器转移率及强度。结果:肝原位接种组成瘤率90%,肿瘤呈结节状膨胀性生长,肝与周围腹壁组织有粘连与侵袭,肺转移率80%。脾原位接种组脾成瘤率为56%,肝转移率67%,肺转移率33%。肝、脾接种组相比较,其肺转移率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:C5F肝原位接种模型更适合于HCC发生及肺转移机制及药物干预等研究。

大鼠肝癌细胞系N1不同途径造模及比较

目的观察大鼠肝癌细胞系N1经肝、脾原位接种后肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的发生与转移等情况,比较及筛选适宜的HCC N1发生及肺转移动物模型。方法 N1细胞进行体外培养。24只8周龄雌性BALB/c A裸鼠随机分为2组(12只/组)并分别进行N1的肝、脾原位接种,观察并比较两组间小鼠的存活率,肝、脾成瘤及肝、肺转移率等肿瘤生物及病理学特征。结果 N1细胞肝原位接种组肝成瘤率为100%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织有不同程度的粘连侵袭,肺及肺门淋巴结转移率分别为44%和22%,未见脾转移。N1细胞脾原位接种组脾成瘤率为64%,肝转移率为91%,肿瘤呈结节状生长,与腹壁及周围组织亦有不同程度的侵袭粘连,肺及肺门淋巴结转移率均为18%。结论 N1细胞肝、脾原位接种均易成瘤,是良好的HCC发生、发展及相关干预的动物模型,其中,肝原位接种鼠可能更适合于HCC发生与肺转移机制及药物干预等研究。

新旧指南下乳腺癌HER-2基因状态和蛋白表达及与临床病理关系的比较和再评价

目的对《乳腺癌HER2检测指南(2019版)》(以下简称新指南)与《乳腺癌HER2检测指南(2014版)》(以下简称旧指南)标准下乳腺癌患者HER-2基因状态及蛋白表达的一致性及与临床病理特征关系的再评价及比较。方法根据新、旧指南对1518例乳腺癌患者荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)和免疫组化(immunohistochemistry,IHC)检测结果进行再评价,并比较其结果一致性及与临床病理特征的关系。结果新指南下,HER-2(-/+)和HER-2基因阴性的符合率分别为100%和95.36%,HER-2(2+)和HER-2(3+)与HER-2基因阳性的符合率分别为24.26%和73.22%。新、旧指南下HER-2蛋白表达与HER-2基因扩增均相关(r=0.233,P<0.001;r=0.780,P<0.001)。新、旧指南HER-2(2+)与HER-2基因(+)的符合率差异有统计学意义(P<0.001),新指南新增了81例阴性,减少了70例不确定和11例阳性判读。新指南下HER-2基因扩增与ER、PR和ER/PR状态呈负相关(r=-0.606,P<0.001;r=-0.428,P<0.001;r=-0.428,P<0.001),与Ki-67表达呈正相关;组织学分级与HER-2基因扩增及蛋白表达呈正相关(r=0.097,P<0.05;r=0.139,P<0.05);HER-2蛋白表达与ER状态呈负相关(r=-0.126,P<0.05),与肿瘤大小呈正相关。结论新指南下HER-2基因状态及蛋白表达相关,新指南对旧指南HER-2(2+)患者进行了有效补充与更为准确的结果判读,使临床用药指导及预后判断更为明确与合理。

中期阿尔兹海默病presenilin-1/presenilin-2双基因敲除小鼠海马Vps33b基因的甲基化改变

目的:探讨中期阿尔兹海默病的presenilin-1/presenilin-2双基因敲除小鼠(dK O小鼠)模型海马中Vps33b基因甲基化改变情况。方法:采用简化的表观亚硫酸盐测序技术(RRBS)检测12月龄雌性dK O小鼠和同龄雌性野生型小鼠各3只海马组织基因组DNA异常甲基化改变情况,利用相关生物软件对照分析获取异常甲基化基因,并通过重亚硫酸盐甲基化测序技术进行相应验证。结果:RRBS法筛选出Vps33b基因在中期阿尔兹海默病dK O小鼠海马中呈高甲基化状态,经重亚硫酸盐单基因测序验证Vps33b基因为高甲基化,与RRBS检测结果一致。结论:Vps33b基因在中期AD dK O小鼠海马中呈高甲基化状态,提示高甲基化的Vps33b基因可能与中期阿尔茨海默病病程相关。

presenilin-1/presenilin-2双基因敲除小鼠的寿命观察

目的观察Presenilin-1/Presenilin-2双基因敲除小鼠(dKO mice)的生存曲线,为进一步繁殖及使用该模型对阿尔茨海默病(AD)进行研究提供实验设计等提供参考。方法将dKO mice雌性50只,雄性30只,及野生型同系小鼠雌、雄各20只分为4组,观察正常喂养情况下4组间小鼠2年以内各自的生存情况及寿命,绘制生存曲线进行生存分析。结果 dKO mice随着时间的延长,雌、雄性生存概率分别低于野生型雌、雄性小鼠,差异均有统计学意义(P<0.001,P<0.001;P<0.001;P<0.001);dKO mice雌、雄性之间的生存概率差异无统计学意义。结论条件性敲除presenilin-1与presenilin-2双基因可能会缩短小鼠的寿命,其生存概率显著低于野生型小鼠,而dKO mice雌、雄性之间的生存概率则无统计学差异。本实验结果可为借助此模型的实验设计应用提供有益参考。

阿尔茨海默病小鼠模型海马组织Atp5a1基因甲基化改变

目的初步探讨中期阿尔茨海默病(AD)的presenilin-1/presenilin-2双基因条件性敲除小鼠(d KO mice)模型中海马组织Atp5a1基因的甲基化改变情况。方法运用简化的表观亚硫酸盐测序技术(RRBS)检测3只12月龄雌性d KO mice和3只同系同龄雌性野生型小鼠海马组织基因组DNA异常甲基化情况,利用Bismark(v O.7.4)软件进行对照分析获取异常甲基化基因。结果二代测序结果显示12月龄中度神经退行性病变AD d KO mice海马中Atp5a1基因呈低甲基化状态(P<0.05)。结论 Atp5a1基因在中期AD d KO mice的海马中呈低甲基化状态,提示低甲基化的Atp5a1基因可能作为参与中期AD病程的潜在候选基因。

川南地区乳腺癌患者人表皮生长因子受体2基因状态及其蛋白表达与临床病理特征的关系

目的再评价川南地区乳腺癌患者人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factorreceptor-2,HER-2)基因状态及蛋白表达的一致性及其与临床病理特征的关系。方法根据最新《乳腺癌HER-2检测指南(2019版)》判读标准对川南地区1182例乳腺癌患者的荧光原位杂交(fluorescence in situhybrizization,FISH)和免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)检测结果进行再评价,对比《乳腺癌HER-2检测指南(2014版)》分析HER-2基因状态和HER-2/neu蛋白表达结果一致性及其与临床病理特征的关系。结果IHC(-/+)和FISH(-)一致率分别为100%和93.84%,IHC(2+)和IHC(3+)与FISH(+)符合率分别为25.42%和61.60%,新指南下两种检测方法检测结果存在一致性(Kappa=0.089,P=0.000),且呈正相关(r=0.194,P=0.000);HER-2基因扩增与ER、PR和ER/PR状态呈负相关(P<0.05),与淋巴结转移数量呈正相关(P<0.05);HER-2/neu蛋白表达与ER状态呈负相关(P<0.05),与肿瘤大小及组织学分级呈正相关(P<0.05)。结论最新HER-2检测指南对旧版进行补充,结合了HER-2/CEP17比值、平均HER-2基因拷贝数及IHC对HER-2状态综合评估,取消了HER-2可疑状态的判读,使临床医生对患者靶向药物使用的评估更加准确。

转移相关基因FMNL2参与胃癌侵袭转移的相关性分析

目的探讨转移相关基因FMNL2与胃腺癌上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的关系,为胃癌转移机制提供新线索。方法收集20例正常胃黏膜、92例胃腺癌、43例淋巴结转移癌组织进行免疫组化分析,比较3种组织标本中FMNL2和E-cadherin、CK、vimentin的阳性率,分析FMNL2表达与胃癌EMT的关系。结果FMNL2、vimentin在胃腺癌中的表达明显高于正常胃黏膜组织;在淋巴结转移癌中的表达高于胃腺癌组织(P<0.05)。上皮标志物E-cadherin、CK在正常黏膜中的表达显著高于胃腺癌及淋巴结组织(P<0.05)。相关性分析发现FMNL2与E-cadherin、CK呈负相关(r=-0.466,P=0.000,r=-0.327、P=0.000);与vimentin表达呈正相关(r=0.553,P=0.000)。结论 FMNL2与胃腺癌EMT相关,并可能通过EMT促进胃腺癌侵袭转移。

多肽P10581对大鼠甲状腺癌转移性骨癌痛的镇痛作用及对吗啡耐受的影响

目的:探讨多肽P10581对大鼠甲状腺癌转移性骨癌痛的镇痛作用及其对吗啡耐受的影响。方法:造模20天后,40只造模成功的甲状腺癌骨转移疼痛模型鼠被随机分为4组(雌雄各5只/组):吗啡组(5 mg/kg)、P10581 A组(7.2μg/kg)、P10581 B组(14.4μg/kg)和等体积生理盐水组,皮下注射给药并比较给药后连续5小时的大鼠机械性缩足阈值(paw withdral threshold,PWT)。在多肽对吗啡镇痛耐受的影响研究中,模型鼠分为吗啡组(5 mg/kg)、联合用药A组(0.2μg/kg P10581+5 mg/kg吗啡)、联合用药B组(0.4μg/kg P10581+5 mg/kg吗啡)和等体积生理盐水组,给药方式和分组同上,比较给药后连续4天的PWT。结果:在镇痛作用研究中,给药后1~3 h内吗啡和多肽P10581均有显著镇痛作用(P均<0.001),但吗啡镇痛效果强于多肽P10581,到第4 h时,两者的镇痛效果无差异,从第5 h开始P10581镇痛作用明显强于吗啡(t_(A)=14.35,P_(A)<0.001;t_(B)=17.60,P_(B)<0.001)。在多肽对吗啡镇痛耐受的影响实验中,吗啡组从第2天开始镇痛作用逐日下降,到第4天,吗啡完全耐受。微量多肽P10581与吗啡联合用药组,到第4天时A组和B组的镇痛百分率比吗啡组分别提高了63.86%和78.27%,仍保持明显镇痛效果(t_(A)=33.15,P_(A)<0.001;t_(B)=37.71,P_(B)<0.001)。所有实验结束后,实验鼠心、脑、肾、肝、脾、肺等重要脏器镜下观察无任何明显病理性改变。结论:多肽P10581对大鼠甲状腺癌转移性骨癌痛的镇痛作用时间明显长于吗啡,微量P10581可明显降低吗啡耐受性。