猪β干扰素的基因改造及真核表达

本试验选择高表达密码子重新设计合成猪β干扰素成熟肽核苷酸,通过设计特异的引物,在毕赤酵母表达系统中表达PoIFN-β,获得分泌表达的高活性重组PoIFN-β,并采用非洲绿猴肾细胞(Vero)-水泡性口炎病毒(VSV)系统以细胞病变抑制法测定重组猪β干扰素的效价,为指导重组PoIFN-β的临床使用和研究其生物学功能提供基础。

猪α干扰素基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达

根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经Zeoc inTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDS-PAGE和W estern-b lot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达.

细胞因子在疫苗中的免疫增强作用

细胞因子是免疫活性细胞和其它细胞分泌的具有多种生物活性的多肽或蛋白质,这些细胞因子是重要的信息传递物质,特别在免疫、炎症和造血系统等生物学反应过程中具有重要的作用。细胞因子用于重组疫苗上的研究已成为生物学研究中最活跃的领域之一。在基因工程疫苗研制中,常把细胞因子基因(如IL-2、IL-1等)和保护抗原基因连接在一起,构成融合蛋白,以增强疫苗的抗体产生和细胞免疫水平。以干扰素和白细胞介素为例,叙述了细胞因子在免疫增强剂和免疫治疗剂、构建新型基因工程苗等方面的主要研究进展。

表达猪圆环病毒2型ORF2和猪IFN-γ基因重组腺病毒的免疫保护作用

本研究以构建的猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2和猪IFN-γ重组腺病毒(简称rAd-OI)为免疫原免疫30日龄、母源抗体为阴性的三元杂商品仔猪。25头猪随机分为5组,每组5头。A组肌注免疫rAd-OI 106.12TCID50/头,B组肌注免疫rAd-OI 107.12TCID50/头,C组肌注免疫rAd-OI 108.12TCID50/头,D组肌注免疫rAd-OI 109.12TCID50/头,E组不作免疫,留作攻毒对照。一免后21 d进行二免,二免后21 d进行第3次免疫,免疫后每周采血检测抗体水平。免疫后56 d(即第三次免疫后14 d)所有猪攻毒PCV-2,剂量为5×105.67TCID50/头。攻毒前后每周采血检测抗体水平及病毒血症情况。攻毒21 d后处死所有猪,检测组织中的病毒含量。结果显示C组的抗体水平一直显著高于其他各组,攻毒后的病毒血症也低于其他各组。结合抗体水平、免疫和攻毒后的临床症状以及病毒血症水平得出,C组的免疫剂量较为理想,此结果为PCV-2ORF2及猪IFN-γ重组腺病毒疫苗的生产开发提供了理论依据。

Cu^(2+)-甲状腺素络合物的光谱特征及其分析应用

建立了一种测定甲状腺素的新方法,在p H 8.0的NH3-NH4Cl介质中,甲状腺素与Cu2+以物质的量浓度比2:1形成稳定络合物,该络合物在270 nm处有灵敏的紫外吸收,稳定常数为6.70×1011,并且络合物的吸收强度与甲状腺素的质量浓度在77.69~310.8μg/m L范围有着良好的线性关系,检出限为7.5μg/m L,RSD为0.36%。方法用于甲状腺素药片样品的测定,回收率为97.8%~101.9%。