血根碱对大鼠结肠炎及炎症通路中相关因子的影响

目的:探讨血根碱对葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎的疗效及可能的机制。方法:建立葡聚糖硫酸钠致溃疡性结肠炎大鼠模型,随机分为空白组、模型组、柳氮磺吡啶组、血根碱组。观察各组大鼠体质量、腹泻及隐血情况;通过荧光定量PCR(qPCR)分析炎症因子IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α在结肠组织中的表达量;利用免疫组化实验检测NF-κB通路中关键因子p65。结果:与模型组相比,血根碱组和阳性组大鼠的结肠组织中炎症因子IL-1β、IL-6表达降低,而IL-10的表达升高;同时,免疫组化实验发现血根碱组与模型组相比,其核内转入因子核蛋白p65显著下调。结论:血根碱可能通过调节NF-κB通路中的核转入因子p65,降低炎症因子IL-1β、IL-6的表达,同时提高炎症因子IL-10的表达,从而对炎症起到抑制作用。

高效液相色谱法测定大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱的含量

本研究建立了大鼠肝微粒体温孵体系中血根碱的高效液相色谱含量测定方法。采用Shimadzu VP-ODS(150 mm×4.6 mm,5μm)为色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水溶液(30:70,V/V)为流动相,以1 mL/min流速进样量10μL在284 nm波长下进行检测,结果显示500和1000 nmol/L血根碱对照品溶液的方法回收率分别为98.3%和98.9%;250、500、1000 nmol/L标准溶液的日内RSD分别为3.76%、2.88%和3.56%,日间RSD分别为5.19%、4.96%和3.84%;血根碱的摩尔浓度在250～10000 nmol/L内与峰面积呈良好的线性关系,表明该方法简单、快速、灵敏度高、特异性好,可用于血根碱在肝微粒体温孵体系中的含量测定。

博落回和小果博落回不同部位中生物碱类成分的比较

目的:比较博落回属植物博落回和小果博落回不同部位中生物碱随生长期积累的动态量化规律,为博落回属资源品质评价和合理利用提供依据。方法:采用HPLC对不同药用部位中血根碱、白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的含量进行测定,并对数据进行比较分校。结果:在根、茎、叶和果实不同部位中,两种植物的果实中生物碱类化合物量均为最多;茎中积累生物碱的量最少;根中积累较多的原阿片碱;生物碱在叶中的积累具有显著的种属特异性;另外,小果博落回果实中别隐品碱的量远高于其他生物碱。结论:该研究为博落回属植物资源的综合利用提供了有力的科学依据,由于生物碱类成分在该属植物中的累积具有种属特异性,在植物资源利用方面需要综合考虑具体的药用部位及其生物量。

基于UHPLC-QTOF/MS的博落回花中生物碱类化学成分研究

目的:利用高通量、高灵敏和快速的UHPLC-QTOF/MS技术开展博落回花中的微量生物碱类成分的定性研究,阐明博落回花中生物碱类化学成分的类别和种类,为博落回植物的安全性提供科学依据。方法:采用UHPLC-QTOF/MS技术,借助数据挖掘方法发现和识别出博落回花中的微量生物碱类化学成分,对其高分辨一级和二级质谱数据进行解析,并与数据库进行比对,完成对微量生物碱类化学成分的结构推测和确认。结果:从博落回花中共鉴定了22个生物碱类化合物,主要化学成分为普洛托品类生物碱(原阿片碱、别隐品碱)和四氢原小檗碱类生物碱(N-甲基刺罂粟碱、N-甲基四氢小檗碱)。结论:该研究结果为博落回植物的更全面、客观的品质评价和安全性评价提供了充分的科学依据。

基于ITS2序列的博落回属植物鉴定研究

目的:采用ITS2序列对博落回属药用植物进行鉴定。方法:通过对来自湖南、江西、浙江、湖北、河南、陕西、重庆的30个博落回属植物ITS2序列进行扩增和测序,并对其进行扩增效率及测序成功率、碱基构成、种内和种间变异分析及NJ系统进化树分析来评估ITS2序列鉴定效果。结果:博落回属药用植物ITS2序列长度在500 bp以内,扩增效率和测序成功率为100%,并获得30条博落回ITS2序列。结论:ITS2序列可以有效准确鉴别博落回属植物。

博落回中苄基异喹啉类生物碱生物合成与代谢工程研究概况

植物生长产生多种多样的次生代谢产物,其中许多还有非常重要的药用价值。但是植物中具有药用价值的次生代谢产物含量较低,而利用微生物代谢工程技术可以为次生代谢产物提供新的药源途径。本文对植物次生代谢产物特别是博落回属植物中苄基异喹啉类生物碱的生物合成以及国内外研究中利用微生物代谢工程技术在酵母中异源表达生产苄基异喹啉类生物碱的研究进展进行综述,同时结合博落回研究进展对未来博落回资源的综合利用进行展望。

不同产地博落回离体培养与植株再生研究

目的:探索不同产地的博落回离体培养效果差异,为筛选最适博落回植株再生材料提供研究基础。方法:采用植物组织培养技术对博落回叶片组织进行愈伤诱导及胚状体分化,并对结果进行分析。结果:安徽祁门、湖南炎陵和湖南高坊产地分别在不同培养阶段与其他产地比诱导率和分化率最高。结论:湖南高坊和安徽祁门的愈伤组织和胚状体的诱导及分化能力优于其他产地的样本。因此,不同产地叶片离体培养效果差异显著。

博普总碱散对种鸡生殖毒性试验研究

选择80只36周龄产蛋种母鸡,按产蛋率相近的原则随机分成4组,分别为对照组(试验1组)和受试药推荐剂量1、3、5倍组(试验2、3、4组),分别按博普总碱散0、400、1 200、2 000 mg·kg-1(饲料)的剂量混饲给予,连用10 d,通过观测给药前、给药9~10 d和休药5~6 d的母鸡产蛋率、种蛋品质及受精率、孵化率和出壳苗鸡健康状况、体重等指标,考察博普总碱散对种鸡及其种蛋是否存在生殖毒性。结果表明:与对照组相比,给予受试药物1、3、5倍剂量的3个试验组种鸡产蛋率、种蛋重、蛋壳强度、蛋白高度、蛋黄颜色及哈氏单位等蛋品质指标均无显著差异;与给药前和对照组种蛋受精率及孵化率相比,3个试验组在给药后9~10 d及休药5~6 d种蛋的受精率和孵化率有显著提高。这一研究提示博普总碱散对种鸡及种蛋的繁殖性能具有较好的安全性,且能提高种蛋的受精率和孵化率。

在模拟人工胃肠道环境中博落回主要生物碱类成分的稳定性特征分析

目的:为解释博落回中4个生物碱(原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱)生物利用低的原因,对这四个生物碱在模拟人工胃肠道环境下的稳定性进行考察。方法:采用HPLC测定博落回中4个生物碱在不同p H缓冲液、人工胃液(p H=1.3)和人工肠液(p H=6.8)中的稳定性。结果:原阿片碱和别隐品碱在酸性、中性、碱性、人工胃液及人工肠液环境下8 h回收率为97.16%~101.89%;血根碱在p H=6.8磷酸盐缓冲液、水、p H=7.8~8.0磷酸盐缓冲液及人工肠液中8 h回收率为48.81%~60.53%;白屈菜红碱在p H=5.8磷酸盐缓冲液、p H=6.8磷酸盐缓冲液、水及人工肠液中8 h的回收率为81.21%~93.48%;在p H=7.8~8.0磷酸盐缓冲液中8 h回收率为57.43%。结论:原阿片碱和别隐品碱的稳定性不受p H的影响,血根碱和白屈菜红碱随p H升高稳定性降低,博落回中4个生物碱在模拟人工胃肠道环境中的稳定性结果与其在不同p H环境中一致,为阐明博落回散在体内的药代动力学特点提供科学依据。

毛状根研究进展及其在博落回资源创新中的应用前景

发根农杆菌作为一种天然菌株可用于诱导多种植物产生毛状根性状。毛状根组织能够稳定高效地生产次生代谢产物,该研究领域正受到越来越多的关注。本文对发根农杆菌及毛状根的特性、遗传机制和应用进行了综述。同时结合本课题组前期研究基础,对毛状根在博落回资源创新与新药源途径开发上的应用前景进行展望。

博落回中四种生物碱的薄层鉴别研究

建立博落回药材中四种生物碱的薄层色谱(TLC)鉴别方法。开展利用二甲苯-甲醇(5∶1)展开剂分离鉴别博落回中的原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱;利用氯仿-二甲苯-甲醇-氨水(50∶10∶1∶0.1)展开剂分离鉴别博落回中血根碱和白屈菜红碱;利用环己烷-丙酮(3∶2)展开剂分离鉴别博落回中原阿片碱和别隐品碱的系统研究。结果表明建立的薄层方法简便,准确和稳定,可以用于控制博落回药材的质量。

兽用原料药博普总碱的HPLC特征谱图的建立

建立HPLC特征谱图控制兽用原料药博普总碱的质量。HPLC特征谱图包含4个特征峰,用对照品定性鉴别4个特征峰分别为原阿片碱、别隐品碱、血根碱和白屈菜红碱。考察检测波长、流动相条件、柱温、流速、色谱柱品牌对各特征峰相对保留时间的影响,确定优化后的高效液相条件,并具有良好的精密度、稳定性和重复性。分析15批博普总碱原料药的液相图谱,样品的相似度均大于0.95,并对特征峰的相对保留时间进行了规定,为原料药博普总碱质量控制提供了依据。

黄芩防治畜禽呼吸道疾病的作用机制及产品应用综述

在目前畜禽规模化、集约化养殖中,由于养殖密度加大,再加上很多地方应用全封闭的养殖场所,造成养殖场地空气流通缓慢,空气质量较差,呼吸道疾病成为畜禽的主要疾病之一。如果在养殖过程中防治失当,容易造成重大经济损失。呼吸道疾病的病原性因素主要是细菌和病毒,而中药黄芩在抑菌、抗病毒、抗炎和抗氧化等方面均有较好防冶效果,在相关的药理药效方面积累了很多研究成果。对黄芩在呼吸道疾病相关领域的药理药效、临床应用及不良反应进行综述,为养殖行业更好地应用黄芩提供参考。

北京鸭对博落回散的耐受性试验

为了探究北京鸭对博落回散的耐受性,为博落回散在饲料中的安全添加剂量提供数据支持,试验将210只1日龄北京鸭分为5组,对照组饲喂不添加任何药物的基础日粮,30,90,150,300 mg/kg组分别饲喂含30,90,150,300 mg/kg博落回散的基础日粮,连续饲喂42 d,分别在14,28,42日龄早晨投料前称量北京鸭的体重,测定各组鸭在1~14、15~28、29~42、1~42日龄的生长性能;分别在14,28,42日龄采集血液,测定各组血常规与血清生化指标;42日龄时屠宰各组北京鸭,采集器官测定器官指数,进行病理解剖并观察组织病理学变化,评价北京鸭对不同剂量博落回散的耐受性。结果表明:与对照组相比,30,90,150 mg/kg组1~42日龄间的日增重和饲料转化率显著提高(P<0.05),300 mg/kg组呈下降趋势但差异不显著(P>0.05);各组在14日龄时血常规与血清生化指标差异不显著(P>0.05);在28,42日龄时,30,90,150 mg/kg组白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量与对照组差异不显著(P>0.05),300 mg/kg组与对照组差异显著(P<0.05);300 mg/kg组肝脏重和肝脏指数显著高于对照组(P<0.05)。90,150,300 mg/kg组均有1只北京鸭死亡,对照组有2只死亡;150 mg/kg组有1只北京鸭肝脏颜色偏黄,300 mg/kg组有4只北京鸭肝脏肿大、颜色偏黄,发生轻度脂肪变性、肝细胞肿大、胞浆内发现近圆形空泡等病理变化。说明在饲料中添加30~90 mg/kg的博落回散可安全有效地促进北京鸭生长,当添加量为300 mg/kg时,北京鸭表现不耐受,生长性能下降,饲料转化率降低,并表现出肝脏损伤。

猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因的分析

猪胸膜肺炎放线杆菌细胞分裂的形态利用扫描电镜进行观察。根据文献报道收集细菌细胞分裂体形成的相关基因信息;应用BLAST、Smart和Pfam软件和GenBank中的有关序列,分析参与猪胸膜肺炎放线杆菌分裂体形成相关基因;根据GenBank中已报道的DNA序列设计Fts基因家族基因的引物,以App血清1型基因组为模板经PCR扩增有关基因片段并测序,再通过序列比对进行同源性分析。结果,猪胸膜肺炎放线杆菌细胞分裂主要发生在细胞中部,参与分裂体形成的相关基因有24种,其中Fts家族基因包括FtsZ,FtsB、FtsL、FtsH、FtsW、ZipA、FtsE、FtsX、FtsQ和FtsA共10种,这些基因在不同的血清型有很高的同源性。但未发现与FtsZ聚合相关的MinC、MinD和MinE。结果表明,猪胸膜肺炎放线杆菌的细胞分裂主要发生在细胞中部,分裂体形成机制与其他细菌存在差异。

猪胸膜肺炎放线杆菌感染小鼠所致炎症中TLR-4信号通路涉及细胞焦亡

【目的】探讨革兰氏阴性菌胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus Pleuropneumoniae,APP)感染小鼠致肺病变的分子细胞机制,以改善猪传染性胸膜肺炎的防治。【方法】滴鼻法感染小鼠,观察肺部眼观病变,石蜡切片HE染色观察肺组织病变。RT-PCR和q PCR方法检测小鼠肺部的Caspase-1、Caspase-3、TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18、TLR-4表达量的变化。【结果】小鼠在感染后48h内死亡,解剖后观察小鼠肺部有严重出血和炎症。实验组小鼠肺组织IL-1β、IL-6、IL-18和TNF-α的表达水平显著增加;TLR-4的表达量显著上调;肺部组织Caspase-1的表达水平明显升高,而Caspase-3的表达水平未见明显变化。【结论】TLR-4信号通路可能参与APP感染引起的肺部炎症的发生,APP感染后激活TLR-4信号通路使有关细胞释放炎症因子,引起的肺部炎症。炎症可能涉及Caspase-1参与的细胞焦亡。

猪肝微粒体的制备与活性测定

为了获得高活性的猪肝微粒体用于药物代谢研究,试验采用钙沉淀法制备猪肝微粒体,考马斯亮蓝法测定肝微粒体蛋白浓度,可见光-紫外分光光度法测定肝微粒体细胞色素P450酶系含量。结果表明:猪肝微粒体的蛋白含量为(10.653±0.256)mg/g,细胞色素P450含量为(0.903±0.021)nmol/mg,细胞色素b5含量为(0.429±0.038)nmol/mg,氨基比林-N-脱甲基酶活性为(0.226±0.010)μmol/(min.mg),红霉素-N-脱甲基酶活性为(0.055±0.008)μmol/(min.mg),NADPH-细胞色素C还原酶活性为(4.658±1.170)nmol/(min.mg)。说明钙沉淀法制备的猪肝微粒体具有较好的活性,所用的可见光-紫外分光光度法灵敏、可靠,重复性较好。

不同胁迫博落回根中生物碱含量变化及相关基因表达量分析

本研究通过对PEG6000模拟干旱以及机械受损等方法胁迫博落回,采用HPLC方法检测博其根中原阿片碱、别隐品碱、血根碱、白屈菜红碱的含量,结果 30%PEG6000模拟干旱以及机械受损均可使博落回根中终产物生物碱血根碱、白屈菜红碱含量上升,中间产物原阿片碱、别隐品碱含量下降;且血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调;用实时荧光定量RT-PCR检测生物碱合成相关基因的表达量,血根碱、白屈菜红碱合成基因DBOX、P6H表达量上调。适当干旱以及机械受损有利于博落回根中血根碱、白屈菜红碱积累,为其在干旱、石漠化地区种植以及在种植过程中结合家畜喂养提供理论依据。

温度对小果博落回种子萌发的影响与血根碱合成基因表达分析

博落回属植物属于罂粟科,包括两个种:博落回Macleaya cordata (Willd.) R. Br.与小果博落回Macleaya microcarpa (Maxim.) Fedde.。博落回属植物中含有一些重要的药用活性成分。一些包含博落回提取物的产品广泛用于饲料添加剂和其他领域。当前对于博落回属植物资源的研究主要集中于博落回,而对小果博落回资源的研究较少。主要是由于小果博落回无菌苗较难获取,使得遗传转化等方面的研究很难进行。本研究在5个不同温度下筛选出小果博落回最优的萌发温度,并且分析了3个不同时期的小果博落回无菌苗中血根碱合成相关基因的表达情况。除此以外,还比较了同一时期的小果博落回与博落回的根、茎、叶组织中的血根碱合成相关基因的表达情况,为下一步小果博落回的资源开发提供了前期研究基础。

博落回愈伤抗除草剂Bar基因的转化以及抗性功能的检测

本研究成功建立了一个全新的以博落回愈伤为外植体的遗传转化体系。该遗传体系将抗草丁膦的Bar基因整合到pcambia2301质粒,构建植物载体,通过农杆菌介导转染博落回愈伤,选用Bar基因为筛选标记,采用PPT进行筛选,对转染的愈伤和组培苗用PCR、RT-PCR、GUS染色等方法验证为阳性,获得了抗除草剂的博落回植株。该遗传体系相比以叶片为外植体、抗生素为筛选标记的遗传体系,更能加快转化时间,缩短转化周期,而且假阳性更低,对于博落回生物学研究具有一定帮助。