干扰素-γ对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察干扰素 γ (IFN γ)对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1 (ABCA1 )表达的影响 .以便探讨IFN γ在动脉粥样硬化发生发展中的作用 .采用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量 .运用逆转录 多聚酶链反应和蛋白质印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白质的表达 ,采用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度 .发现IFN γ引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性增加 ,而ABCA1mRNA和蛋白质表达、细胞平均ABCA1荧光强度以及apoA 1介导的胆固醇流出呈时间依赖性减少 ,细胞内胆固醇增多 .结果表明IFN γ抑制THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出 。

肝X受体α在泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察肝X受体α (LXRα)在THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的调控作用 .结果发现 ,2 2 (R ) 羟基胆固醇剂量依赖性增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 ,而DIDS剂量依赖性减少THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 .逆转录聚合酶链反应显示 ,2 2 (R) 羟基胆固醇可增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞LXRαmRNA的表达 ,DIDS可抑制THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞LXRαmRNA的表达 .结果提示 ,LXRα在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的调控作用 。

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用

目的 :以THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,探讨ABCA1在THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中的作用。方法 :用液体闪烁计数器检测胆固醇流出。RT -PCR方法检测ABCA1mRNA的表达。结果 :氧化型低密度脂蛋白可增加THP - 1巨噬细胞胆固醇流出 ,2 2 (R) -羟基胆固醇剂量依赖性增加THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 ,而DIDS剂量依赖性减少THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出 ;逆转录聚合酶链反应显示 ,2 2 (R) -羟基胆固醇可增加THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达 ,DIDS可抑制THP - 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1mRNA的表达。结论 :ABCA1在巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出中起着重要的作用 ,并为开发和寻找对ABCA1表达有特异性调控作用的药物提供了新的思路。

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在泡沫细胞胆固醇流出中的作用

以THP 1细胞源泡沫细胞为研究对象 ,观察三磷酸腺苷结合盒转运体A1在单核—巨噬细胞源泡沫细胞胆固醇流出中的作用。实验采用流式细胞术检测的方法 ,来判断三磷酸腺苷结合盒转运体A1激动剂 2 2 (R) 羟基胆固醇和抑制剂 4 ,4 -二异硫氰酸二丙乙烯 2 ,2 -二磺酸 (4 ,4’ diisothiocyanostilbene 2 ,2’ disulfonicacid ,DIDS)对THP 1细胞源泡沫细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响。实验结果发现 ,2 2 (R) 羟基胆固醇作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显增加细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达 ,流式细胞术检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的平均荧光强度从 0h的 31 .1增加到 2 4h的 4 5 .2 ;而DIDS作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显降低细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的蛋白表达 ,平均荧光强度从 0h的 2 9.4降低到 2 4h的1 0 .4。胆固醇流出实验发现 ,2 2 (R) 羟基胆固醇作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显增加细胞胆固醇流出 ;而DIDS作用THP 1细胞源泡沫细胞不同时间后 ,能明显降低细胞胆固醇流出。这些结果表明 ,三磷酸腺苷结合盒转运体A1在THP

Rolipram对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和ABCA1表达的影响

目的 以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,探讨磷酸二酯酶抑制剂rolipram对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出的影响。方法 用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,运用逆转录 -多聚酶链反应和Westernblot印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白的表达 ,采用低pH值EIA法测定细胞内cAMP水平。结果 实验显示PDE4抑制剂rolipram能引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞cAMP水平、ABCA1表达和apoA 1介导的胆固醇流出成平衡增加 ,而细胞内总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯明显减少。结论 PDE4抑制剂rolipram增加THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1表达及细胞内胆固醇流出 。

糖尿病小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的变化

用贵州小香猪建立 2型糖尿病动物模型 ,探讨糖尿病小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的变化 .采用高脂高蔗糖饲料喂养贵州小香猪 ,建立 2型糖尿病动物模型 .血浆总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇和葡萄糖的浓度均用氧化酶法测定 ,血浆游离脂肪酸 (FFA)用比色法测定 ,采用逆转录 聚合酶链反应、蛋白质印迹和免疫组织化学分别检测ABCA1mRNA和蛋白质的表达 .喂养 6个月后 ,实验组与正常对照组比较 ,空腹血糖值明显升高 ;空腹胰岛素水平在头 3个月轻度升高 ,在第 6个月末其水平降低 ;血清总胆固醇、甘油三酯和游离脂肪酸水平升高 ;肝组织、冠状动脉、肾组织ABCA1表达上调 ,同时观测到糖尿病小型猪肝组织LXRα表达上调 .结果提示高脂高蔗糖饲料可引起小型猪脂质和糖代谢紊乱 ,并导致肝组织、冠状动脉和肾组织ABCA1表达上调以及肝组织LXRα表达上调 .

动脉粥样硬化小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的变化

用贵州小香猪建立动脉粥样硬化动物模型,探讨动脉粥样硬化小型猪三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达的变化. 采用血管内膜损伤法加高脂高胆固醇饲料喂养贵州小香猪,建立动脉粥样硬化动物模型. 血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇的浓度均用氧化酶法测定,采用逆转录聚合酶链反应检测ABCA1mRNA水平,蛋白质印迹和免疫组织化学检测ABCA1蛋白质的表达. 喂养12个月后,实验组与正常对照组比较,空腹血浆总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白胆固醇水平升高;实验组小型猪主动脉、髂动脉、颈总动脉和冠状动脉可见动脉粥样硬化斑块和脂质条纹;实验组小型猪肝组织、主动脉、小肠组织ABCA1表达上调. 结果提示,采用血管内膜损伤法加高脂高胆固醇饲料喂养小型猪可建立动脉粥样硬化动物模型. 动脉粥样硬化小型猪肝组织、主动脉和小肠组织ABCA1表达上调.

糖尿病新西兰兔心、肾NOS和抗氧化酶的变化

目的 :探讨糖尿病新西兰兔心、肾一氧化氮合酶 (NOS)活力和抗氧化酶活力变化以及它们在糖尿病发病机制中的作用。方法 :采用高脂高糖饲料喂养新西兰兔 ,建立一种新的糖尿病动物模型。观察糖尿病新西兰兔心、肾一氧化氮水平 ,一氧化氮合酶 (NOS)活力及抗氧化酶活力的变化。结果 :糖尿病新西兰兔出现大量蛋白尿(P <0 0 5 ) ;肌酐清除率 (CCr)明显高于对照组 (P <0 0 1) ;心脏组织中NO-2 水平和NOS活力明显低于对照组 (P <0 0 5 ) ,而肾脏组织中NO-2 水平和NOS活力明显高于对照组 (P <0 0 1) ;血糖及胰岛素明显高于对照组 (P <0 0 1) ;超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、过氧化氢酶 (catalase)活性都明显低于对照组 (P <0 0 1)。结论 :糖尿病新西兰兔心、肾中的NO-2 水平和NOS活力异常 ,抗氧化酶活力明显降低 ,糖尿病的心。

三磷酸腺苷结合盒转运体A1在巨噬细胞胆固醇流出中的作用

Tangier disease is caused by mutations in ATP binding cassette transporter A1( ABCA1). ABCA1 interacts with lipid-free apolip oproteins, promoting phospholipid and cholesterol efflux from cells and giving r ise to HDL particles. ABCA1 may act as a phospholipid translocase facilitating p hospholipid binding to apoA-I. ABCA1 gene expression is upregulated in cholester ol-loaded cells as a result of activation of LXR/RXR-mediated gene transcription . LXR and RXR coordinately induce a battery of genes mediating cellular choleste rol efflux, centripetal cholesterol transport, and cholesterol excretion in bile . Small-molecule activators of LXR/RXR or other stimulators of macrophage or int estinal cholesterol efflux hold great promise as future treatments for atheroscl erosis.

ABC转运体超家族对胆固醇吸收和血浆植物甾醇水平的调节作用

人们对控制胆固醇吸收和血浆植物甾醇水平的分子基础了解尚少 .ABCG5和ABCG8的发现使得理解甾醇吸收的分子基础获得突破 .ABCG5和ABCG8主要涉及植物甾醇代谢 ,而其他基因涉及胆固醇吸收 .最近 ,一种新胆固醇吸收阻止剂 (ezetimibe)的问世 ,给胆固醇吸收和血浆植物甾醇水平基因控制研究提供新的亮点 .主要综述胆固醇吸收和血浆植物甾醇水平的基因控制 ,关注调节它们的共同点和不同点 。

载脂蛋白A-Ⅰ对三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响

目的:以THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,观察载脂蛋白A-I对THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)的影响,从而探讨载脂蛋白A-I对动脉粥样硬化(As)发生发展的影响。方法:用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量,运用逆转录-多聚酶链反应和Western印迹分别检测ABCA1mRNA与ABCA1蛋白的表达,用流式细胞术检测细胞平均ABCA1荧光强度。结果:载脂蛋白A-I引起THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少,而ABCA1蛋白质水平、细胞平均ABCA1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加,但ABCA1mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂(leupeptin和ALLN)增加ABCA1蛋白质水平,而其它蛋白酶抑制剂(pepstatinA、aprotinin及phosphoramiddon)不增加ABCA1蛋白质水平,蛋白体抑制剂(lactacytin)和溶酶体抑制剂(NH4Cl)也不影响ABCA1蛋白质水平。结论:巯基蛋白酶可降解THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质,而载脂蛋白A-I可阻碍巯基蛋白酶降解ABCA1蛋白质,从而提高THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞ABCA1蛋白质水平,增加细胞内胆固醇流出,降低细胞内胆固醇聚积。

氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

观察氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和胆固醇流出的影响。用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,流式细胞术检测细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度。THP 1巨噬细胞与 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,油红O染色 ,显微镜下观察 ,可见细胞内脂滴由小而少逐渐地变为大而多 ,特别到 4 8h时非常明显地增多变大。油红O染色细胞计数分别为 2 6± 3个、30± 4个、4 3± 5个、5 4± 5个。 2 4h和 4 8h时分别与 6h时比较 ,油红O染色细胞明显增多 (P <0 .0 5 )。用 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育THP 1巨噬细胞不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,测量胆固醇流出。结果显示氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞胆固醇流出的影响依时间不同而有所不同 ,在 6、12、2 4、4 8h时胆固醇流出分别为 2 .2 %、2 .9%、6 .3%、7.8% ,2 4h、4 8h时分别与 6h时比较 ,胆固醇流出明显增多 (P <0 .0 5 )。氧化型低密度脂蛋白使THP 1巨噬细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度从 6h时的 11.1增加到 4 8h的 32 .2。提示氧化型低密度脂蛋白可上调THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达并增加胆固醇流出。

绞股蓝总皂甙预防和延缓家兔休克的作用

目的 :探讨绞股蓝总皂甙 (GPS)对注射内毒素的家兔休克的作用。方法 :动物静脉麻醉后 ,取血测量血小板数、血浆纤维蛋白原含量、凝血酶原时间和NO水平。通过二道生理记录仪测量血压。动物处死后 ,取血再次测量血小板数、血浆纤维蛋白原含量、凝血酶原时间和NO水平。结果 :对照组实验前后各指标没有出现明显的变化 (P >0 .0 5 )。内毒素 (LPS)组平均动脉血压 (MAP) ,在实验后 4,6h明显低于实验前和对照组 (P <0 .0 1) ,实验后血小板数和纤维蛋白原明显低于实验前 (P <0 .0 1) ,NO明显高于实验前 ,凝血酶原时间明显延长。GPS组实验后的NO浓度高于实验前和对照组 (P <0 .0 5 ) ,但低于LPS组实验后的NO浓度 (P <0 .0 5 ) ;实验后血小板数明显低于实验前和对照组 (P <0 .0 1) ,但高于实验后LPS组 (P <0 .0 5 ) ;实验后纤维蛋白低于实验前和对照组 (P <0 .0 5 ) ,但高于实验后的LPS组 (P <0 .0 5 ) ;实验后的凝血酶原时间长于实验前和对照组 (P <0 .0 5 ) ,但短于实验后的LPS组 (P <0 .0 5 )。结论

LXR和ABCA1对体内胆固醇代谢的调节作用

肝外组织胆固醇返回肝脏,在肝脏通过生成胆汁酸排出,这一过程称为胆固醇逆转运。研究表明LXRs在维持体内胆固醇平衡方面起着感受器作用,通过关键靶基因转录的控制来调节胆固醇分解、储存、吸收和转运。LXR和RXR激动剂可上调巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和G1(ABCA1,ABCG1)的表达,导致细胞内胆固醇流出。以LXR作为靶点的药物将为治疗高胆固醇血症和抗As提供新的希望。

ABCA1在动脉粥样硬化发生与发展中的作用

腺苷三磷酸结合盒转运体A1(ATPbindingcassettetransporterA1,ABCA1)是一种整合膜蛋白 ,它以ATP为能源 ,促进细胞内游离胆固醇和磷脂的流出 ,在胆固醇逆转运 (RCT)和HDL生成的起始步骤中起重要作用 ,被称作RCT守门人。核受体PPARs、LXRs和FXR对ABCA1蛋白的表达具有调控作用。人体 5 0种组织中存在有ABCA1mRNA ,在胰、肝、肺、肾上腺和胎儿组织中ABCA1表达水平最高 ,ABCA1功能障碍将导致巨噬细胞内大量的胆固醇沉积而成为泡沫细胞 ,继而浸润血管壁 。

糖尿病新西兰兔血液一氧化氮和抗氧化功能的改变

探讨糖尿病新西兰兔一氧化氮 (NO)水平和抗氧化酶活力变化以及它们在糖尿病发病机制中的作用。方法 :采用高脂高糖饲料喂养新西兰兔 ,建立糖尿病动物模型。观察糖尿病新西兰兔血液中的一氧化氮水平 ,一氧化氮合酶 (NOS)活力及抗氧化酶活力的变化。结果 :糖尿病新西兰兔血浆中NO水平和NOS活力明显增高 ,抗氧化酶活性低于喂正常饲料新西兰兔。结论 :糖尿病的起因可能与血浆中NO水平和抗氧化功能的异常变化有关。

载脂蛋白AⅠ与三磷酸腺苷结合盒转运体A1相互作用的机理探讨

以THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象 ,观察载脂蛋白AⅠ对THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞胆固醇流出和三磷酸腺苷结合盒转运体A1的影响 ,以便探讨载脂蛋白AⅠ对动脉粥样硬化发生发展的影响。用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,高效液相色谱分析细胞内总胆固醇、游离胆固醇和胆固醇酯含量 ,运用逆转录—多聚酶链反应和Western印迹分别检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA与三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白的表达 ,采用流式细胞术检测细胞平均三磷酸腺苷结合盒转运体A1荧光强度。实验显示载脂蛋白AⅠ引起THP 1巨噬细胞源性泡沫细胞总胆固醇、游离胆固醇与胆固醇酯呈时间依赖性减少 ,而三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平、细胞平均三磷酸腺苷结合盒转运体A1荧光强度以及细胞内胆固醇流出呈时间依赖性增加 ,但三磷酸腺苷结合盒转运体A1mRNA没有明显变化。巯基蛋白酶抑制剂 (leupeptin和ALLN)增加三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平 ,而其它蛋白酶抑制剂 (pepstatinA、aprotinin及phosphoramiddon)不增加三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平 ,蛋白体抑制剂 (lactacytin)和溶酶体抑制剂 (NH4 C1)也不影响三磷酸腺苷结合盒转运体A1蛋白质水平。提示巯基蛋白酶可快速分解THP

绞股蓝总皂苷对注射内毒素家兔血流动力学和继发DIC的影响

目的 探讨绞股蓝总皂苷 (GPS)对注射内毒素的家兔血流动力学和继发DIC的影响。方法 动物静脉麻醉后 ,取血测量血液某些指标和NO水平。通过二道生理记录仪和SMUP A型生物信号处理仪测量血压及血流动力学指标。动物处死后 ,取血再次测量血液某些指标和NO水平。结果 对照组实验前后各指标没有出现明显的变化 (P >0 0 5 )。内毒素 (LPS)组血流动力学指标在实验后 4h、6h时与实验前和对照组比较P <0 0 1,实验后血小板数和纤维蛋白原明显低于实验前 (P <0 0 1) ,实验后NO-2 明显高于实验前 ,实验后的凝血酶原时间明显延长。GPS组实验后 4h时血流动力学指标明显好于LPS组 (P <0 0 1) ;实验后 6h时 ,血流动力学指标与实验前和对照组比较较差 (P <0 0 5 ) ,但好于LPS组 (P <0 0 5 ) ;实验后的NO-2 浓度高于实验前和对照组 (P <0 0 5 ) ,但低于LPS组实验后的NO-2浓度 (P <0 0 5 ) ;实验后测量的血液指标好于LPS组 (P <0 0 5 )。结论 绞股蓝总皂苷对注射内毒素的家兔血流动力学有保护作用和抗内毒素休克 ,预防继发DIC的作用。