免疫抑制介导大鼠侵袭性黑曲霉菌肺病模型的构建与评价

目的 本研究建立免疫抑制大鼠侵袭性黑曲霉菌肺病模型,为抗侵袭性肺曲霉病药物药效学评价及机制研究提供理论支持。方法 将60只SD大鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺对照组、环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组,每组12只动物。每天进行一般临床观察,分别于造模第3、7天采用ELISA法检测血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、血清半乳甘露聚糖(GM)水平,并检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)细胞比例及白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)含量,同时观察肺泡灌洗液黑曲霉菌负荷和大鼠肺组织形态学变化。结果 环磷酰胺对照组、环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠造模后均出现自主活动减少及竖毛,且环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠伴有呼吸急促,可闻及肺部湿音;与正常对照组比较,环磷酰胺对照组大鼠血中CD4^(+)、WBC、Neu、IgG、IgM水平均显著减少,CD8^(+)比例显著增加(P<0.05,P<0.01);与环磷酰胺对照组比较,环磷酰胺+真菌感染中、高剂量组大鼠血中IgG、IgM、CD4^(+)水平均显著减少(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠血中WBC、Neu水平均显著减少(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染中、高剂量组大鼠血中CD8^(+)水平显著升高(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠血中GM水平及肺泡灌洗液黑曲霉菌负荷均显著增加(P<0.05,P<0.01);环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠肺组织出现菌丝分布和肺泡上皮破坏、肺泡内支气管上皮杯状细胞增多、炎症细胞浸润,其病变程度与造模剂量呈正相关。结论 本研究采用黑曲霉菌联合环磷酰胺免疫抑制剂构建侵袭性黑曲霉菌肺病模型,病程与菌液浓度和造模时间呈正相关,证实细胞免疫在该病发病机制方面中发挥重要作用,同时免疫球蛋白也可影响侵袭性肺曲霉病疾病的发展过程,推测侵袭性肺曲霉病发病机制可能与体液免疫中免疫球蛋白水平有关。

雪貂在抗感染药物非临床研究中的应用

雪貂应用于抗感染药物评价的优势在于病原微生物(尤其是病毒株)能不经宿主适应直接进行感染和传播,且动物感染后的临床症状与人极为相似。虽然雪貂在抗病毒药物的研发中起到了极为重要的作用,但其应用范围仍有一定的局限性,可能与雪貂缺少相应的实验动物饲养和应用的国家级标准,缺乏特异性的诊断和检测试剂等因素有关。本文对雪貂作为感染疾病模型的特点进行总结,并汇总分析了雪貂在抗感染药物研究中的应用方向,旨在促进雪貂作为实验动物的标准化应用。

口腔菌群参与槟榔提取物诱发大鼠口腔溃疡的作用研究

目的通过槟榔提取物构建大鼠口腔溃疡模型,观察口腔内菌群结构变化及多样性特征,探索口腔菌群和局部炎性因子参与槟榔提取物诱发大鼠口腔溃疡的发病作用机制研究,为临床防治口腔溃疡提供理论支持。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物治疗组(桂林西瓜霜,8 mg/d,连续7 d),10只/组。大鼠口腔黏膜经皮下注射10 g/mL的槟榔提取物,复制大鼠口腔溃疡模型。通过观察溃疡面积、溃疡评分、局部组织口腔肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-8水平,并取口腔黏膜组织进行HE染色,观察其组织形态学的变化,采用高通量测序方法分析口腔微生物菌群结构分布及微生物群落多样性。结果与正常组比较,模型组大鼠溃疡面积显著增大,溃疡评分显著上升(P<0.01),口腔黏膜组织TNF-α、IL-2、IL-8水平均显著升高(P<0.01),大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P<0.05)、韦荣球菌属(Veillonella,P<0.001)均显著减少,模型组大鼠口腔黏膜上皮细胞增生或局灶性坏死,黏膜固有层水肿、出血,并伴有大量的中性粒细胞和单核细胞浸润;与模型组比较,药物治疗组大鼠溃疡面积显著减少(P<0.05,P<0.01),溃疡评分显著减少(P<0.05),口腔黏膜组织TNF-α(P<0.01)、IL-2(P<0.05)、IL-8(P<0.05)水平均显著降低,大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P<0.001)、韦荣球菌属(Veillonella,P<0.01)显著增加,葡萄球菌属(Staphylococcus,P<0.01)显著减少,口腔黏膜组织病变程度有明显改善。结论槟榔提取物可成功复制大鼠口腔溃疡模型,其发病机制可能与口腔正常菌群水平降低,潜在致病菌水平升高,破坏其口腔菌群微生物平衡,进而破坏机体免疫系统,引起局部促炎因子升高有关。

茅岩莓提取物治疗放射性口腔溃疡的作用研究

目的采用X射线复制大鼠放射性口腔溃疡模型,对茅岩莓提取物治疗放射性口腔溃疡的效果进行评价。方法SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为正常对照组,模型对照组,金因肽组(5000 IU·kg^(-1)),茅岩莓提取物低、中、高(16、32、64 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只。各组大鼠按15 Gy剂量采用X射线照射大鼠口部及内侧口腔黏膜,复制放射性口腔溃疡模型。分别于造模后24 h进行药物干预,2次·d^(-1),连续14 d。每日对各组动物进行一般临床观察,定期监测体重、摄食量及口腔黏膜评分,末次给药后采集各组大鼠口腔黏膜,检测口腔黏膜组织中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量,并进行组织病理学检查。结果金因肽和低、中、高剂量茅岩莓提取物均可提高动物体重增长率和摄食量;金因肽和中、高剂量茅岩莓提取物可显著降低口腔黏膜评分和IL-6表达(P<0.05,P<0.01),减轻口腔黏膜病变程度;金因肽和高剂量茅岩莓提取物可显著降低口腔黏膜组织IL-1β表达(P<0.05,P<0.01)。结论茅岩莓提取物对放射性口腔溃疡具有修复作用,其作用可能与调节口腔黏膜炎症因子的水平相关。

定量口鼻吸入法建立大鼠慢性阻塞性肺病模型

目的 比较烟雾经口鼻吸入+脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)气管滴注和烟雾全身暴露+脂多糖气管滴注诱导的大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)模型的差异,为COPD模型的构建提供新的造模方法。方法 将90只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、烟雾全身暴露组、烟雾口鼻吸入组,每组30只。烟雾全身暴露组采用“自制熏烟箱”进行烟雾的全身暴露,烟雾口鼻吸入组采用“定量吸烟装置”进行口鼻吸入烟雾,两组动物均每天进行烟雾暴露1次,每次60 min,连续8周,同时分别于造模第1、7、15、21天经气管注入LPS(1 mg/kg),以诱导建立COPD模型。分别对定量吸烟装置和自制烟熏箱生成的烟雾进行质量控制,包括烟雾颗粒的浓度稳定性和均一性验证,烟雾颗粒的粒径分布检测,并分别于造模4、6、8周通过肺功能检查、肺泡灌洗液炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的检测、组织病理学检查来比较两种造模方式的差异。结果 定量吸烟装置能生成浓度稳定的烟雾(浓度分别为1.1 mg/L(以颗粒计)和0.1 mg/L(以尼古丁计)),且其质量中值粒径(median mass aerodynamic diameter, MMAD)(以尼古丁计)为0.86μm,几何标准差(geometric standard deviation, GSD)为2.12,自制烟熏箱所生成的烟雾浓度稳定性和均一性偏差均明显大于定量吸烟装置;烟雾口鼻吸入组大鼠肺功能FEV_(0.2)/FVC、肺顺应性(Cdyn)指标均较烟雾全身暴露组下降更为明显,气道阻力(penh)增加更明显;烟雾口鼻吸入组大鼠肺泡灌洗液IL-6、TNF-α水平在造模后6周即可见显著增加,烟雾全身暴露组大鼠需至造模8周。烟雾口鼻吸入组和全身暴露组大鼠造模后支气管炎症病变程度基本相当,但口鼻吸入组的肺气肿病变程度更严重,且与全身暴露组(造模8周)相比,口鼻吸入组(造模6周出现)肺气肿病变出现统计学差异的时间更早;烟雾口鼻吸入组平均内衬间隔(mean linear intercept, MLI)在造模4~8周均显著增大,平均肺泡数(mean alveolar number, MAN)在造模6~8周均显著减少;烟雾全身暴露组仅造模8周可见MLI显著增大和MAN显著减少。烟雾口鼻吸入组肺功能指标(FEV_(0.2)/FVC、Cdyn、Penh)、肺泡灌洗液细胞因子水平(IL-6、TNF-α)、肺泡组织病理学变化(支气管严重和肺气肿病理评分、MLI、MAN)在造模后均可见显著的异常改变,但各指标变化的变异系数(CV%)明显小于烟雾全身暴露组的相应指标。结论 LPS(1.0 mg/kg)气管滴注联合烟雾全身暴露或烟雾口鼻吸入均能构建典型的大鼠慢性阻塞性肺病模型,其中烟雾口鼻吸入能缩短模型构建的造模周期,连续造模6周即可成模,表现为典型的慢性阻塞性肺病症状(肺通气功能障碍,支气管-肺脏慢性炎症浸润,并同时伴有肺气肿),且模型动物个体间的差异更小(烟雾口鼻暴露vs烟雾全身暴露,CV%值更小)。

大鼠真菌性中耳炎模型建立

目的建立白色念珠菌诱导的大鼠真菌性中耳炎模型,为药效评价提供动物模型支持。方法SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为正常对照组、空白注射组、潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组,每组10只。实验开始1~3 d,潮湿组每日对大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液,免疫抑制组每日经口灌胃给予0.81 mg/kg醋酸地塞米松药液,潮湿+免疫抑制组每日对大鼠右侧耳部滴入两次0.9%氯化钠注射液的同时每日经口灌胃给予0.81 mg/kg醋酸地塞米松药液。第4天,各组麻醉后,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组将1×10^(10)CFU/mL白色念珠菌悬液经鼓膜穿刺注入到大鼠右侧中耳腔,每只50μL,空白注射组大鼠注入等体积空白培养液,正常对照组不做任何处理;每日对潮湿组、潮湿+免疫抑制组大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液。造模期间,观察各组大鼠一般症状;造模第5、10、15天采集耳道分泌物进行白色念珠菌培养和革兰氏染色计数,造模第15天ELISA检测耳道灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),HE染色观察中耳组织病理学改变。结果与空白注射组相比,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠均出现不同程度中耳炎症状,IL-6、TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05,P<0.01),中耳出现不同程度的黏膜充血、水肿及炎性细胞浸润现象,且免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠耳道分泌物中白色念珠菌数量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论本实验使用鼓膜穿刺方式注射白色念珠菌建立真菌性中耳炎大鼠模型成功,在潮湿+免疫抑制条件效果更佳,可用来进行药效学作用的评价。

浅谈犬急性肾衰的诊治

急性肾衰是由于犬机体局部缺血或毒素堆积等因素引起肾小球的滤过功能下降或肾小管的重吸收功能减弱,导致肾脏在短时间内丧失排泄能力的一种肾脏疾病.

免疫抑制介导鲍曼不动杆菌耐药株感染性肺炎模型的建立

目的建立免疫力低下大鼠感染耐药株鲍曼不动杆菌肺炎模型,为临床防治细菌性肺炎提供动物模型支持。方法筛选鲍曼不动杆菌耐药株后,将48只SD大鼠随机分为正常组、环磷酰胺对照组(腹腔注射45 mg/kg环磷酰胺)、细菌感染组(气管滴注1.5×108 CFU鲍曼不动杆菌悬液)、细菌感染+免疫抑制组(腹腔注射45 mg/kg环磷酰胺+气管滴注1.5×108 CFU鲍曼不动杆菌悬液);采用流式细胞术检测感染前和感染后3、7 d外周血CD4+、CD8+、NK细胞比例;使用肺功能仪检测造模后3、7 d最大吸气流量(PIF)、最大呼气流量(PEF)、潮气量(Vt)、第2秒用力呼气容积/用力肺活量(FEV200/FVC);ELISA法检测肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α及IL-10水平;HE染色观察各组大鼠肺组织形态;细菌培养计数观察肺组织细菌负荷。结果环磷酰胺对照组、细菌感染组和细菌感染+免疫抑制组大鼠造模后均出现自主活动减少,细菌感染组和细菌感染+免疫抑制组大鼠可闻及肺部啰音;与正常组比较,环磷酰胺对照组大鼠外周血中CD4+及NK细胞中CD11b比例减少,CD8+比例增加,细菌感染组大鼠PIF、PEF、Vt及FEV200/FVC降低,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α水平增加,IL-10水平降低,肺组织细菌负荷增多,并伴有轻度的肺泡壁增宽和炎症细胞浸润(P<0.05,P<0.01);与环磷酰胺对照组和细菌感染组比较,细菌感染+免疫抑制组大鼠外周血中CD4+比例减少,CD8+比例增加,PIF、PEF、Vt及FEV200/FVC减少,肺泡灌洗液中IL-6、TNF-α水平增加,IL-10水平降低,肺组织细菌负荷增多,肺泡壁增宽和炎症细胞浸润程度加重,且细菌感染+免疫抑制组大鼠外周血NK细胞中CD11b比例显著低于细菌感染组(P<0.05,P<0.01)。结论本实验采用鲍曼不动杆菌、鲍曼不动杆菌联合环磷酰胺免疫抑制剂构建鲍曼不动杆菌感染的细菌性肺炎模型,均能成功构建鲍曼不动杆菌感染性肺炎模型,其中鲍曼不动杆菌联合环磷酰胺免疫抑制剂构建肺炎模型较为严重,可能与环磷酰胺降低机体细胞免疫功能,加重肺部细菌感染有关。