单纯疱疹病毒Ⅱ型感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞原癌基因c-sis及c-myc表达的影响

目的：观察单纯疱疹病毒Ⅱ型（ＨＳＶ－２）感染极早期对离体人动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ）原癌基因ｃ－ｓｉｓ及ｃ－ｍｙｃ表达的影响。方法：采用不同感染剂量的ＨＳＶ－２吸附单层ｈＡＳＭＣ１小时作为病毒感染细胞模型，应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法观察上述原癌基因表达。结果：病毒吸附细胞后０分钟、３０分钟、６０分钟，病毒感染组［５感染复数（ＭＯＩ）和１０ＭＯＩ；ＭＯＩ＝空斑形成单位／细胞数（ＰＦＵ／细胞数）］均比对照组的原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加，且基因表达与感染时间也有关。结论：ＨＳＶ－２感染可以诱导ｈＡＳＭＣ原癌基因ｃ－ｓｉｓ、ｃ－ｍｙｃ表达增加，该作用可能是病毒促进ｈＡＳＭＣ异常增殖进而参与动脉粥样硬化或血管成形术后再狭窄形成的分子机制之一。

中国人细胞色素P450IA1基因变异与吸烟相关性肺癌的风险

目的：探讨多环芳烃类致癌物代谢酶细胞色素Ｐ４５０ＩＡ１ 基因（ＣＹＰ１Ａ１） 多型性与中国人肺癌易感性的关系。方法：应用ＰＣＲＲＦＬＰ 方法，分析１５０ 例原发性肺癌和３９１ 例正常对照者ＣＹＰ１Ａ１ 基因的ｍ １、ｍ２ 和ｍ ４ 位点突变。以比值比（ＯＲ） 及其９５ ％ 可信区限（ＣＩ） 比较不同基因型与肺癌风险的关系，以及与吸烟的交互作用。结果：位于３＇端ＭｓｐＩ识别的位点（ ｍ１） 和位于第７ 外显子ＢｓｒＤＩ 识别的位点（ｍ２） 具多态性，而位于第７ 外显子由ＢｓａＩ识别的位点（ｍ ４） 未见有变异。ｍ１ 变异型等位频率在对照组中为０－３６，而在肺癌病例组中为０－４６ 。携带至少一个变异基因拷贝者发生肺癌的风险比携带野生基因型者高２ 倍（ＯＲ ２－３ ；９５％ ＣＩ１－９～２－９） 。分层分析发现，肺鳞癌患者中ｍ １ 变异基因型频率更高（０－４８） ，携带此种基因型者发生肺鳞癌的相对风险（ＯＲ） 为３－０（９５％ ＣＩ２－２ ～４－０） 。ｍ２ 变异与ｍ１变异密切关联，符合率达７６ ％ 。携带至少一个ｍ ２ 变异基因拷贝者的ＯＲ 为１－９ （９５％ ＣＩ１－６ ～２－４） 。此外，ＣＹＰ１Ａ１ｍ１ 变异与吸烟有明显的交互作用。

肺腺鳞癌54例外科疗效分析

目的 :总结探讨肺腺鳞癌切除术后的临床病理特点及预后。方法 :采用SPSS软件建立肺癌病例数据库并进行统计学分析 ;对其中 5 4例肺腺鳞癌的统计资料作进一步的理论及预后分析。结果 :5 4例肺腺癌中 ,周围型 42例 ,占 77 78% ,有淋巴结转移者 2 6例 ,转移率为 48 15 % (2 6 / 5 4) ,切除淋巴结总数 5 79枚 ,有转移淋巴结115枚 ,转移度为 19 89% (115 / 5 79)。根治性切除者 42例 ,姑息性切除者 12例。 5年生存率 :肺腺鳞癌为 37 0 4%(2 0 / 5 4) ,肺鳞癌为 6 4 2 2 % (2 6 3/ 5 6 9) ,肺腺癌为 36 96 % (170 / 46 0 ) ,肺未分化癌为 32 82 % (43/ 131)。结论 :肺腺鳞癌以周围型肿瘤多见 ,其淋巴结转移度明显高于肺鳞癌 (P <0 0 1) ,与肺腺癌相似 ;肺腺鳞癌的预后明显差于肺鳞癌 ,与肺腺癌无显著性差异。肿瘤成分比例与预后无关。

赖氨酰氧化酶基因在上消化道癌组织内的表达及临床意义

背景与目的:赖氨酰氧化酶(lysyloxidase,LO)是近来发现的肿瘤候选抑癌基因,国外研究发现其表达与乳腺及前列腺癌的复发转移有关,但有关该基因与上消化道癌复发、转移之间关系的研究至今未见报道。本研究的目的在于探讨LO基因在食管、贲门及胃三种上消化道恶性肿瘤转移中的作用。方法:应用RT-PCR的方法检测食管癌,贲门癌,胃癌组织及其相应癌旁正常组织内LO基因的表达情况。结果:研究表明LO基因在以上三种癌组织表达率分别为42.1%(16/38)、42.9%(9/21)及28.0%(7/25);伴有淋巴结转移的癌组织LO表达率均低于不伴淋巴结转移的组织(P<0.05);肿瘤浸润至深肌层以下者LO表达率降低(P>0.05)。该基因的表达与肿瘤组织学分型、浸润方式、肿瘤大小及淋巴结转移个数等无关(P>0.05)。结论:本研究实验表明LO基因表达率降低与上消化道肿瘤转移存在相关性,提示该基因可能在抑制肿瘤转移中起重要作用。

DMBT1基因在结肠癌组织内的表达及其临床意义

为探讨DMBT1基因表达与结肠癌转移的关系 ,应用RT PCR的方法检测结肠癌组织及其相应癌旁正常组织内DMBT1基因的表达。结果显示 ,结肠癌组织内及其相应癌旁正常组织内DMBT1基因的表达率分别为 36 1% (13/ 36 ) ,91 7% (33/ 36 ) ;伴有淋巴结转移的癌组织DMBT1表达率 (13 0 % )均低于不伴淋巴结转移的组织 (76 9% ) (P <0 0 5 ) ;肿瘤浸润至深肌层以下DMBT1表达率降低 (P <0 0 5 ) ;Dukes分期A +B期表达率为 73 3% (11/ 15 ) ,C +D为 9 5 % (2 / 2 1) ,两者有显著差异 (P <0 0 1)。实验表明 ,DMBT1基因表达率降低与结肠癌转移存在相关性 。

DMBT1基因在胃癌组织的表达及其临床意义

目的 探讨DMBT1基因表达与胃癌的关系。方法 应用RT PCR方法检测胃癌及癌旁组织DMBT1基因的表达。结果 胃癌组织及癌旁组织DMBT1基因的表达率分别为 2 2 .9% (11/ 4 8)和 89.6 % (43/4 8) ;伴周围淋巴结转移的癌组织的DMBT1表达率 9.7% (3/ 31)均低于不伴周围淋巴结转移的癌组织的表达率76 .5 % (13/ 17) (P <0 .0 1) ,该基因的表达与肿瘤组织学分型、浸润方式及肿瘤大小等无关 (P均 >0 .0 5 )。结论 DMBT1基因表达率降低与胃癌转移有关 。

一氧化氮对培养的兔动脉平滑肌细胞c-fos及c-jun基因表达的影响

目的：研究一氧化氮对动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达的影响及其机制。方法：①用贴块法培养兔动脉平滑肌细胞。②细胞计数判定一氧化氮，ＦｅＳＯ４，亚甲蓝有无细胞毒作用。③用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ。④用地高辛标记检测试剂盒进行ＲＮＡＤＮＡ斑点杂交。结果：在没有细胞毒作用的前提下，一氧化氮明显抑制兔动脉平滑肌细胞的ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达，而ＦｅＳＯ４和亚甲蓝均对抗这种作用。结论：一氧化氮通过ｃＧＭＰ途径抑制动脉平滑肌细胞ｃｆｏｓ及ｃｊｕｎ基因表达，很可能是它抑制动脉平滑肌细胞增殖的重要机制之一。

胎儿动脉平滑肌细胞培养方法的研究

目的：对胎儿动脉平滑肌细胞（ｈＡＳＭＣ） 培养方法进行研究。方法：贴块法、酶解法、贴块＋ 酶解法。结果：３ 种方法成功培养了胎儿动脉平滑肌细胞，培养的细胞呈典型“峰谷”样生长，透射电镜下可见胞浆内含有肌丝束及其相联的致密体。结论：贴块法培养ｈＡＳＭＣ生长周期较长，但成功率较高；酶解法的消化程度不易掌握，但其生长周期较前者短４～５ ｄ；二者相结合法的贴块培养细胞从组织块中迁移萌出时间比常规贴块法短１ ～２ ｄ。

RASSF1基因不同转录本在肺癌组织中的转录表达及临床意义

目的 探讨RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达情况及其临床意义。方法采用RT PCR方法检测 5 1例肺癌癌组织及相应癌旁正常组织中RASSF1A、RASSF1B及RASSF1CmRNA的表达情况。结果 (1) 3种不同转录本在癌旁正常肺组织中均表达 ;在癌组织中 ,RASSF1A及RASSF1B存在较高的表达缺失 ,其表达缺失率分别为 5 4 .9% (2 8/ 5 1)和 37.3% (19/ 5 1) ,RASSF1C则全部表达。 (2 )RASSF1A表达与肺癌淋巴结转移及病理分期有关 ,淋巴结转移者及晚期病例均存在较高的RASSF1A表达缺失 (P <0 .0 5 )。 (3)RASSF1B和RASSF1C表达与肺癌分期、组织学类型、分化程度及吸烟指数等均无显著相关性 (P >0 .0 5 )。结论 RASSF1基因 3种不同转录本在肺癌中的表达存在明显差异 ,其中转录本A与肺癌淋巴结转移及病理分期相关 ,是一新型肺癌抑癌基因。

RASSF1 A转录本在肺癌组织中表达及其临床意义

目的 探讨RASSF1A(RAS相关区域家族 1A)基因转录表达与肺癌发生、发展的关系。方法 采用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)的方法检测 4 7例肺癌患者癌组织及相应癌周正常组织中RASSF1AmRNA的表达水平。结果 (1)RASSF1AmRNA在所有正常组织中表达 ,而在肺癌癌组织中存在较高的表达缺失率 (5 3 2 % )。 (2 )淋巴结转移阳性者癌组织中RASSF1AmRNA表达缺失率 (70 4 % )明显高于淋巴结转移阴性者 (30 0 % ) (P <0 0 1) ;(3)RASSF1AmRNA表达缺失率与肺癌分期有关 ,越晚病例RASSF1A表达缺失率越高 (P <0 0 5 ) ;(4 )RASSF1AmRNA表达缺失与肿瘤组织学类型、肿瘤分化程度及吸烟指数未见显著相关 (P >0 0 5 )。结论 RASSF1A转录表达缺失 ,它可能参与调控肺癌的发生、发展过程 ,并进而影响其生物学特点及预后。

DMBT1基因在上消化道癌组织中的表达及其意义

目的 探讨DMBT1基因转录表达异常在人上消化道癌组织发生、发展中的作用。方法 应用逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测 38例食管癌、2 1例贲门癌、2 5例胃癌肿瘤组织及其相应癌旁正常组织中DMBT1mRNA的表达缺失情况。结果 食管癌、贲门癌及胃癌组织中DMBT1mRNA阳性表达缺失率分别为 63 .2 % (2 4 / 38)、52 .4 % (1 1 / 2 1 )及 72 .0 % (1 8/ 2 5) ;伴有淋巴结转移的癌组织中DMBT1表达缺失率均显著高于相应淋巴结无转移的癌组织 (P <0 .0 2 5) ;肿瘤外侵越严重 ,DMBT1mRNA表达缺失率越高 (P <0 .0 2 5)。结论 DMBT1基因表达缺失与上消化道癌侵袭及淋巴结转移密切相关 ,提示该基因在上消化道癌的发生、发展及转移中起一定作用。

中国人肝脏细胞色素P4502E1表达──基因型与表型的关系

细胞色素Ｐ４５０（ＣＹＰ）２Ｅ１代谢激活多种致癌物并参与酒精代谢和自由基形成，其基因启动子区ＲｓａＩ单核苷酸多态与酒精性肝病和某些癌症如食管癌和肺癌的易感性相关．以免疫印迹和特异底物的方法研究了ＲｓａＩ识别的不同基因型肝脏标本中ＣＹＰ２Ｅ１蛋白含量及其功能活性的差异．结果表明，ｃｌ／ｃ１基因型（ｎ＝２８）的蛋白含量（（１２４．０± ８３．９）ｐｍｏｌ／ｍｇ）高于携带至少一个ｃ２等位基因的变异基因型（（６５．５±３８．９）ｐｍｏｌ／ｍｇ， ｎ＝ ２２），差异有极显著性（Ｐ＜ ０．０１）．ｃｌ／ｃ１基因型的肝微粒体代谢４－硝基苯酚的活性也同样显著高于变异基因型（（１９８．４±２７．８）ｐｍｏｌ／（ｍｉｎ· ｍｇ）比（１０１．２± １８．１）ｐｍｏｌ／（ｍｉｎ·ｍｇ）， Ｐ＜０．０１））．结果证明，ＣＹＰ２Ｅ１表达水平和酶活性的个体差异与ＲｓａＩ识的基因多态有关，这与分子流行病学研究发现的ｃ１／ｃ１基因型是某些癌症的遗传易感因素一致．

人食管癌相关基因在大肠杆菌中的表达

目的 研究食管癌相关基因 1(ECRG 1)的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达 ,进一步制备抗ECRG 1编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)方法克隆ECRG 1基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒 ,在大肠杆菌中诱导表达 ,以Westernblot鉴定。用聚丙烯酰胺凝胶电泳 (SDS PAGE电泳 )纯化的蛋白免疫BALB/C小鼠制备多抗。结果 RT PCR所分离的ECRG 1基因蛋白编码序列 ,经测序证明与 5′ RACE方法钓取的该基因序列相符。Westernblot证实该基因编码蛋白质在大肠杆菌中表达 ,并获得效价为 1∶32 0 0的多克隆抗体。结论 ECRG 1基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达 ,并能获得抗ECRG 1基因编码蛋白质的多克隆抗体 。

Expression of cytochrome P4502E1 in human liver: relationship between genotype and phenotype in Chinese

Polymorphic cytochrome P4502E1 (CYP2E1) plays an important role in the metabolic activation of many carcinogens. We have previously shown that the c1/c1 genotype recognized by Rsa I in the 5′-regulatory region of the CYP2E1 may be a susceptibility factor for developing esophageal cancer and lung cancer in Chinese. The present study was to investigate the relationship between the Rsa I genotype and the expression of CYP2E1 in human livers. A total of 50 liver specimens were genotyped for CYP2E1 and assayed for CYP2E1 protein contents and functional activity by using specific antibody in immunoblot and a probe substrate, p-nitrophenol. A considerable interindividual variation in CYP2E1 protein (20-fold) and functional activity (56-fold) was observed among these liver samples. However, when they were categorized according to genotype, the mean content of CYP2E1 protein was significantly higher among individuals with the c1/c1 genotype than that among those having c1/c2 or c2/c2 genotype [124.0±83.9 pmol/mg (n = 28) versus 65.5±38.9 pmol/mg (n = 22), P＜0.01 . The mean activity of CYP2E1 towards p-nitrophenol for the c1/c1 genotype was also higher than that for the variant genotypes (198.4±27.8 pmol/min/mg versus 101.2±18.1 pmol-1·min-1·mg-1, P＜0.01 . Also, the protein levels and functional activity showed a significant correlation (r = 0.68, P＜0.01 . These results demonstrate an association between the Rsa I genotype and the phenotype of CYP2E1 in our samples, and the data are compatible with the assumption that CYP2E1 c1/c1 genotype is a susceptibility factor for certain cancers in Chinese.