自溶-酶-碱法提取啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的工艺研究

本文通过正交试验,对自溶-酶-碱法提取废啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的最佳工艺进行了研究。结果表明其最佳工艺条件为:啤酒酵母于50℃自溶6h后,添加100U/g湿酵母木瓜蛋白酶,继续自溶18h后离心,沉淀用2%的NaOH溶液分散,于80℃水浴处理3h后离心,沉淀用蒸馏水清洗3～4次后进行真空冷冻干燥,粉碎得成品。成品得率10.80%,其中多糖含量87.70%、蛋白质含量0.45%、水分含量6.72%、灰分含量1.05%,具有得率高、纯度高、蛋白质含量低的特点。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定食品中糖醇含量的研究

针对口香糖、饼干、面包、饮料等食品中添加的代糖成分赤藓糖醇、木糖醇、山梨糖醇和麦芽糖醇的检测,建立了水和乙腈为流动相,等度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器检测食品中添加的糖醇含量的高效液相色谱方法。赤藓糖醇、木糖醇、山梨醇和麦芽糖醇的线性工作范围分别为140-525、100-500、100-500、100-500μg/m L,线性相关系数R2分别为0.998、0.999、0.999和0.999,对不同类型的食品,四种糖醇的回收率在91.9%-105.2%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于5%,室间再现性变异系数一般都低于10%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、便于操作,测定结果准确,适于复杂食品基质中糖醇含量的测定。

β-1,3-葡聚糖酶产生菌的筛选及其产酶条件

为了制备β-1,3-葡聚糖酶,从土样中筛选出一株产β-1,3-葡聚糖酶活力较高的菌株LE02,经形态学观察,初步鉴定为木霉菌.木霉LE02在以2%的酵母粉为主的液体产酶培养基(起始pH 7.0)中,于32℃,150 r/min摇瓶培养60 h达到产酶高峰,酶活力可达71.09 U/mL.

木霉LE02 β-1，3-葡聚糖酶酶学特性的研究

对木霉菌株LE02所产β-1,3-葡聚糖酶的酶学特性进行了研究。结果表明,该酶最适反应温度为55℃、最适反应pH值为5.0。Co^(2+)、K+、Zn^(2+)、Li^+、Ba^(2+)、Cu^(2+)以及1.0mmol/L的Fe^(2+)对该酶没有影响,Cd^(2+)和10.0mmol/L的Mg^(2+)对酶具有部分抑制作用,而低浓度的Hg^(2+)、5.0mmol/L以上的Mn^(2+)和10.0 mmol/L的Fe^(3+)能强烈抑制该酶的活性。该酶只能作用于β-1,3-糖苷键,以Larinami为底物时其米氏常数K_m值为128.34μg/mL,最大反应速度V_m为23.01μg/(min·mL)。经过SDS-PAGE测定的分子质量近似为80.137ku。

木霉β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化

目的:对木霉菌株LE02所产β-1,3-葡聚糖酶的分离纯化方法进行研究。方法:粗酶液分别用硫酸铵、乙醇和丙酮进行沉淀,再用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换层析进一步分离纯化,并用SDS-PAGE法测其分子量。结果:硫酸铵分段盐析法沉淀酶蛋白的效果优于乙醇和丙酮沉淀;盐析得到的酶蛋白经透析浓缩后,再经DEAE-Sepharose CL-6B层析分离,可得到单一酶蛋白,总酶活回收率达78.71%,比酶活达到689.9U/mg,提高了53.74倍,经SDS-PAGE法测得该β-1,3-葡聚糖酶的分子量为80.137kDa。结论:采用硫酸铵分段盐析和离子交换层析法可获得电泳纯的β-1,3-葡聚糖酶,且酶活回收率高。

铜绿微囊藻中微囊藻毒素LR的UPLC-MS/MS法分析

为了实现对微囊藻细胞中微囊藻毒素LR(Microcystin LR)的准确定量,建立了铜绿微囊藻中微囊藻毒素LR的超高效液相色谱三重四级杆质谱联用(UPLC-MS/MS)分析方法。将铜绿微囊藻干藻粉复溶在50 m L 0.1%三氟乙酸水溶液中,-55℃/37℃反复冻融3次,HLB固相萃取小柱浓缩和净化。采用ACQUITY UPLC CSH^(TM)C_(18)色谱柱,以0.1%甲酸-水和0.1%甲酸-乙腈为流动相,梯度洗脱分离,UPLC-MS/MS外标法定量分析。微囊藻毒素LR在5 ng/m L^150 ng/m L范围内线性良好,相关系数大于0.995,方法检出限为0.28 ng/m L,加标回收率在98.5%~104%,日内重复性和日间重复性分别为3.5%和5.6%(n=6)。该方法操作简便,重复性好,对微囊藻细胞中微囊藻毒素MC-LR的定量准确可靠。

食品中低聚果糖高效液相色谱检测方法研究

针对乳制品、糕点、酒类、饮料、糖果等食品中添加的功能活性成分低聚果糖,包括蔗果三糖（GF2）、蔗果四糖（GF3）、蔗果五糖（GF4）的检测,建立了水和乙腈为流动相,梯度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器（evaporativelight-scattering detector,ELSD）检测食品中添加的低聚果糖含量的高效液相色谱方法。蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖的线性工作范围分别为0·04~0·45、0·05~0·50、0·04~0·45mg/mL,线性相关系数R2分别为0·9999、0·9999、1。对不同类型的食品,三种低聚果糖的回收率在90·0%~110·0%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于10%,室间再现性变异系数一般都低于15%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、易于掌握,测定结果准确,适于复杂食品基质中低聚果糖含量的测定。

废啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的提取及成分分析

在酵母-β1,3-葡聚糖现有3种提取工艺的基础上,提出了自溶-酶-碱法提取废啤酒酵母中β-1,3-葡聚糖的工艺,并采用紫外光谱、红外光谱、气相色谱法研究了所获提取物的组成。结果表明,采用自溶-酶-碱法提取的多糖色泽乳白,得率高达10.8%,其多糖含量为87.7%、总氮含量为0.07%、水分含量为6.72%、灰分含量为1.05%。提取物纯度高,不含核酸和蛋白质,由葡萄糖通过β-糖苷键连接而成。

食品中低聚异麦芽糖高效液相色谱检测方法研究

针对乳制品、固体饮料、糖果、保健品等食品中添加的功能活性成分低聚异麦芽糖,包括异麦芽糖(IG2)、潘糖(P)、异麦芽三糖(IG3)、异麦芽四糖(IG4)的检测,建立了水和乙腈为流动相,梯度洗脱,氨基色谱柱分离,蒸发光散射检测器(evaporative light-scattering detector,ELSD)检测食品中添加的低聚异麦芽糖含量的高效液相色谱方法。异麦芽糖、潘糖、异麦芽三糖、异麦芽四糖的线性工作范围分别为0.1～0.45mg/mL、0.1～0.45mg/mL、0.2～0.65mg/mL、0.1～0.35mg/mL,线性相关系数R2分别为1、0.9999、0.9998、0.9999。对不同类型的食品,四种低聚异麦芽糖的回收率在98.0%～105.0%之间,方法准确度高。室内重复性变异系数一般都低于10%;除了含量低的异麦芽四糖,室间再现性变异系数一般都低于10%,说明方法的重复性和再现性良好。该方法简单、易于掌握,测定结果准确,适于复杂食品基质中低聚异麦芽糖含量的测定。

转基因大米中氨基酸含量超高效液相色谱定量

建立了一种6-氨基喹啉基--羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯（AQC）柱前衍生，超高效液相色谱（UPLC）对大米中17种氨基酸进行快速定量的方法。优化了6M盐酸和0．2％苯酚的加入量、水解时间等大米水解条件，采用1．7txm粒径的AccQ·TagULTRAC18色谱柱分离，260nnl检测，可在9．5rain内实现17种氨基酸衍生物的分离。结果表明，17种氨基酸的标准工作曲线的线性回归相关系数（r）均大于0．999，加标回收率在85．9％～102％之间，日内相对标准偏差（RSD）（n=5）2．64％-4．59％，日间相对标准偏差（n=3）1．43％-5．06％，方法简单、准确、快速、重复性和再现性良好。将该方法用于大米中氨基酸含量的分析，比较了4对转基因大米及其非转亲本之间氨基酸含量的差异，检验结果表明，所取样分析的转基因大米及其亲本之间在氨基酸含量上没有显著性差异。

UPLC-MS/MS同时测定土壤中19种植物激素方法的建立和验证

[目的]本文旨在建立土壤中多种植物激素的提取及超高效液相色谱串联质谱法,并用此方法同时测定土壤中茉莉酸、吲哚-3-乙酸、反式玉米素,玉米素核苷、异戊烯基腺嘌呤、吲哚-3-丁酸、N6-异戊烯基腺嘌呤、独脚金内酯、玉米素、二氢玉米素核苷、吲哚-3-丙酸、吲哚-3-乙酸甲酯、二氢玉米素、吲哚-3-羧酸、茉莉酸甲酯、油菜素内酯、脱落酸、赤霉素、水杨酸共19种植物激素含量。[方法]以根标土壤为试验材料,采用异丙醇水甲酸(80∶19∶1,V/V/V)作为提取剂,经过超声、离心后得到植物激素提取液,提取液于常温条件下真空浓缩至干,采用甲醇进行复溶,得到植物激素待测液。采用Waters ACQUITYUPLC■HSST3色谱柱对19种植物激素进行分离,以0.30 mmol/L甲酸铵水溶液(含0.01%甲酸)作为流动相A和0.30 mmol/L甲酸铵乙腈(含0.01%甲酸)作为流动相B进行梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为30℃;采用超高效液相色谱串联质谱,多反应监测离子模式进行定性定量分析,其中,茉莉酸、吲哚-3-乙酸、反式玉米素、玉米素核苷、异戊烯基腺嘌呤、吲哚-3-丁酸、N6-异戊烯基腺嘌呤、独脚金内酯、玉米素、二氢玉米素核苷、吲哚-3-丙酸、吲哚-3-乙酸甲酯、二氢玉米素、吲哚-3-羧酸、茉莉酸甲酯、油菜素内酯采用正离子模式扫描,脱落酸、赤霉素、水杨酸采用负离子模式扫描;采用外标法测定植物激素回收率。[结果]在本试验浓度范围内,上述19种植物激素浓度与对应峰面积的相关系数(r)均大于0.99,检出限介于0.02~1.06 ng/g之间,19种植物激素的加标回收率为70.2%~117%,相对标准偏差介于0.20%~7.3%之间。采用优化后的实验方法测定土壤中的植物激素,结果检测出吲哚-3-乙酸、吲哚-3-羧酸、吲哚-3-乙酸甲酯、水杨酸和独角金内酯5种植物激素,含量为0.55~5.79ng/g。[结论]本方法前处理不需要过夜浸提,加入二氯甲烷后,超声离心浓缩复溶后可直接进样检测,大大缩短了样品的前处理时间,超高效液相色谱串联质谱法操作简单,选择性好,灵敏度高,可实现土壤样品中多种植物激素的同时检测,为土壤中植物激素的深入研究提供了一种有效的研究方法。

生物毒素检测方法及标准物质研究进展

生物毒素是一类重要的生物来源的活性物质,其生物毒性和活性使得其成为公共安全和药物研发关注的热点。基于质谱、生物传感器等的新型分析技术极大地提高了分析的灵敏度、特异性和准确度,在生物毒素检测中发挥着越来越重要的作用。生物毒素标准物质是保证生物毒素定量检测结果准确、可比和可溯源的重要物质基础,对其迫切的需求使得各国都在研发急需的生物毒素标准物质。现对近年生物毒素检测方法及标准物质的研究现状进行了综述。

核酸定量测量技术研究进展

生物学新的发展趋势是从定性科学转变为定量科学。核酸含量的定量测量技术对于食品安全（如转基因作物的核酸定量）、临床诊断（如病毒负荷量和用药指导）、法证科学（如死亡时间推断）、分子生物学基础科学研究（如细胞因子mRNA表达水平）等具有重要意义。精确定量核酸含量或拷贝数是现代分析化学和分子生物学研究面临的重要挑战之一。计量是“实现单位统一、量值准确可靠的活动”。建立核酸含量的精确测量方法．实现核酸定量结果的准确和溯源．是生物计量研究的重点之一。

JJF1529-2015《细菌内毒素分析仪校准规范》解读

细菌内毒素分析仪在医药产品生产企业、医院检验科、血站应用广泛,用于药品、体液、血液中细菌内毒素的定量检测。目前细菌内毒素分析仪的校准,还没有国家计量技术规范,各检测实验室只能由仪器厂家或采用自校验的方式校准该类仪器,技术要求、校验条件、校验项目、校验方法、校验结果的处理各不相同。制定细菌内毒素分析仪校准规范,目的是为该类仪器的校准提供规范和统一的技术依据。

生活饮用水中大肠埃希氏菌检测能力验证样品研制与应用

生活饮用水中微生物的数量是水质安全的重要监测项目之一。为验证了解国内开展生活饮用水检测的实验室对饮用水中大肠埃希氏菌的测量能力,研制了生活饮用水中大肠埃希氏菌检测(滤膜法和酶底物法)的能力验证样品,并通过能力验证评估了参加实验室的检验能力。11家参加实验室依据国家标准GB/T 5 750.12-2006《生活饮用水标准检验方法微生物指标》,利用滤膜法和酶底物法对复溶于无菌水中的冻干大肠埃希氏菌进行定量检测,分别给出CFU和MPN值。结果统计表明,参加实验室的结果评价均为满意,研制的大肠埃希氏菌定量能力验证样品的均匀性和稳定性良好,能够满足饮用水中大肠埃希氏菌的滤膜法和酶底物法检测能力验证的需求,真实反映了参加实验室的检验能力。

基于DNA提取效率校正的数字PCR定量方法

以大肠杆菌为对象,针对数字PCR定量方法,利用盐酸处理结合高效液相色谱的方法(Acid-HPLCmethod)评定了DNA提取效率,并基于提取效率对数字PCR定量结果进行了校正,校正后的数字PCR定量结果与滤膜法菌落计数结果一致性良好。研究表明:为了提高数字PCR方法对微生物定量结果的准确性,应该基于提取效率对结果进行校正。