表没食子儿茶素没食子酸酯对两株不同肝癌耐药细胞株基因表达谱的影响

背景与目的:绿茶中的儿茶素单体表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)在体内外能逆转肝癌细胞多药耐药性。鉴于多药耐药机制的复杂性,本研究拟采用高通量基因芯片技术进一步探讨EGCG逆转人肝癌细胞BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU多药耐药的可能机制。方法:MTT法检测药物敏感性,基因芯片技术分析EGCG作用于两株不同肝癌耐药细胞的基因表达谱差异,RT-PCR和Western blot法分别检测相同处理条件下两株肝癌耐药细胞的基因MDR1、LRP和Cyclin G1蛋白表达变化以验证基因芯片技术结果。结果:EGCG对BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU细胞的IC10分别为24.76mg/L、20.60mg/L。20mg/L EGCG联合0.05mg/L ADM、100μmol/L 5-FU对BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU的逆转倍数分别为9.66、2.36倍。EGCG作用BEL7404/ADM双荧光通路显著差异基因210个,上调表达38个,下调表达172个。与耐药机制相关的可能基因有ABCB10(MDR/TAP)、TOP2A、TOP2B、CCNG1上调,ABCB1、MVP、ARHD、HDAC5、GSS、GSTPI、HSPA1B、HSPB7、CDKN1A、RAB11B、RAB9P40下调。作用BEL7402/5-FU双荧光通路显著差异基因179个,上调表达31个,下调表达148个。与耐药机制相关的可能基因有ABCG(BCRP)、CCNG2、GADD34、RB1、RBBP4上调,DTYMK、GPX1、USP5、BAX、BAK1、HSPA1L下调等。相同处理条件下两组肝癌耐药细胞的MDR1、LRP基因表达均减少,CyclinG1蛋白表达均增加。结论:EGCG对肝癌多药耐药细胞BEL7404/ADM、BEL7402/5-FU具逆转作用,但作用于不同肝癌多药耐药细胞的基因表达谱变化不完全相同。

表没食子儿茶素没食子酸酯逆转多药耐药肝癌细胞株基因表达谱变化

目的:采用基因芯片技术获取表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)逆转肝癌多药耐药(multi-drug resistance,MDR)细胞前后的基因表达谱变化,探讨EGCG的可能耐药逆转作用机制。方法:cDNA微阵列分析EGCG作用肝癌MDR细胞株BEL7404/ADM前后的基因表达谱差异,Western Blot法检测细胞Cyclin G1蛋白表达变化以验证基因芯片分析的结果。结果:相对BEL7404/ADM细胞组,EGCG作用后细胞双荧光通路显著差异基因210个,上调表达38个,下调表达172个。与EGCG可能逆转耐药相关的基因有ABCB10(MDR/TAP),TOP2A,TOP2B,CCNG1上调,ABCB1,MVP,ARHD,HDAC5,GSS,GSTPI,HSPA1B,HSPB7,CDKN1A,RAB11B,RAB9P40下调等。Cyclin G1蛋白表达增加,符合cDNA微阵列基因水平变化。结论:EGCG多基因、多环节、多途径改变参与逆转ADM诱导的肝癌MDR,Western blot与基因芯片分析结果一致。

肺耐药相关蛋白的研究进展

肿瘤多药耐药(MDR)是近年来肿瘤治疗研究的困扰之一,其产生机制非常错综复杂。随着对非P-糖蛋白介导MDR机制研究的不断深入,肺耐药相关蛋白(LRP)被证实在MDR中发挥着重要作用,有望成为一种新的治疗靶点。本文就LRP的生理特性、分布、耐药机制、检测手段、临床意义及其介导的MDR逆转做一简要综述。

大黄素体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制初步探讨

目的初步探讨大黄素(EM)体外逆转口腔鳞癌耐药细胞株KBV200的机制。方法用MTT法测定EM对KBV200细胞的逆转作用及量效关系。Western blot法、免疫细胞化学法分别检测单用长春新碱(VCR)和EM联合VCR处理KBV200后,细胞中耐药相关蛋白P-gp、肺耐药相关蛋白(LRP)的量,GST-π、TOPO-Ⅱ的活性,以及肿瘤细胞凋亡蛋白P53、Bcl-2/Bax比值的变化。结果0.7、1.0和1.4μg/ml的EM及5.0μg/ml维拉帕米(VRP)分别联合VCR对KBV200的逆转倍数依次为1.44、2.87、1.76和1.83倍。与单用VCR组相比,EM联合VCR组上调P53的表达(P<0.01),增强TOPO-Ⅱ的活性(P<0.01),下调P-gp的表达(P<0.01);下调LRP的表达量及Bcl-2/Bax比值(P<0.01)。结论EM有逆转人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药性的作用,其机制可能与提高肿瘤细胞内药物的累积量,促进肿瘤细胞的凋亡有关。

氯化两面针碱体外逆转KBV200多药耐药性的机制初步探讨

目的初步探讨氯化两面针碱(nitidine chloride,NC)逆转KBV200细胞株的体外机制。方法用MTT法测定NC对KBV200细胞的逆转作用及量效关系。免疫细胞化学(ICC)法检测单用NC及NC联合长春新碱(VCR)处理KBV200后,细胞中的耐药相关蛋白P-gp和LRP的量、GST-π和TOPO-Ⅱ的活性,以及肿瘤细胞调亡蛋白P53及Bcl-2/Bax比值的变化。结果 0.3,0.6和1.2μg.ml-1的NC分别联合VCR对KBV200的逆转倍数分别为2.44,5.54和1.14倍。与单用VCR组相比,NC联合VCR组上调P53的表达(P<0.01),增强TOPO-Ⅱ活性(P<0.01),下调P-gp和LRP的表达(P<0.01),下调Bcl-2/Bax的比值。结论 NC具有逆转人口腔鳞癌细胞KBV200多药耐药性的作用,其机制可能与提高肿瘤细胞内药物的累积量和促进肿瘤细胞的凋亡有关。

口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白谱差异

目的探讨人口腔鳞癌体外培养亲本细胞株KB与耐药细胞株KBV200的蛋白质表达差异。方法在体外培养KB及KBV200细胞株,采用表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术(SELDI)及蛋白质芯片技术检测KB及KBV200蛋白质谱。结果体外培养的口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株的蛋白质存在差异表达,CM-10芯片共捕获102个蛋白,发现差异峰19个,其中15个差异蛋白在KBV200细胞中高表达,4个差异蛋白在KBV200细胞中低表达。结论SELDI蛋白芯片技术检测口腔鳞癌亲本细胞株与耐药细胞株蛋白质的差异表达方法简便、敏感、重复性好。

思的明胶囊提取工艺研究

目的:优选思的明胶囊的最佳提取工艺。方法:选用L9(34)正交试验,分别对煎煮和醇沉2个工艺步骤进行优选,以干膏率为煎煮工艺指标,梓醇总提取量为醇沉工艺综合评分指标;采用高效液相色谱法测定梓醇含量。结果:最佳提取工艺为药材加8倍量水,煎煮2次,每次煎煮1h,水提液过滤、合并、浓缩至1.0g(生药).mL-1,再用乙醇沉淀,醇沉浓度为75%,沉淀24h,过滤取上清液,微波真空浓缩干燥得干膏。结论:本方法稳定、合理,可作为思的明胶囊的最佳提取工艺。

SELDI-TOF-MS蛋白质芯片技术实验条件优化

表面加强激光解析电离-飞行时间质谱（surface en-hanced laser desorption/ionization-time of flight-mass spectrom-etry,SELDI-TOF-MS）技术是近年在基质辅助激光解吸飞行时间串联质谱法（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF-MS ）基础上改良发展起来的一种蛋白质分离技术.

人口腔鳞癌耐药细胞株中药干预差异性蛋白表达

目的筛选中药成分干预人口腔鳞癌耐药细胞株KBV200前后差异性表达蛋白质。方法采用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测5种中药对KBV200的细胞毒性,选择对细胞抑制率低于10%(IC10),即无细胞毒作用的浓度,联合200 ng/mL长春新碱(VCR)对KBV200细胞株进行干预;取干预前后的细胞总蛋白提取液,用表面加强激光解析电离-飞行时间质谱(SELD I-TOF-MS)和CM-10蛋白质芯片技术筛选差异性蛋白。结果质荷比2 000～50 000Da范围内,表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)干预KBV200前后共捕获13个差异蛋白质峰(均P<0.05),对于3997、4941、4968、5971、6084 Da 5个蛋白质峰,人口腔鳞癌细胞株KB表达较低,而KBV200表达明显升高(P<0.05),EGCG干预后表达明显降低(P<0.05);大黄素干预KBV200前后共捕获到6个差异蛋白质峰(P<0.05),对于4968,5971,6084 Da 3个蛋白质峰,KB表达较低,KBV200表达明显升高(P<0.05),大黄素干预后表达明显降低(P<0.05);未检测到两面针碱、板蓝根粗提物和岩黄连粗提物干预KBV200前后细胞和KB细胞间的差异性蛋白峰。结论 EGCG和大黄素干预KBV200前后均捕获到差异性蛋白质峰,这些差异性表达蛋白质可能与逆转KBV200多药耐药性有关。

不同水生植物对深圳甘坑水污染水质净化效果的研究

通过对不同水生植物净化深圳甘坑水污染水质的动态研究,发现水生植物香蒲、菱和金鱼藻均具有明显的污水净化效果。单独培养组中,菱对水体主要污染物氨氮和亚硝酸盐的去除率较为突出,1个月内分别达78.0%和98.0%;金鱼藻对重金属污染物铜和铬离子的净化效果更为出色,1个月内的去除率分别达84.4%和41.2%。与单独培养组相比,2种混合种植效果总体略优,3种植物混种组的净水效果最佳。由多物种形成的垂直结构,可为城市创建净化水源的立体修复体系提供参考。