人和小鼠Dspp基因的克隆及其在成牙本质细胞中的表达检测

目的克隆人和小鼠牙本质涎磷蛋白(DSPP)基因片断,建立一种从分子水平检测成牙本质细胞分化的方法。方法制备特异性的人和小鼠Dspp基因片断的mRNA反义探针,再将其分别与人和小鼠具有成牙本质细胞的牙胚组织进行原位杂交,检测Dspp基因表达情况。结果本实验制备出的人和小鼠Dspp基因的mRNA反义探针在特定条件下能对各自的成牙本质细胞中Dspp基因的表达进行检测。结论本方法可以作为一种从分子水平检测人或小鼠成牙本质细胞分化的工具。

RNA原位杂交技术的一些应用技巧

目的:检测基因在动物组织或细胞中的时空表达模式。方法:转录反义RNA探针;利用RNA原位杂交技术检测人和小鼠牙原基中若干基因的表达。结果与结论:通过优化条件,转录出完整的反义RNA探针,并成功地利用RNA原位杂交技术在组织中检测到基因的表达;分析了一些在RNA原位杂交的过程中可能碰到的问题及其解决方法。

人牙髓干细胞的高效扩增及其对分化潜能的影响

目的检测不同接种密度对人牙髓干细胞(Dental pulp stem cells,DPSCs)增殖能力和分化潜能的影响,建立其高效扩增方法。方法不同密度接种培养DPSCs,计算细胞产量、倍增次数,观察细胞形态、检查克隆形成率和钙结节形成能力。结果低密度培养的乳牙牙髓干细胞(Stem cells from human exfoliated deciduous teeth,SHED)始终保持较高增殖、克隆形成率;而低密度DPSCs只在前3代保持与常规密度相似的增殖、克隆形成效率,3代以后其增殖和分化能力明显下降。低密度培养条件下DPSCs的矿化能力与常规密度的没有明显差别。结论1.5～3cells/cm2低密度接种培养DPSCs有利于细胞快速扩增,扩增后的细胞保持较高的增殖和分化潜能。SHED的增殖能力、克隆形成效率和钙结节形成能力均优于DPSCs。