骨保护蛋白在牙周组织再生中的应用

核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)/核因子-κB受体活化因子(RANK)/骨保护蛋白(OPG)是调节破骨细胞分化和成熟以及骨吸收功能的关键因子,在牙周炎发病中起重要的调节作用。OPG可抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其程序性死亡。本文就RANKL/OPG调节系统、RANKL/OPG调节系统与牙周炎和opg基因治疗在牙周组织再生中的应用等等作一综述。

重组腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP介导hOPG基因在犬牙周韧带细胞中的表达检测

目的:观察人骨保护素(human osteoprotegerin,hOPG)在犬牙周韧带细胞(periodontal ligament cells,PDLCs)中的表达情况,为后期的牙周组织再生实验制备高表达目的基因hOPG的种子细胞。方法:体外构建携带hOPG基因的腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP,并将其转染Beagle犬PDLCs,通过流式细胞术、实时定量RT-PCR、ELISA以及Western Blot检测目的基因的转录和表达。结果:重组腺病毒Ad5-hOPG-EGFP成功转染犬PDLCs,转染72 h后转染效率达到80%以上,转染的细胞发出较强的绿色荧光;基因和蛋白水平检测表明,hOPG在犬PDLCs中得到了有效表达。结论:重组腺病毒介导的hOPG基因可以在PDLCs中有效表达。

不同培养基对人牙周膜细胞生物学行为的影响

目的:研究α-MEM、DMEM-LG、RPMI1640三种培养基对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)生物学行为的影响,为体外培养人牙周膜细胞寻找合适的培养基。方法:采用改良组织块培养法,分别用α-MEM、DMEM-LG、RPMI1640三种培养基对hPDLCs进行体外培养,比较三组细胞在游出成功率、增殖及矿化等方面的差异。结果:α-MEM促进hPDLCs增殖作用最强。α-MEM组培养的细胞表达的碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)含量最高,与其它两组间有显著差异。DMEM-LG组矿化结节形成个数最多且体积大。结论:α-MEM促进hPDLCs增殖,DMEM-LG促进hPDLCs分化。应根据实验要求选择合适培养基。

Ad5-hOPG-EGFP转染对比格(Beagle)犬牙周膜细胞生物学活性的影响

目的利用在体外进行重组后的重组腺病毒(Ad5-h OPG-EGFP)载体对犬牙周膜细胞进行转染,观察牙周膜细胞(PDLCs)的生物学活性是否受影响。方法利用在体外重组后的腺病毒载体(本身携带有h OPG基因)对犬牙周膜细胞进行转染,并利用生物形态学和生物化学技术对其细胞活性进行检测。结果转染了重组腺病毒Ad5-h OPG-EGFP的Beagle犬PDLCs在形态学上与对照组没有明显差异,仍保持了较强的增殖能力。结论腺病毒载体转染后的Beagle犬PDLCs仍保持了良好的生物学活性。

重组腺病毒载体Ad5-hOPG-EGFP转染的Beagle犬牙周膜细胞成骨能力研究

目的观察重组腺病毒载体Ad5-h OPG-EGFP转染的Beagle犬牙周膜细胞(PDLCs)体内和体外的骨化能力。方法将体外构建的携带人骨保护素(human osteoprotegerin,h OPG)基因的腺病毒载体Ad5-h OPG-EGFP转染Beagle犬PDLCs,通过体外Von Kossa染色实验、实时荧光定量PCR检测成骨指标的表达情况、酶联免疫检测RANKL/OPG的值及裸鼠体内胶原膜成骨实验比较转染组和对照组的成骨能力。结果组织学和形态学结果显示,转染了重组腺病毒Ad5-h OPG-EGFP的Beagle犬PDLCs形成的矿化结节数目多且体积大、深染。转染组中犬碱性磷酸酶(alkaline phosphates,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OC)、骨涎蛋白(bone sialoprotein,BSP)基因相对表达水平均高于空载体组和空白对照组(P<0.05)。转染组中犬RANKL/OPG的值下降趋势最为明显。裸鼠体内实验中转染组胶原膜也体现出较好的成骨能力。结论重组腺病毒介导的h OPG基因可以促进PDLCs成骨。