支气管异物取出术中纵隔气肿或气胸临床分析

目的:探讨小儿支气管异物取出术中纵隔气肿、气胸发生的原因、诊治及预防。方法:对10例支气管异物取出术中发生纵隔气肿、气胸的临床资料进行分析。结果:死亡2例,8例治愈。结论:肺内压过大、肺泡破裂是纵隔气肿、气胸发生的主要原因。尽快解除梗阻、及时发现和正确处理与预后密切相关。

靶向性质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr-1CDglyTK的构建及转染研究

目的 构建靶向性基因治疗载体pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK并进行转染研究。方法采用PCR、RT—PCR、融合PCR、酶切、连接等技术构建pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK表达载体,成功转染鼻咽癌CNE—2细胞,绘制细胞相对存活率曲线,初步研究该载体在前体药物干预下对CNE—2细胞生长的影响。结果 表达pcDNAA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK的CNE—2细胞在5—FC/GCV干预下生长受到抑制。结论pcDNA3.1(-)CMV·Egr—1CDglyTK可作为鼻咽癌基因治疗的载体。

质粒载体介导CD基因对喉癌细胞的杀伤作用研究(英文)

目的构建含酵母菌自杀基因CD的质粒表达载体pcDNA3.1()CMV.CD,并利用该载体进行喉癌Hep2细胞株转染研究,体外实验观察前体药物5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株的杀伤作用。方法通过RTPCR从酵母菌RNA内扩增出CD基因全长CDS序列,将其定向克隆到质粒表达载体pcDNA3.1()CMV中,重组体质粒经XhoI/HindⅢ双酶切鉴定,并对重组体中的CD基因片段进行序列分析,将鉴定好的阳性重组质粒pcDNA3.1()CMV.CD运用电穿孔法转入喉癌Hep2细胞中。经300～600μg/mlG418正筛选14d和10μg/ml前体药物5FC负筛选,获得稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞株,提取该细胞株细胞的总RNA,经RTPCR鉴定CD基因的表达。MTT法观察不同浓度5FC对稳定表达CD基因的喉癌Hep2细胞及转染空白载体pcDNA3.1()CMV的对照组喉癌Hep2细胞的杀伤作用。结果阳性重组质粒pcDNA3.1()CMV.CD经XhoI/HindⅢ双酶切后获得5353bp的片段及496bp的插入片段,DNA自动序列分析证明重组体质粒含完整的477bp长的CD基因CDS序列。RTPCR从转染细胞总RNA中扩出453bp的预期片段。当添加不同浓度的5FC时,表达CD基因的Hep2细胞不同程度地被杀死,而对照组的细胞几乎未受到影响,两组细胞的相对生存率具有显著差异性(P<0.05)。结论成功构建了质粒表达载体pcDNA3.1()CMV.CD,建立了稳定表达酵母菌CD基因的喉癌表达CD基因的Hep2细胞株,表达CD基因的Hep2细胞可以被5FC杀死。

融合自杀基因CDglyTK治疗喉癌的体外实验研究(英文)

目的研究融合自杀基因CDglyTK治疗喉癌。方法PCR扩增、酶切、连接、转化等构建质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.CDglyTK,XhoⅠ/HindⅢ酶切鉴定,测序分析CDglyTK基因序列。建立稳定表达CDglyTK基因的Hep-2细胞株,RT-PCR及Western-blotting鉴定CDglyTK基因的表达。MTT法观察5-FC、GCV、5-FC+GCV对表达CDglyTK基因的Hep-2细胞生长的抑制作用。结果酶切和基因测序分析证明重组质粒含完整的CD及TK基因,RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出707bp的预期片段,West-ern-blotting检测到该基因表达的59kDa的蛋白。表达CDglyTK基因的Hep-2细胞在5-FC、GCV、5-FC+GCV干预下生长受到抑制,5-FC与GCV联合有更强的杀伤效应。结论CDglyTK融合自杀基因可以成为基因治疗喉癌的有效方法。

自杀基因质粒表达载体pcDNA3.1(-)CMV.TK在鼻咽癌细胞中的构建及转染研究

目的 构建含TK自杀基因的质粒表达载体并进行转染研究。方法 根据已发表的Hsv TK基因的核苷酸序列 ,设计并合成一对引物 ,以含TK基因的PGEM /TK质粒为模板扩增出TK基因全长CDS序列 ,将其克隆到质粒表达载体 pcDNA3.1(- )CMV中 ,进行序列分析和酶切鉴定后 ,运用电穿孔法将重组体pCDNA3.1(- )CMV .CD转入鼻咽癌CNE 2细胞中 ,观察其表达情况以及无毒前体药物GCV干预下对CNE 2细胞生长的抑制作用。结果 酶切和序列分析证明pcDNA3.1(- )CMV .TK含完整的TK基因序列 ,RT -PCR从转染细胞总RNA中扩出预期片段 ;鼻咽癌CNE 2细胞在无毒前体药物GCV干预下 ,其生长受到抑制。结论 成功构建了质粒载体 pcDNA3.1(- )CMVTK ,可以将其作为鼻咽癌自杀基因治疗的一种载体。

缺氧/辐射双敏感性启动子调控CD/UPRT融合自杀基因在Hep-2细胞表达的实验研究

目的本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,观察其在缺氧或放射诱导下调控CD/UPRT基因在喉癌Hep-2细胞的表达水平,为探索新的喉癌基因-放射治疗奠定实验基础。方法利用基因重组技术构建嵌合启动子HRE1.Egr-1调控CD/UPRT基因表达的质粒表达载体;脂质体介导重组质粒转染喉癌Hep-2细胞,分为对照组、放射组(2、4、6、8 Gy)、缺氧组(1%、2%3、%O2浓度)及放射加缺氧组(8 Gy+3%O2),Western-blotting法检测转染细胞中CD/UPRT表达。结果对照组细胞仅可检测到CD/UPRT的低水平表达,放射组蛋白表达的相对灰度值分别为1.3、1.6、1.8、2.9,缺氧组CD/UPRT基因表达相对灰度值分别为1.5、2.0、2.2,放射合并缺氧组CD/UPRT表达显著高于放射组或者缺氧组(P<0.01)。结论HRE1.Egr-1启动子具有辐射/缺氧双重敏感性,并使放射干预后的Hep-2细胞CD/UPRT表达水平在缺氧下得到显著增强,为喉癌的基因-放射治疗开辟了新思路。

胞嘧啶脱氨酶尿嘧啶-磷酸核糖基转移酶融合基因/5-氟胞嘧啶治疗鼻咽癌的实验研究

目的研究胞嘧啶脱氨酶-尿嘧啶磷酸核糖基转移酶融合基因／5-氟胞嘧啶（fusion cytosine deaminaseuracil phosphoribosyl transferase gene／5-Flurocy-tosine，FCU／5-FC）对鼻咽癌CNE-2细胞的杀伤效应以及对鼻咽癌移植瘤生长的抑制作用。方法构建表达质粒载体pcDNA3．1（-）CMVe·Egr-1·FCU，BamH Ⅰ酶切鉴定重组质粒，分析FCU基因和融合启动子CMVe·Egr-1的序列。电穿孔法将重组质粒转染CNE-2细胞，300μg／ml-600μg／mlG418筛选14天获得稳定表达FCU基因的CNE-2细胞，RT—PCR鉴定FCU基因的表达。以转染空白载体pcDNA3．1（-）的CNE-2细胞为对照，MTT法观察5-FC对表达FCU基因的CNE-2细胞生长的抑制作用，考察FCU基因的细胞旁杀效应。5×10^6的CNE-2细胞接种裸鼠右腋下，建立鼻咽癌裸鼠移植瘤模型，12天后将裸鼠随机分成3组：CU组，CU＋PBS组和CU＋5-FC组，观察不同处理对移植瘤生长的抑制作用。结果酶切和序列分析证明重组质粒含完整的FCU基因和Egr-1启动子的核心序列，RT-PCR从转染细胞总RNA中扩出330bp的预期片段。表达FCU基因的CNE-2细胞在5-FC干预下，生长受到抑制。随着表达FCU基因的细胞比例增加，细胞存活率相应地下降。CU组，CU＋PBS组移植瘤体积与CU＋5-FC组有显著性差异（P〈0．05）。结论表达FCU基因的CNE-2细胞可以被5-FC杀伤，FCU／5-FC系统抑制了移植瘤生长，为治疗鼻咽癌提供了新的策略。

Egr-1基因与肿瘤基因-放射治疗的关系

目的 回顾近几年文献 ,综述Egr 1基因的结构、功能、与肿瘤及肿瘤基因 放射治疗的关系。 方法 分析相关文献 2 3篇。结果 Egr 1基因调节多种下游基因的转录 ,参与调节正常细胞的增殖与分化 ,与某些肿瘤发生有关。另外Egr 1有放射致敏性 ,已尝试用于多种肿瘤的基因 放射治疗。 结论 Egr 1基因具有多种重要功能 ,利用其启动子的放射诱导性 ,可实现肿瘤的靶向性基因 放射治疗。

鼻内镜下儿童腺样体切除术的并发症及其预防

目的:探讨鼻内镜下儿童腺样体切除术出现的并发症及其预防方法。方法:对215例腺样体肥大的患儿实行鼻内镜下腺样体切除术,术后随访1～6月。总结术中及术后出现的并发症及处理方法。结果:术后患儿临床症状消失或减轻,而并发症出现情况为:鼻出血10例,鼻腔粘连30例,腺样体术后增生1例。结论:鼻内镜下腺样体切除术在直视下进行,视野清楚,操作方便,手术时间短。但术者仍需警惕可能出现的并发症,尽量加以避免。

蛋白质组双向电泳实验中一些常见失误的分析

从以固相pH梯度等电聚焦为第一向,SDS PAGE电泳为第二向进行的蛋白质组双向电泳实验中挑选了一些常见的硝酸银染色2 DE失误图谱,将它们进行分类,初步分析造成各类失误的可能原因,探讨相应的解决方法和总结实验操作中应该注意的事项.

耳鼻咽喉科临床见习教学改革与实践

目的探讨耳鼻咽喉科临床见习课的教学方法。方法对2001级七年制临床医学专业30人和五年制临床医学专业98人耳鼻咽喉科学临床见习课的教学经验进行总结,对如何提高耳鼻咽喉科临床见习课教学质量和效率进行分析和回顾。结果通过开展研究性教学和学习探索与实践,极大地增强了学生的学习兴趣,提高了见习课教学的质量和效率,提高和培养了学生的创新思维、临床观察和分析解决问题的能力。结论只有不断对耳鼻咽喉科学临床见习课教学方法和教学手段进行改革和创新,才能确保临床见习课教学质量,取得良好的教学效果。

可视喉镜在声门暴露困难患者喉显微手术中的应用

目的探讨可视喉镜在声门暴露困难患者喉显微手术中的应用价值。方法回顾性分析2016年1月~2016年8月在我院采用可视喉镜辅助喉显微手术治疗的20例声门暴露困难的声带良性病变患者的临床资料,对患者的平均手术时间、术中平均出血量、术中牙齿松动发生率、软腭裂伤发生率以及术后疼痛评分进行分析。结果根据Cormack-Lehane(C-L)分级方法,20例患者中属于III级声门暴露困难者15例,IV级声门暴露困难者5例。所有患者的平均手术时间、术中平均出血量、术中牙齿松动发生率、软腭裂伤发生率以及术后疼痛平均评分分别为(17.20±3.33)min、(3.30±1.17)ml、0%(0/20)、0%(0/20)及(1.35±0.93)分。术后随访3~6个月,患者均无复发。结论可视喉镜在普通支撑喉镜下声门暴露困难患者的喉显微手术中声门暴露充分,手术时间短且围手术期并发症少,值得推广应用。

儿童腺样体肥大并发分泌性中耳炎的危险因素分析

目的分析腺样体肥大患儿并发分泌性中耳炎(otitis media with effusion,OME)的相关危险因素。方法回顾性分析2011年9月至2016年11月住院治疗的676例腺样体肥大患儿的临床资料,根据患儿是否并发分泌性中耳炎分为并发分泌性中耳炎组(并发OME组)319例和未并发分泌性中耳炎组(未并发OME组)357例。采用单因素分析对两组患者的性别、年龄、体重、是否合并鼻塞流脓涕、是否合并扁桃体肥大、变应性鼻炎病史、哮喘病史、既往腺样体切除手术史等进行分析,以筛选出有意义的相关因素,并将筛选出的相关因素纳入多因素Logistic回归模型中进行多因素分析。结果单因素分析结果显示,两组患儿在年龄、体重、是否合并鼻塞流脓涕及既往腺样体切除手术史、是否合并扁桃体肥大组间比较差异有统计学意义(P<0.05),而两组患儿在是否合并变应性鼻炎病史、性别及哮喘病史组间比较差异无统计学意义(P>0.05);Logistic回归分析结果显示,年龄是腺样体肥大患儿分泌性中耳炎发病的保护因素,而合并鼻塞流脓涕、既往腺样体切除手术史是分泌性中耳炎发病的危险因素。结论合并鼻塞流脓涕、既往有腺样体切除手术史是腺样体肥大患儿分泌性中耳炎发病的独立危险因素。

舌癌贯通口底切除的术式探讨

目的分析舌癌口底区淋巴结转移分布的特点,探讨舌癌贯通口底切除的合理术式。方法回顾性分析26例行舌-口底-颈联合根治的舌癌病例,所有患者均行下颌骨舌侧骨膜与舌骨之间患侧口底组织贯通切除的手术方式,将口底区标本分成舌淋巴结和舌动脉起始部淋巴结两组进行病理分析,观察术后口底瘘发生几率和吞咽功能恢复情况,并对术后肿瘤复发转移情况进行随访分析。结果舌淋巴结出现率23.1%(7/26);舌动脉起始部淋巴结出现率15.3%(4/26)。在出现舌淋巴结患者中转移率为71.4%(5/7);在出现舌动脉起始部淋巴结患者中转移率为50.0%(2/4)。术后口底瘘的发生率为7.7%(2/26)。所有患者术后均恢复经口进食。随访期内4例患者发生对侧颈部或咽旁、咽后淋巴结转移,全部26例患者未见原发灶、患侧颌下、患侧舌骨区、患侧颈部复发。结论舌癌贯通口底切除术式符合淋巴引流规律,彻底清扫了口底淋巴引流通路及可能出现的舌淋巴结及舌动脉起始端淋巴结,经临床应用,取得了较好的肿瘤局部及区域转移控制率。

喉部分切除术后并发喉狭窄的原因及处理

目的探讨喉癌行喉部分切除术后并发喉狭窄的原因及处理方法。方法回顾性分析2008-2013年住院治疗的28例喉癌术后并发喉狭窄的临床资料,28例患者根据引起狭窄的原因、狭窄的程度及狭窄的部位采取不同的治疗方式。其中2例术后联合放疗引起急性喉梗阻患者予以激素、抗感染治疗;16例患者行支撑喉镜下CO2激光切除术;5例患者行喉裂开术;5例患者行多次及多种联合手术。结果 28例患者中26例拔除气管导管,拔管率92.8%;2例患者手术后瘢痕及肉芽组织增生造成再次狭窄,随访至今仍未拔除气管导管。结论支撑喉镜下CO2激光切除术是喉癌行喉部分切除术后并发喉狭窄的首选方法,合理的修复缺损并喉腔重建、积极抗感染及治疗胃食管反流将会明显的减少喉部分切除术后喉狭窄的发生几率。

精品课程建设中耳鼻咽喉头颈外科学教学方法的探讨与体会

精品课程建设是国家教育部为进一步提高人才培养质量、推进素质教育和创新教育，聚集优质的教育资源，提高课程教学质量，使学生得到最好的教育，并可以在更大的范围内获得教学共享的一项创建活动。为进一步提高教学水平和效果，我科从2006年开始实施耳鼻咽喉头颈外科学精品课程建设，2009年被评为国家精品课程。几年来，我们从课程设置、理论授课和实践见习教学方面进行了初步实践与探索，取得了一定成效。现将我们在精品课程建设实践中的几点体会和建议总结如下：

HRE1.Egr-1.yCDglyTK融合自杀基因前药系统对鼻咽癌放射增敏作用的体外实验

目的:构建缺氧/辐射双敏感性启动子HRE1.Egr-1,观察其在缺氧或放射诱导下调控yCDglyTK基因在鼻咽癌HNE-1细胞表达及yCDglyTK/5-FC对鼻咽癌HNE-1细胞杀伤效应,为探索新的鼻咽癌基因-放射治疗奠定实验基础。方法:利用基因重组技术构建嵌合启动子HRE1.Egr-1调控yCDg-lyTK基因表达的质粒载体;脂质体介导重组质粒转染鼻咽癌HNE-1细胞,建立稳定表达yCDglyTK基因的鼻咽癌HNE-1转染细胞;免疫印迹法检测在常氧、放射、乏氧、乏氧加放射等不同条件下HNE1细胞中yCDglyTK表达的强度;MTT法检测加入5-FC后对上述不同条件下稳定转染细胞的杀伤效应。结果:各组蛋白表达均有差别(P<0.01),以乏氧/放射处理最为明显;5-FC对各种条件干预下的细胞均有杀伤效应,其中以乏氧/放射处理最为明显(P<0.01)。结论:HRE1.Egr-1嵌合启动子具有放射和乏氧诱导的双重特性,可以显著增强yCDglyTK/5-FC系统在乏氧和放射干预下对鼻咽癌HNE-1细胞的杀伤效应,为鼻咽癌的基因-放射治疗开辟了新思路。

耳鼻咽喉头颈外科学课堂教学质量的探讨与思考

耳鼻咽喉头颈外科学是研究听觉、平衡、嗅觉诸感觉器官与呼吸、吞咽、发音、语言诸运动器官的解剖、发育、生理和疾病现象的临床医学。该学科专科性强，涵盖器官多，解剖结构复杂而部位隐蔽，教学上存在课程内容多、授课时间相对较少、讲授和学习难度大等问题。同时，由于课时的限制，

小干扰RNA抑制鼻咽癌细胞hTERT基因表达的实验研究

目的 观察鼻咽癌细胞中的RNA干扰效应，确定hTERT基因RNA干扰的有效作用位点，探讨RNA干扰在鼻咽癌基因治疗中的应用前景。方法 利用体外合成法合成针对hTERT基因的小干扰RNA（siRNA）序列，脂质体转染鼻咽癌CNE-2细胞，逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase polymemse chain reaction，RT-PCR）检测转染细胞中hTERT基因的mRNA水平，Western Blot观察siRNA干扰后hTERT蛋白表达水平，噻唑蓝法检测siRNA对细胞生长抑制作用，流式细胞学检测siRNA诱导细胞凋亡的作用。结果 在siRNA转染CNE-2细胞后，hTERT的mRNA表达水平分别下调10％～70％，蛋白表达水平不同程度降低，细胞周期在G0～G1期受阻，并不同程度诱导细胞凋亡。结论 siRNA可在鼻咽癌中有效发挥RNA干扰效应，下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平，降低端粒酶活性，抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导其凋亡，为鼻咽癌基因治疗研究奠定了一定的基础。

喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组差异表达的初步研究

目的 研究喉癌及癌旁喉正常黏膜组织蛋白质组的差异表达。方法 用固相PH梯度双向凝胶电泳分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质 ,银染显色、PDQUEST 2DE软件分析所获得的双向凝胶电泳图谱 ,找出差异表达的蛋白质点。取差异表达的蛋白质点进行质谱鉴定。结果 获得分辨率和重复性均较好的双向凝胶电泳图谱 ,并鉴定出与喉癌发生密切相关的 12种蛋白质。其中有 10种蛋白质在喉癌组织中特异表达 ,分别是An giopietin 2 ,sproutyhomologues,Inhibitorofapoptosis likeprotein 2 (ILP 2 ) ,urokinasetypeplasminogenactivatorre ceptoruPAR ,Wnt 3aprotein ,癌基因TransformingproteinN Ras、P2 1以及c Met等。connexin 31.1,原肌球蛋白Tropomyosin两种蛋白质在癌旁喉正常黏膜组织中特异表达。 结论 本研究利用固相PH梯度双向凝胶电泳技术分离喉癌及癌旁喉正常黏膜组织总蛋白质 ,首次建立了重复性较强的喉癌及喉正常黏膜组织蛋白质组表达图谱 ,且两者蛋白质的表达明显不同 ,差异表达的蛋白质分别参与细胞的癌变、细胞间的信号传导、肿瘤血管生成 ,这对研究喉癌的癌变机制 ,寻找与喉癌诊断和治疗相关的肿瘤标志物相当重要。