溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜IκB-α基因和蛋白表达的作用

目的观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)大鼠模型结肠黏膜核因子抑制蛋白-κB(IκB-α)基因表达及磷酸化核因子抑制蛋白-κB(pIκB-α)蛋白表达的作用,对其抗UC作用机制进行探讨。方法采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预。采用实时定量荧光PCR方法检测结肠黏膜IκB-α基因表达和Western blot方法检测结肠黏膜pIκB-α蛋白相对表达量。结果模型组IκB-α基因相对表达量明显低于正常组(P<0.01);溃结灵高剂量组IκB-α基因相对表达量明显高于模型组(P<0.05)。模型组pIκB-α蛋白相对表达量明显高于正常组(P<0.01);溃结灵低、高剂量组pIκB-α蛋白相对表达量均明显低于模型组(P<0.05)。结论溃结灵对TNBS法UC大鼠模型结肠黏膜IκB-α基因表达有上调作用及对pIκB-α蛋白表达有抑制作用,其抗UC作用的机理可能为抑制IκB-α的磷酸化,进而抑制IκB-α蛋白的降解,最终抑制核转录因子-κB的活化,减轻炎症反应。

溃结灵对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB p65 DNA结合活性的影响

【目的】观察溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型核因子-κB(NF-κB)p65蛋白DNA结合活性的影响。【方法】采用不同剂量含药血清干预Caco-2细胞,并以促炎细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)]诱导Caco-2细胞建立炎症细胞模型,收集细胞。采用Trans AM核转录因子活性检测试剂盒检测细胞核蛋白NF-κB p65的含量(活性)。【结果】TNF-ɑ与IL-1β诱导的模型组细胞核蛋白NF-κB p65的含量显著高于正常对照组(P﹤0.01);溃结灵高、中剂量组,蛋白酶抑制剂组和阳性药(柳氮磺胺吡啶)组细胞核蛋白NF-κB p65的含量均显著降低,与模型组比较差异有统计学意义(P﹤0.01)。【结论】溃结灵含药血清对Caco-2炎症细胞模型细胞核蛋白NF-κB p65 DNA结合活性具有一定的下调作用。

益气聪明丸质量标准提高研究

【目的】建立益气聪明丸的质量控制方法,提高益气聪明丸质量标准。【方法】选取市面上3个主要生产厂家的益气聪明丸各2批,采用显微镜观察方中葛根、黄芪、蔓荆子、黄柏、党参5味药以进行显微鉴别;采用薄层色谱法对方中黄芪、升麻、白芍、黄柏进行定性鉴别;采用高效液相色谱法测定益气聪明丸中葛根素、芍药苷含量。【结果】方中葛根、黄芪、蔓荆子、黄柏、党参5味药显微特征明显,易于鉴别。方中黄芪、升麻、白芍、黄柏薄层色谱斑点清晰,阴性无干扰。高效液相色谱法(HPLC)测定结果显示方中葛根素在0.001 12~3.506 76μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.2%[相对标准偏差(s_R)=1.4%,N=9];芍药苷在0.003 33~3.328μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为98.4%(s_R=1.8%,N=9)。不同厂家益气聪明丸中葛根素、芍药苷含量存在较大差异。【结论】所建立的定性、定量方法简便易行、重现性好,专属性强,可有效控制益气聪明丸质量。

骨筋丸胶囊质量标准提高研究

目的建立骨筋丸胶囊的质量控制方法,为其质量标准提高提供依据。方法采用高效液相色谱法测定骨筋丸胶囊中的血竭素高氯酸盐含量。结果血竭素高氯酸盐在0.007 38μg^3.690 22μg范围内有良好的线性关系,平均回收率为99.1%(RSD=1.3%,n=9)。结论所建立的定量方法简便易行、重现性好、专属性强,为骨筋丸胶囊提供了有效的质量控制方法。

牛大力祛痰、镇咳和平喘作用的实验研究

【目的】观察牛大力的祛痰、镇咳及平喘作用。【方法】通过小鼠气管酚红法、家鸽纤毛运动实验、小鼠浓氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法及豚鼠组胺—乙酰胆碱超声雾化法观察牛大力的祛痰镇咳平喘作用。【结果】牛大力能显著增加小鼠气管酚红排泌量,促进家鸽气管内墨汁运动,减少氨水引发小鼠和枸橼酸引发豚鼠咳嗽反应的次数,延长咳嗽潜伏期,对抗组胺—乙酰胆碱引起的豚鼠支气管哮喘(均P<0.05或P<0.01)。【结论】牛大力具有一定的祛痰、镇咳及平喘作用。

牛大力对小鼠免疫功能的影响

【目的】观察牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响。【方法】选用SPF级KM小鼠,通过计算小鼠脾脏指数、胸腺指数、廓清指数和采用血清溶血素试验法、二硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法,观察高、中、低剂量牛大力(剂量分别为20、10、5 g.kg-1.d-1)对正常小鼠免疫调节的影响。通过测定免疫抑制小鼠(灌胃给予40 mg.kg-1.d-1醋酸泼尼松)脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数,观察高、中、低剂量牛大力(剂量同前)对免疫低下小鼠免疫调节的影响。【结果】牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数均无显著性影响,但能不同程度地增加免疫低下小鼠的脾脏指数、胸腺指数及廓清指数(P<0.05或P<0.01)。牛大力能显著提高小鼠血清溶血素含量(P<0.05),不同程度抑制小鼠迟发型皮肤过敏反应,但差异无显著性意义(与模型组比较,P>0.05)。【结论】牛大力能不同程度地提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能。

小儿肺咳糖浆质量标准研究

目的：采用化学反应、薄层色谱法（TLC）和高效液相色谱法分别进行小儿肺咳糖浆的定性、定量检测，研究小儿肺咳糖浆质量标准。方法：采用化学反应对铵盐和氯化物进行定性鉴别，采用TLC对处方中甘草进行定性鉴别；采用高效液相色谱法测定糖浆中甘草酸铵的含量。结果：鉴别方法专属性强，甘草酸铵在0．0936～1．8713μg·mL-1范围内浓度与峰面积线性关系良好，r=1（n=6），平均回收率为103．72％，RSD=1．5。结论：该方法简便，灵敏度高，重复性好，可有效控制止咳糖浆的质量。

南芪北芪抗应激与免疫调节作用的研究

目的观察南芪与北芪在抗应激、免疫调节及补血方面效果的差异。方法通过抗疲劳实验、耐常压缺氧实验、耐脑缺血缺氧实验及对失血性和环磷酰胺性贫血的保护作用等实验考察南、北芪抗应激及补血作用;通过巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平和皮肤迟发性过敏实验观察两者对免疫调节功能的影响。结果南、北芪均可延长小鼠负重游泳、耐常压缺氧及耐脑缺血缺氧的时间;升高贫血小鼠的红细胞和血红蛋白;提高巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平,增强皮肤迟发性过敏反应。两者药效强弱无统计学差异。结论南、北芪均具有提高小鼠抗应激的能力、增强免疫功能及补血作用,作用效果无显著性差异。

五指毛桃不同提取物补益作用的实验研究

目的:比较五指毛桃水提取物和醇提物的补益作用。方法:通过抗应激、免疫功能及贫血实验观察五指毛桃不同提取物的补益作用;通过抗疲劳实验、耐常压缺氧实验、耐脑缺血缺氧实验考察对抗应激作用的影响;通过对巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平和皮肤迟发性过敏实验观察五指毛桃不同提取物对免疫调节功能的影响;通过失血性贫血和环磷酰胺致贫血实验观察对补血作用的影响。结果:五指毛桃水提物和醇提物均可以延长小鼠负重游泳、耐常压缺氧及耐脑缺血缺氧的时间;提高巨噬细胞吞噬功能、血清溶血素水平;增强皮肤迟发型过敏反应;改善贫血小鼠的红细胞和血红蛋白水平,但五指毛桃醇提物各方面补益作用均优于水提物。结论:五指毛桃醇提物具有有较好的补益作用。

牛大力对四氯化碳及酒精所致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的研究牛大力对小鼠急性肝损伤的保护作用。方法采用四氯化碳腹腔注射、56度红星二锅头酒灌胃诱导小鼠急性肝损伤模型,观察牛大力对小鼠血清AST,ALT活性及肝组织匀浆MDA含量、肝脏指数、胸腺指数的影响。结果牛大力能降低模型小鼠血清中AST,ALT活性,减少肝匀浆MDA含量,降低肝脏指数,提高胸腺指数。结论牛大力有保肝的作用。

五指毛桃镇咳及平喘作用研究

目的:观察五指毛桃镇咳及平喘的作用。方法:通过小鼠浓氨水引咳法、豚鼠枸橼酸引咳法、豚鼠组胺-乙酰胆碱超声雾化法、离体豚鼠气管平滑肌痉挛法及豚鼠过敏性休克法观察五指毛桃的镇咳平喘作用。结果:五指毛桃能明显减少氨水引发小鼠及枸橼酸引发豚鼠咳嗽反应的次数,并延长咳嗽潜伏期,对抗组胺-乙酰胆碱引起的豚鼠支气管哮喘,对磷酸组胺所致豚鼠离体气管平滑肌收缩有拮抗作用,并具有抗豚鼠过敏性休克的作用。结论:五指毛桃具有良好的镇咳及平喘作用。

五指毛桃水提液保护胃黏膜及改善微循环的实验研究

目的观察五指毛桃保护胃黏膜及其改善微循环的作用,探索其治疗胃痛的机理,为临床运用提供实验依据。方法采用幽门结扎法,观察其对幽门结扎大鼠胃酸分泌及胃蛋白酶活性的影响及对胃黏膜的保护作用;选用激光多普勒仪观察其对小鼠耳廓微循环的改善作用。结果五指毛桃水提液对幽门结扎大鼠胃酸分泌和胃蛋白酶活性无显著影响,但具有一定降低的趋势,病理结果显示对胃黏膜具有保护作用;对小鼠耳廓微循环具有显著改善作用。结论五指毛桃具有保护胃黏膜的作用,其作用机理可能与其改善微循环有关。

柚皮苷对便秘小鼠排便的影响及作用机制初探

目的观察柚皮苷对便秘模型小鼠排便及小肠推进运动的影响。方法采用一次性灌胃复方地芬诺酯片(DC)10mg·kg-1制备小鼠便秘模型,一次性灌胃给予柚皮苷40,80 mg·kg-1,观察并记录给药后6 h内小鼠首次排黑便时间、排黑便粒数、粪便湿重及其对小肠推进运动的影响。结果柚皮苷40,80 mg·kg-1剂量组可缩短DC小鼠首次排黑便时间、增加排黑便粒数和粪便湿重、促进DC小鼠小肠推进率,与模型组比较,有显著性差异(P<0.01)。结论柚皮苷对便秘模型小鼠排便有正向调节作用,其作用机制可能与促进小肠运动有关。

大鼠结肠上皮细胞分离及培养方法的建立

目的:建立大鼠结肠上皮细胞的原代培养方法,为结肠上皮形态及功能研究提供理想的细胞模型.方法:采用6-15日龄乳鼠,取结肠剪碎、反复清洗后,弃上清,加10 mL、0.1%Ⅰ型胶原酶和透明质酸酶联合配制的消化液,37℃消化25 min,分离上皮细胞团;吹打消化液,取上清,加入培养基重悬反复离心3次后,细胞沉淀接种于含100 mL/L胎牛血清的完全培养基中,37℃、50 mL/L CO2细胞培养箱中培养.采用差速贴壁法及相差消化法去除成纤维细胞,细胞贴壁长满瓶80%-90%后用2.5 g/L的胰酶消化液消化并传代.结果:成功分离结肠上皮细胞团且活力较高.24 h后可见部分细胞团贴壁,贴壁细胞为多角形,4-8 d逐渐融合成片,呈现明显的"铺路石"样.细胞经传代处理后成纤维细胞明显减少.免疫荧光染色及透射电镜观察鉴定为上皮细胞.冻存处理复苏后细胞状态较佳.结论:通过该法可建立较稳定的大鼠结肠上皮细胞原代培养体系,为结肠上皮生理、病理及药物作用机制提供了体外研究平台.

溃结灵对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜E1、UBC5、E3RSIκB mRNA与蛋白表达的影响

【目的】观察溃结灵对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠黏膜泛素—蛋白酶体系统组分UBE1(E1)、UBC5(E2)、E3RSIκB(E3)基因和蛋白表达的影响。【方法】选用SD大鼠,随机分为6组:正常组,模型组,溃结灵高、中、低剂量组(剂量分别为18.3、9.2、4.6 g·kg-1·d-1),阳性对照组(柳氮磺胺吡啶,剂量为0.5 g·kg-1·d-1);采用三硝基苯磺酸(TNBS)法复制UC大鼠模型并进行不同剂量药物干预。采用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)法检测结肠黏膜E1、UBC5和E3RSIκB基因表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测结肠黏膜E1、UBC5和E3RSIκB蛋白含量。【结果】模型组大鼠结肠黏膜组织E1、UBC5 mRNA和蛋白相对表达量与正常组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05),溃结灵各剂量组E1、UBC5mRNA和蛋白相对表达量(除溃结灵高剂量组UBC5蛋白表达外)与模型组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);模型组大鼠结肠黏膜组织E3RSIκB mRNA相对表达量显著高于正常组(P﹤0.05),溃结灵高、中剂量组E3RSIκB mRNA相对表达量显著低于模型组(P﹤0.05);模型组大鼠结肠黏膜组织E3RSIκB蛋白相对表达量显著高于正常组(P﹤0.05),溃结灵高、低剂量组E3RSIκB蛋白相对表达量显著低于模型组(P﹤0.05或P﹤0.01)。【结论】溃结灵抗UC作用的机理可能与抑制E3RSIκB的表达,阻止IκB的泛素化降解,进而抑制NF-κB的活化,减轻炎症反应有关。

五指毛桃抗炎镇痛及对急性肝损伤的保护作用研究

目的探讨五指毛桃水提液的抗炎镇痛及对急性肝损伤的保护作用,为临床运用提供依据。方法用二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增加来观察其抗炎作用,用醋酸腹腔注射致小鼠扭体和热板法来观察其镇痛作用。分别用50%的乙醇和0.1%CCl4造成肝损伤模型,观察药物对急性肝损伤的保护作用。结果五指毛桃水提液均能够明显抑制二甲苯所致的耳肿胀及醋酸引起的腹腔毛细血管的增加,能够明显减少醋酸所致的小鼠扭体次数,提高小鼠痛阈。能够降低模型小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量。结论五指毛桃水提液具有良好的抗炎镇痛和保护肝功能作用。

清开消炎方对卵清蛋白致大鼠过敏性鼻炎的实验研究

目的观察清开消炎方对卵清蛋白(OVA)致大鼠过敏性鼻炎(AR)的疗效。方法以OVA为致敏原建立大鼠AR模型,实验分正常组,模型组,清开消炎方高、中、低剂量组,鼻炎康组,藿胆丸组,观察各组大鼠行为学表现,测定其血清总IgE水平及组胺含量、鼻分泌物及血液嗜酸性粒细胞(EOS)。同时,观察鼻黏膜组织学变化。结果清开消炎方各剂量组动物鼻痒、喷嚏、清涕、EOS浸润明显减轻,鼻黏膜厚度变薄(P<0.01);血清总IgE以及组胺水平降低。结论清开消炎方能缓解AR大鼠鼻部症状,对AR可能具有较好的疗效。

珍珠养颜液对小鼠抗衰老及免疫调节的研究

目的:研究珍珠养颜液对小鼠抗衰老作用及免疫功能的影响。方法:分别以D-半乳糖制备衰老小鼠模型、环磷酰胺造成免疫低下小鼠模型,以血清SOD、肝脏及脑组织中MDA水平、小鼠的学习记忆能力、胸腺及脾脏系数和碳粒廓清指数作为观察指标评价珍珠养颜液的作用。结果:珍珠养颜液能显著提高衰老小鼠血清SOD水平、降低肝脏及脑组织的MDA水平、增加衰老小鼠的胸腺系数,同时可改善衰老小鼠的学习记忆能力。同时,其可使得免疫低下小鼠的胸腺及脾脏系数增高,并能增强小鼠碳粒廓清能力。结论:珍珠养颜液可能具有抗衰老的作用,并可改善实验动物的免疫功能。

柚皮苷亲水凝胶骨架片制备及体外释放的研究

目的:制备柚皮苷亲水凝胶骨架片,并对其释药影响因素及释放模型进行探讨。方法:采取羟丙甲基纤维素(HPMC)为骨架材料,以湿法制粒压片法制备了柚皮苷亲水凝胶骨架片。考察了辅料(PEG类型、乳糖、蔗糖、甘露醇),HPMC分子量及含量对药物释放的影响,并采取零级、一级、Higuchi及Ritger-pappas模型,对药物的释放进行了拟合。结果:辅料对骨架片中药物释放的影响为:PEG4000>PEG400>PEG10000;填充剂为甘露醇的骨架片释放速度要快于含乳糖和蔗糖的骨架片;HPMC分子量及含量越大,药物释放越慢;药物的释放符合零级释放,药物的释放以溶蚀为主。结论:制备的柚皮苷亲水凝胶骨架片能持续缓慢地释放药物。

滋肾宁神胶囊对D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠的影响

【目的】观察滋肾宁神胶囊对D-半乳糖所致亚急性衰老模型大鼠的影响。【方法】选用SD大鼠随机分成空白对照组,模型组,七宝美髯丸组(剂量为2 g.kg-1.d-1),滋肾宁神丸组(剂量为3.33 g.kg-1.d-1),滋肾宁神胶囊高、中、低剂量组(剂量分别为9.96、4.98、2.49 g.kg-1.d-1);除空白对照组外,其他组均采用D-半乳糖(剂量为200 mg.kg-1.d-1)腹腔注射30 d复制亚急性衰老模型,第31天开始各组分别按设计剂量连续给药90 d。取各组大鼠大脑皮层检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性,丙二醛(MDA)含量,以及神经递质去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羟色胺(5-HT)的含量。【结果】模型组大鼠SOD、GSH-PX活力及NE、DA、5-HT含量均下降,MDA含量升高,与空白对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05或P<0.01);滋肾宁神胶囊高、中剂量组可升高SOD、GSH-PX活力和NE、DA含量,降低MDA含量,低剂量组可升高SOD、GSH-PX活力和NE含量,与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。【结论】滋肾宁神胶囊抗衰老作用与其能提高SOD、GSH-PX活力,增强清除自由基能力,提高单胺类神经递质含量有关。