麋鹿角调控CUMS小鼠海马区神经元凋亡改善抑郁样行为的效用部位与作用机制研究

目的基于慢性不可预见性动物应激(CUMS)模型考察麋鹿角各提取物的抗抑郁效用,以及其对氧化损伤诱导神经元凋亡的抑制效应,并对产生该效应的功效物质进行筛选研究。方法制备麋鹿角各提取物,采用小鼠CUMS模型,通过糖水偏嗜实验、悬尾实验和强迫游泳实验评价麋鹿角提取物的抗抑郁功效。采用TUNEL法检测小鼠海马区细胞凋亡情况,采用相应试剂盒测定小鼠血清中丙二醛(MDA)的含量,过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽还原酶(GSH)的活性。采用小鼠海马神经元细胞系HT22和大鼠肾上腺嗜铬瘤细胞系PC12,以过氧化氢(H_(2)O_(2))作为造模剂构建氧化损伤模型,通过MTT法评价麋鹿角提取物对细胞氧化损伤的保护作用。采用TUNEL染色法考察麋鹿角水提取物(EDC-WE)对H_(2)O_(2)诱导HT22细胞凋亡的抑制作用,进一步采用Western blot法考察神经元细胞凋亡通路相关蛋白Caspase3、Cleaved-Caspase3、Caspase9、Cleaved-Caspase9的表达水平。将EDC-WE采用超滤法分离为分子量>100 kD、分子量30~100 kD、分子量10~30 kD、分子量<10 kD的4个组分,通过MTT法评价EDC-WE不同分子量段对HT22细胞氧化损伤的保护作用,并对分子量<10 kD的组分进行TUNEL染色分析和Caspase信号通路的考察验证。结果麋鹿角各提取物均能显著上调模型小鼠糖水偏嗜率,缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间,在各提取物中以EDC-WE的效用最强。EDC-WE能够对抗HT22细胞的氧化损伤,并调控Caspase信号通路对抗H_(2)O_(2)诱导的HT22细胞凋亡,其中分子量<10 kD的麋鹿角水溶性物质抗细胞氧化损伤效用较强。结论EDC-WE可以抑制氧化应激诱导的神经元细胞凋亡,从而实现抗抑郁作用,其中分子量<10 kD的麋鹿角水溶性物质可能是关键的功效成分。