高压固相萃取-高效液相色谱-质谱法快速鉴定甘草酸单铵原料中的微量成分

目的:建立高压固相萃取-高效液相色谱-质谱法快速鉴定甘草酸单铵原料中微量成分的方法。方法:以高效液相制备色谱仪为辅助手段,通过条件优化,确定高压固相萃取的最佳方法。以5C18-MS-Ⅱ色谱柱(20.0 mm×20.0 mm)为萃取柱,进样0.5 mL,以35%乙腈-醋酸溶液(pH 2.2)为洗脱剂,在16 mL·min-1的洗脱流速下进行洗脱,萃取周期为4.5 min。所得萃取液在浓缩100倍后进行液相色谱-质谱(LC-MS)分析。结果:在最优化的高压固相萃取-液相色谱-质谱条件下,快速鉴定出甘草酸单铵原料中的10种化学成分,其中采用多级质谱信息分析和文献对照推测出6种微量成分的化学结构,分别为3-O-[β-D-葡糖醛酸-β-D-葡糖醛酸]-30-O-β-D-芹菜糖甘草次酸/3-O-[β-D-葡糖醛酸-β-D-葡糖醛酸]-30-O-β-D-阿拉伯糖甘草次酸,甘草皂苷F3,18α-甘草皂苷G2,3-O-[β-D-鼠李糖]-24-羟基甘草酸,甘草皂苷J2,甘草皂苷B2;通过液相色谱、多级质谱和紫外光谱信息,与对照品对照,确证了甘草酸单铵原料中4种主要化学成分,分别为甘草皂苷G2,18β-甘草酸,乌拉尔甘草皂苷乙,18α-甘草酸。结论:该方法无需对照品即可快速有效地鉴定出甘草酸单铵原料中的化学成分,为甘草酸单铵相关产品的质量控制和安全应用提供了依据。

高效液相色谱法同时测定甘草酸及其发酵产物

建立甘草酸发酵液中甘草酸及其发酵产物乌拉尔甘草皂苷乙、3-O-β-D-葡萄糖醛酸-24-OH-18β-甘草次酸、单葡萄糖醛酸甘草次酸、18α-单葡萄糖醛酸甘草次酸和甘草次酸的RP-HPLC含量测定方法,为单葡萄糖醛酸甘草次酸的生产工艺研究及产品质量控制提供方法学基础。采用Kromasil C18（250 mm×4.6 mm,5μm）色谱柱,以甲醇（B）-1%乙酸溶液（A）为流动相进行梯度洗脱：0 min,63%B;40 min,66%B;50 min,75%B;70 min,90%B;80 min,90%B。体积流速：1.0 mL/min;进样量：10μL;柱温：25℃;检测波长：254 nm。甘草酸、乌拉尔甘草皂苷乙、3-O-β-D-葡萄糖醛酸-24-OH-18β-甘草次酸、单葡萄糖醛酸甘草次酸、18α-单葡萄糖醛酸甘草次酸和甘草次酸的线性范围分别为11.25-180.0μg/mL（r=0.9986）;3.031-96.99μg/mL（r=0.9978）;2.595-83.00μg/mL（r=0.9999）;62.50-2000μg/mL（r=0.9999）;11.25-180.0μg/mL（r=0.9980）;1.560-50.00μg/mL（r=0.9992）;平均回收率（n=9）分别为98.3%,101.2%,98.4%,101.9%,101.7%,97.42%,RSD分别为2.5%,1.4%,0.96%,2.8%,0.73%,0.32%。