Wilson病基因产物在人肝细胞内存在和定位的研究

目的 证实Wilson病铜转运P型ATP酶 (WD蛋白 )在人肝内的存在 ,并初步研究其在肝细胞内的具体定位。方法 应用Western blot蛋白印迹技术对离体培养正常人肝细胞内蛋白进行分离 ;通过高浓度铜及P型ATP酶阻滞剂矾酸钠、激动剂长春新碱孵育培养 ,差速离心分离肝细胞胞浆、溶酶体、线粒体和微粒体 ,对各亚细胞铜含量分别对照分析。结果 人肝细胞内分离出 1 5 5kDa的WD蛋白特异性条带 ;在人肝细胞质膜、微粒体内存在有铜转运P型ATP酶 ,其阻滞剂及激动剂对肝细胞铜转运有显著影响。结论 证实正常人肝细胞存在WD蛋白 ,其存在部分可能在肝细胞质膜、内质网和高尔基器。