β-甘露聚糖酶AuMan5Aloop/H321G在乳酸克鲁维酵母中的高效表达

为制备食品级β-甘露聚糖酶,将来源于宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶突变体基因(AuMan5Aloop/H321G)克隆至表达质粒pKLAC1信号肽α-MF下游,构建重组表达质粒pKLAC1-AuMan5Aloop/H321G,并电转化乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)GG799。采用半乳糖诱导表达和酶活性分析获得了高水平表达的重组β-甘露聚糖酶突变酶(reAuMan5Aloop/H321G)的转化子GG799/AuMan5Aloop/H321G,其产酶活力为54.9 U/mL。SDS-PAGE分析显示,reAuMan5Aloop/H321G的表观相对分子质量约为55 000。经YPG培养基初始pH、摇瓶装液量以及诱导剂的种类、初始质量浓度和添加方式的初步优化,GG799/AuMan5Aloop/H321G所产酶活力较工艺优化前提高了254.6%,从而实现了reAuMan5Aloop/H321G在乳酸克鲁维酵母中的高效表达。

“华龙一号”棒控棒位系统质量提升关键技术研究

“华龙一号”作为当今世界核电市场接受度最高的三大堆型之一,对反应堆的设计制造提出了更高的质量要求。现有的二代核电棒控棒位系统在动态控制性能、测量精度、设备功耗、系统可操作性、设备可用性等系统技术和产品质量方面还需一步提升,从而满足三代核电厂长期安全、经济、稳定运行。基于“华龙一号”棒控棒位系统质量提升需求,综合利用了TRIZ理论中的“矛盾矩阵”和“物质-场”分析法来定位每个质量创新技术发明点的创新原理,从而找出技术创新的突破口。通过理论与实践的有机结合,完成了棒控棒位系统中多模式自适应控制、数字化测量信号动态补偿、低功耗高稳定驱动、智能化系统参数调节等多项技术创新,全面提升了棒控棒位系统的安全性、可靠性、经济性和自主性等质量性能。

不同类型连接肽对β-甘露聚糖酶AuMan5A酶学性质的影响

以柔性肽F(GGGGS)3或刚性肽R(EAAAK)3为连接肽,将海栖热胞菌27家族碳水化合物结合域(CBM27)与宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)的C末端融合,探讨不同类型连接肽对Au Man5A酶学性质的影响,获取具有优良酶学性质的融合酶。采用重叠PCR技术扩增融合酶基因Auman5A-F-cbm^27和Auman5A-R-cbm^27,分别将Auman5A和融合酶基因在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物reAuMan5A、reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C的酶学性质。结果表明:该3种β-甘露聚糖酶对角豆胶的K_m值分别为1.7、1.9和0.9 mg/mL。3种酶的最适温度T_(opt)分别为70、65和70℃;reAuMan5A-F-C和reAuMan5A-R-C在70℃的半衰期t_(1/2)^(70)分别为36 min和124 min,较reAuMan5A的(t_(1/2)^(70)=9 min)延长了3倍和12.8倍。reAuMan5A-R-C具有底物亲和力强、热稳定性高和pH稳定范围广等特点,在食品、饲料、医药和能源等领域有着巨大的应用潜力。

融合β-甘露聚糖酶基因的构建、表达及酶学性质的分析

宇佐美曲霉(Aspergillus usamii)YL-01-78的糖苷水解酶5家族β-甘露聚糖酶(Au Man5A)是一种仅含催化域(CM)的单结构蛋白。为改善其酶学性质,基于理性设计将海栖热胞菌(Thermotoga maritima)MSB8的27家族碳水化合物结合域(CBM27)融合至Au Man5A的C-端,并采用重叠PCR技术构建融合酶基因Auman5A-cbm27。分别将Auman5A-cbm27和Auman5A在毕赤酵母GS115中进行表达,对重组表达产物re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A进行纯化和酶学性质测定。结果表明,re Au Man5A-CBM27和re Au Man5A的最适温度均为68℃;两者分别在68和60℃及以下稳定。同时,前者较后者具有更广泛的p H稳定范围。re Au Man5ACBM27对角豆胶的Km值由融合前的1.7 mg/m L降至0.7 mg/m L,表明Au Man5A的底物亲和力得到了提高。

定点突变改善β-甘露聚糖酶AuMan5A的酶学性质

基于糖苷水解酶5家族(GHF5)β-甘露聚糖酶一级、三维结构的比对和分析,对宇佐美曲霉GHF5β-甘露聚糖酶AuMan5A的关键位点氨基酸实施定点突变以获得酶学性质优良的突变酶AuMan5A^(G320D)。采用大引物PCR技术将AuMan5A基因(Auman5A)中编码Gly^(320)的密码子GGT突变为Asp^(320)的GAC,构建出突变酶基因Auman5A^(G320D)。分别将Auman5A和Auman5A^(G320D)在毕赤酵母GS115中进行了表达,分析了表达产物AuMan5A和AuMan5A^(G320D)的酶学性质。结果表明:AuMan5A^(G320D)的最适温度Topt由突变前的65℃提升至70℃,在70℃的半衰期t_(1/2)^(70)由原酶的10 min延长至25 min;AuMan5A^(G320D)的比活性由突变前的351.2 U/mg提高到1 729.1 U/mg,其催化效率(k_(cat)/K_m)是原酶的9.3倍。将Gly^(320)突变为Asp^(320)不仅改善了AuMan5A的温度特性,而且显著提高了该酶的比活性和催化效率。

高等医学院校实验课学生上课现状调查与分析

医学实验课的教学在医学教育中占有极为重要的地位,对医学生创新思维、动手能力的培养及医学理论知识的理解、运用有着重要的作用。对2009、2010两个年级的学生实验课上课现状进行调查后发现,目前该校实验课教学基本满足学生学习医学实验课的学习兴趣以及学习需求,但在实验教学的过程中仍存在一些不足,亟待改进。

高锰酸钾坐浴联合延伸护理对顺产产妇会阴侧切口愈合及疼痛程度的影响

目的研究高锰酸钾坐浴联合延伸护理对顺产产妇会阴侧切口愈合及疼痛程度的影响。方法选取2016年3月至2017年3月在该院行会阴侧切术且切口愈合不良的顺产分娩产妇2 000例,采用随机数字表法分为对照组1 000例和试验组1 000例。对照组患者进行延伸护理干预,消除产妇会阴侧切切口的不良愈合;试验组患者在延伸护理的基础上施行1∶5 000的高锰酸钾溶液坐浴。结果试验组的甲级愈合率为79.6%,乙级愈合率为20.4%,丙级愈合率为0.0%;对照组甲级愈合率为36.7%,乙级愈合率为22.4%,丙级愈合率为40.9%。试验组切口愈合率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。试验组产妇术后3d切口轻度疼痛率为75.5%,中度疼痛率为22.4%,重度疼痛率为2.1%;对照组产妇手术后3d会阴切口轻度疼痛率为37.8%,中度疼痛率为28.9%,重度疼痛率为33.3%。试验组手术后3d的切口轻度疼痛率明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论高锰酸钾坐浴联合延伸护理可促进会阴侧切术切口的愈合,减轻手术后切口的疼痛,临床上应该采取相应的措施来促进产妇的恢复。

子宫缝合术用于产后出血产妇临床观察

目的探讨子宫缝合术用于产后出血产妇的临床疗效。方法选取医院2021年3月至2022年2月收治的产后出血患者82例,按随机数表法分为对照组和试验组,各41例。对照组产妇接受保守疗法,试验组产妇接受子宫缝合术。结果试验组的治疗总有效率为97.56%,显著高于对照组的85.37%(P<0.05);试验组产妇的恶露持续时间、月经周期、月经恢复所需时间均显著短于对照组,出血量显著少于对照组(P<0.05);试验组预后不适症发生率为4.88%,显著低于对照组的21.95%(P<0.05)。结论子宫缝合术用于产后出血临床疗效较好,有助于改善产妇的身心状态,快速止血,且预后良好。

我国中小学科技教育现状及对策

众所周知,教育是一个国家的发展命脉,而中小学生的教育更是国家的教育基石,最近几年,随着社会的不断发展,时代不断进步,国家对教育尤为重视。在这样的大环境下,各个方面的隐患和矛盾日益暴露出来,对这样的现状引发了很多教育工作者和各行各业学者们的关注。

关于“国内外大学生辍学现象”的比较分析

随着社会发展，大学生人数骤增，国内外辍学的学 生人数也随之增加。基于已有的“国外大学生辍学”的相关 研究，笔者由此辐射到国内大学的辍学状况，并且对此展开 调查研究，进行比较分析，究其异同，深入探讨引起国内外 大学生辍学的原因，并分析关于“国内外大学生辍学”原因 的差异性。

中小学科技教育的现状分析与对策研究

科技教育是一门及其重要的学科,在我国基础教育占据着十分重要的地位,其对教育事业有着深刻影响,更关系到国家的兴衰。针对于此,本文就中小学科技教育的现状展开相关分析,并提出相关政策。以供参考。

加强中小学课外科技教育的对策思考

根据《科学课程标准》中的相关规定,在中小学科学教育中,不仅需根据教材开展教学活动,同时还可充分利用丰富的教学资源,积极开展课外科技活动,培养学生科学素养,充分发挥教育合力。对此,本文首先对课外科技教育的重要性进行介绍,然后对中小学课外科技教育开展对策进行分析。

反应堆控制棒驱动系统电气性能动态参数模型研究

因缺乏反应系统动态变化过程的电气性能精准参数模型,现有核电厂控制棒驱动系统在不同环境条件下的控制效果不佳。本文建立了系统静态电磁仿真模型,通过状态分类的方式获取了系统全工况下的电气性能参数(电阻、电感)和电磁力离散数据,基于数据建立了控制棒驱动系统动态过程中电流、电磁力、衔铁位移和加速度的动态参数模型及算法。该算法最终通过电磁模型、电路模型与数值仿真相结合的形式进行了验证,可以模拟实际系统的运行状态,具备了仅依靠控制指令和当前时刻电流即可预测下一时刻系统电气性能参数的能力。本文构建的动态参数模型可为制订高效率的智能控制策略奠定基础。

好记性不如烂笔头

刚上一年级的时候,陆老师成了我们的语文老师。她对我们提了一个要求一一每天安排30到60分钟来阅读,在阅读过程中,把自认为好的词语和优美的句子摘抄下来,就像蜜蜂采蜜一样,“采集”女好词好句。

木卫三奇妙之旅

我躺在床上,翻阅着航空杂志,不知不觉睡着了……一阵寒风袭来,我冻醒了,睁开眼,发现自己居然在外星球上。四周是高大的树木,雾霭弥漫,如同仙境。“你好,地球人!”我扭头朝声音传来的方向看去,只见一个小机器人挥着手向我走来。“你好,请问这是哪里?”

叠被子

星期天的早晨,窗外阳光明媚,我的心情也变得美美的。看到妈妈忙碌的身影,我决定自己叠被子。该从哪里入手呢?我小心翼翼地把被子平铺在床上拉平整,然后像折纸那样两边对齐竖着折一下,再横着折一下就折好啦!唛,怎么看上去和妈妈折的有点不一样呢?我反复试了几次,可被子就是不听我的安排,不是这里凹一块,就是那里凸一块,老是弄不整齐。

把快乐找回来

近年来,越来越多的青少年被心理问题困扰。今年全国两会收到了很多关于青少年心理健康的提案,代表们认为“促进青少年身心健康、人格健全、全面发展,是国家和社会关注的重大课题”。2024年政府工作报告提出“加强学生心理健康教育”。

β-甘露聚糖酶AuMan5A/Af酶学性质的改善与其Asp^(320)的相关性分析

【目的】为改善宇佐美曲霉5家族β-甘露聚糖酶(AuMan5A)的酶学性质,本实验室前期将AuMan5A底物结合凹槽内一个7肽(^(316)KSPDGGN^(322))组成的loop替换为烟曲霉5家族β-甘露聚糖酶对应的氨基酸片段(PSPNDHF),得到loop替换突变酶AuMan5A/Af。为揭示AuMan5A/Af酶学性质显著改善与其Asp^(320)的相关性,定点突变构建突变体AuMan5A/Af^(D320G)。【方法】采用大引物PCR技术将AuMan5A/Af基因(Auman5A/Af)中编码Asp^(320)的密码子GAC突变为Gly^(320)的GGT,构建出突变体基因Auman5A/Af^(D320G),并在毕赤酵母GS115中进行表达,分析表达产物AuMan5A/Af^(D320G)的酶学性质。【结果】AuMan5A/Af^(D320G)的最适温度T_(opt)为70.0℃,变性温度T_m为71.5℃,介于AuMan5A(T_(opt)=65.0℃,T_m=64.5℃)和AuMan5A/Af(T_(opt)=75.0℃,T_m=76.6℃)之间;在70.0℃的半衰期为40 min,高于AuMan5A的10 min,但较AuMan5A/Af的480 min显著缩短;比活性分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的2.7和0.3倍;催化效率(k_(cat)/K_m)分别是AuMan5A和AuMan5A/Af的3.9和0.3倍。【结论】将Asp^(320)突变为Gly^(320)显著影响了AuMan5A/Af的酶学性质,证明了Asp^(320)对AuMan5A/Af温度特性改善、比活性和催化效率显著提高的重要作用。

人工智能在核设施中的应用架构规划与标准框架初探

文章详细阐述了人工智能(Artificial Intelligence,以下简称AI)技术在核电仪控各种场景中的应用,对AI技术在核电仪控领域的应用安全性进行了深度分析,指出了可能的风险和安全隐患,提出的一种AI应用于核电的四层架构体系,并对AI技术如何逐渐应用进行规划。最后,文章搭建了一套AI技术在核电仪控领域进一步应用所需的标准框架,为研究和实践提供了参考方向。