根肿病生防菌Zhihengliuella aestuarii B18定殖能力及防效分析

Zhihengliuella aestuarii B18是一株对十字花科根肿病菌Plasmodiophora brassicae具有抑制作用的优良生防菌株。为探明其生防潜能,本文通过抗生素抗性标记法、盆栽试验和田间小区试验研究了B18在不同土壤pH、土壤温度、土壤含水量、初始接种浓度、蔬菜作物以及不同土壤类型中的定殖动态。灭菌土试验结果表明:调节土壤pH 7.5~8.5,含水量10%~30%,放置于10~25℃,70 d后B18定殖菌量保持在10^(5)~10^(7) cfu/g。盆栽试验结果表明:初始接种菌液浓度为10^(9)cfu/mL时,45 d后根际土中定殖菌量可稳定在10^(4)~10^(5)cfu/g。将50 mL浓度为2×10^(9)cfu/mL的生防菌菌液接种于田间不同类型土壤后,第30天定殖菌量分别为病田8.7×10^(5)cfu/g,病土1.02×10^(5)cfu/g,健田8.5×10^(4)cfu/g,健土2.6×10^(4)cfu/g,即定殖能力由强到弱依次为:病田>病土>健田>健土。且病田中B18在根际土中可存活至45 d且菌量保持在10^(4)cfu/g,根内可存活至31 d且菌量保持在10^(4)cfu/g。田间调查结果显示B18在病田和病土中对榨菜根肿病的防效分别为42.01%和47.53%,增产率分别为37.24%和40.22%。

松材线虫微滴式数字PCR检测体系的建立

【目的】建立松材线虫微滴式数字PCR检测体系,验证该检测体系的有效性,为松材线虫检测提供一个更精确灵敏的定性检测方法。【方法】基于松材线虫16S rDNA基因序列,使用在线工具设计特异性引物和探针。优化PCR反应条件,明确微滴式数字PCR的最佳反应条件。再以采集自不同地区的6株松材线虫和12株拟松材线虫、滑刃线虫、伞滑刃线虫、垫刃线虫的基因组DNA溶液为模板对该体系的特异性进行检测;以稀释10倍的标准DNA为模板,设置不同浓度梯度来验证该体系的灵敏度;以3个不同浓度的DNA标准品稀释模板检测微滴式数字PCR的可重复性。最后以人工模拟添加线虫样品和感病松木样品DNA提取液为模板对该体系的实用性进行验证。【结果】①设计了松材线虫特异性引物探针一组,引物:P1904-F、P2057-R;探针:Probe-1938。②PCR反应体系经优化,确定其最佳退火温度为55℃。③特异性验证表明,设计的引物探针可以将松材线虫与其他相近种的线虫区分开。④灵敏度检测结果发现,该检测体系的检出浓度在0.51~20000 copies/μL。⑤对3组不同浓度标准样品的可重复性检测发现,该检测体系的变异系数在9.12%~0.31%,并且样品浓度与变异系数呈负相关。⑥使用该检测体系检测林间感病松木样品和人工模拟加入松材线虫的样品发现,该检测体系能够特异地检测出样品中的松材线虫,且拷贝数与样品中的线虫量呈正向相关。【结论】本研究建立了松材线虫微滴式数字PCR检测体系,该方法特异性好,检测灵敏度高,变异系数小,可高效地检测出样品中的松材线虫。该体系的建立可为松材线虫病理学和生态学研究提供可靠的研究数据。

根肿病生防放线菌B18发酵条件的研究

B18是一株对十字花科根肿病菌Plasmodiophora brassicae具有抑制作用的优良生防放线菌,其活菌以及发酵液都可抑制根肿病菌休眠孢子萌发。为提高其菌体量以及孢子萌发抑制率,本文以菌体生物量和发酵液抑制根肿病菌休眠孢子活性为指标,通过单因素试验和正交设计优化B18的发酵培养基组分以及培养条件。结果表明:B18最适发酵培养基(1L)为蔗糖20 g,大豆粉10 g,牛肉膏5 g,NaCl 2.5 g,CaCO32.0 g;且在初始pH 7.0,初始接种量3%~7%,装瓶量150 mL/250 mL,温度25~30℃,150~200 r/min下发酵72 h所得的发酵液对孢子萌发抑制率最高且菌体量最大。随后测定了发酵条件优化后的B18发酵液的热、酸碱、紫外线以及储藏稳定性。结果表明:B18发酵产物的热稳定性较差,40℃以上其抑菌活性随着温度的升高而降低;发酵液在酸性、中性以及弱碱性条件下稳定性较好,在强碱性条件下稳定性变差;发酵液对紫外线不敏感,有较好的稳定性;发酵液在4℃条件下更稳定,30 d时孢子萌发抑制率仍可达到61.58%,常温条件下不稳定,15 d后抑制率明显降低。

重庆南苍术根腐病病原鉴定

南苍术[Atractylodes lancea (Thunb.) DC.],又称茅苍术,其根茎有燥湿健脾、祛风散寒、明目避秽的功效,具有很高的药用价值[1,2]。南苍术主要分布于我国江苏、浙江、江西、河南、湖北、四川等地,主产于江苏茅山[3,4]。重庆石柱、丰都、涪陵等地的南苍术种植业,已成为当地脱贫的支柱产业。