夏威夷果青皮发酵菌株的筛选及其对发酵后饲用价值的改善作用

本试验旨在筛选适于夏威夷果青皮(MGP)发酵的乳酸菌,并研究其对MGP饲用价值的改善作用。以新鲜MGP为原料,筛选获得同源乳酸菌菌株ZC529,经形态学、生理生化及16S rRNA分析,鉴定为发酵黏液乳杆菌(Limosilactobacillus fermentum)。对菌株ZC529进行生物学特性评价,并与纤维素酶复配后对MGP进行发酵试验,对比发酵前后MGP营养成分、相对饲用价值(RFV)、感官品质和抗营养因子含量。结果显示:菌株ZC529可在10 h内将发酵体系pH降低至4,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有抑制作用,且对10种类型的抗生素均敏感,无溶血现象;可使发酵MGP中粗蛋白质和乳酸含量分别显著提高8.80%和366.67%(P<0.05),使单宁和氰化物的含量分别显著降低83.78%和73.63%(P<0.05),并使中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)含量显著降低(P<0.05),最终使MGP的RFV从88.85显著提高至108.34(P<0.05),饲料感官评分从4.31显著提高至8.43(P<0.05)。综上所述,本研究所获菌株ZC529对MGP发酵环境适应性强,发酵效果好,可使MGP从农业废弃物转变成一种有价值的饲料资源,并为非常规饲料的开发利用提供了优良的发酵菌株资源。

发酵菜籽粕的营养价值测定及其对育肥猪生长性能的影响

本研究旨在通过消化代谢试验测定发酵菜籽粕(FRSM)和菜籽粕(RSM)的生长猪消化能和代谢能,同时通过T型瘘管手术进行生长猪的回肠末端氨基酸消化率测定,并测定FRSM和RSM对育肥猪生长性能的影响。试验1:采用全收粪法测定RSM和FRSM的生长猪消化能和代谢能。选取18头初始体重为(26.41±3.08)kg的“杜×长×大”三元杂交去势公猪,随机分成3组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂玉米基础饲粮,试验组以FRSM和RSM替代基础饲粮中25%的玉米。试验期为19 d,包括适应期7 d,预试期7 d,正试期5 d。试验2:采用无氮饲粮和半纯合饲粮法测定FRSM和RSM的氨基酸回肠末端消化率。选取18头初始体重为(22.47±1.74)kg的“杜×长×大”三元杂交去势公猪,随机分成3组,每组6个重复,每个重复1头猪。对照组饲喂无氮饲粮,试验组分别饲喂添加30%的FRSM和RSM的饲粮。试验期为14 d,包括恢复期7 d,预试期5 d,正试期2 d。试验3:选取20头初始体重为(68.43±2.63)kg的“杜×长×大”三元杂交猪,随机分成2组,每组10个重复,每个重复1头猪。2组分别饲喂含11.2%的RSM和FRSM的试验饲粮。试验期45 d。结果表明:1)在饲喂基础下,FRSM的消化能和代谢能分别为12.00和10.79 MJ/kg,RSM的消化能和代谢能分别为11.12和10.06 MJ/kg。FRSM和RSM的消化能和代谢能存在极显著差异(P<0.01)。2)FRSM的氨基酸表观回肠消化率(AID)和标准回肠消化率(SID)分别为55.62%~78.72%和62.71%~83.14%,其中FRSM的赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、色氨酸和缬氨酸的SID分别为71.51%、71.45%、81.69%、76.79%和74.36%。RSM的氨基酸AID和SID分别为47.74%~77.11%和53.94%~79.98%,其中RSM的赖氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、色氨酸和缬氨酸的SID分别为65.17%、63.65%、79.98%、67.47%和66.26%。3)与RSM组相比,FRSM组的平均日增重(ADG)显著提高(P<0.05),料重比(F/G)极显著降低(P<0.01)。综上所述,与RSM相比,FRSM具有较高的生长猪消化能、代谢能和氨基酸AID、SID,可以提高育肥猪ADG,降低F/G。

斑马鱼心脏发育候选基因Pygo1多克隆抗体的制备及检测

Pygo1是心脏发育候选基因,可能在斑马鱼心脏发育过程中起着重要的调控作用.利用生物信息学选择斑马鱼Pygo1基因抗原亲水区,将扩增出的PCR片段克隆到原核表达pGEMT-4T-1载体中,转入E.coli中后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogalactoside)分别诱导表达GST融合蛋白.蛋白经纯化分离后用于免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.用Western Blot检测抗体的效价和特异性.

斑马鱼基因ATF4多克隆抗体的制备

ATF4是含有bZIP结构域的ATF/CREB转录因子家族成员,对胚胎的发育以及细胞的增殖、分化有重要的调节作用。制备ATF4的多克隆抗体对于研究其在斑马鱼心脏发育过程中的作用有重要的意义。研究首先通过生物信息学方法,选择ATF4基因中特异性强、具亲水性的一段核苷酸序列(1 017 bp),通过PCR扩增,将片段重组到原核表达载体pET-28a,然后转化入Rosetta菌株中。经测序鉴定正确后,用IPTG诱导表达融合蛋白,以该融合蛋白免疫小鼠,获得ATF4多克隆抗鼠血清。对该多抗血清抗体进行验证,具有很好特异性和较高效价,可以用作Western-blotting、免疫印迹等试验分析。

Pericardin蛋白的表达纯化以及多克隆抗体的制备

Pericardin基因是果蝇心脏发育的标记基因,在果蝇心脏发育过程中起着重要的作用.从果蝇体内提取出总RNA,反转录得到果蝇的cDNA,将其作为模板.通过生物信息学分析,选择Pericardin基因抗原亲水区,选取特异性高的片段.将PCR片段克隆到原核表达pET28a(+)载体上,转入E.coli后通过IPTG(Isopropylβ-D-thiogal-actoside)诱导表达His融合蛋白,蛋白经分离纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.经Western Blot检测抗体的效价和特异性.结果显示,获得了Pericardin原核表达重组融合蛋白及高效价的特异性兔抗Pericardin多克隆抗体,为Pericardin功能的进一步研究奠定了基础.

果蝇唾液腺特异基因CG8419多克隆抗体的制备及检测

果蝇CG8419基因与脊椎动物中TRIM45基因为同源基因.以果蝇cDNA为模板通过PCR扩增出亲水性和特异性好的果蝇CG8419基因片段,将其克隆入表达载体PET-28a,构建出重组表达质粒PET-28a-CG8419.将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导出带His标签的重组融合蛋白.通过尿素洗涤包涵体并切胶回收纯化融合蛋白,然后再免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体.Western blot实验分别验证抗体的效价和特异性.果蝇胚胎抗体染色显示该基因在果蝇唾液腺中表达.