表达H1N1亚型猪流感病毒三聚体HA重组慢病毒的免疫原性研究

目的:探讨表达猪H1N1亚型流感病毒三聚体HA的重组慢病毒(r LV-HA-GCN4)对BALB/c小鼠的免疫保护效果。方法:将雌性BALB/c小鼠随机分为重组慢病毒r LV-HA-GCN4组、重组慢病毒r LV-HA组、慢病毒LV空载体对照组及PBS对照组,先后进行质粒和慢病毒2次免疫,间隔为2周,注射部位均为小鼠大腿内侧肌肉;于初次免疫后的第28天,各组小鼠鼻腔滴注50μl 100TCID50的H1N1病毒,采用淋巴细胞转化实验、流式细胞术、间接ELISA和脾肺指数检测各免疫指标。结果:加强免疫后第14天,r LV-HA-GCN4组脾淋巴细胞转化率为0.3±0.11,与PBS组相比,差异有统计学意义(P<0.01),产生以Th1型CD4+T细胞为主的细胞免疫反应;r LV-HA-GCN4组小鼠Ig G抗体效价可达1∶8 000,攻毒后第14天约为1∶7 000;攻毒后,r LV-HA-GCN4组脾肺指数小于PBS组,小鼠体重在前3 d略有下降,随后逐渐上升,两个指标与PBS组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:r LV-HA-GCN4能够诱导小鼠良好的细胞与体液免疫应答,从而有效地保护小鼠抵御猪H1N1流感病毒的感染。

H9N2亚型流感病毒血凝素受体结合区定点突变株拯救及其受体亲和性鉴定

利用重叠PCR技术对H9N2亚型流感病毒Y280亚系毒株A/Chicken/Jilin/DH102/2012(H9N2)的血凝素受体结合区220-loop中相对保守的226位和227位进行了氨基酸置换,并通过反向遗传技术拯救了定点突变病毒。固相酶联试验结果显示:226位为L时,病毒偏嗜结合人型受体;226位为Q时,病毒偏嗜结合禽型受体;226位为M时,病毒同时具有与2种类型受体结合的能力,但偏嗜结合人型受体;227位为Q或M时,病毒均偏嗜结合人型受体。因此,相比于227位,Q226L突变足以改变病毒的受体偏嗜性。由于近年来90%以上的H9N2病毒分离株HA226位氨基酸都是L,推测226L是H9N2病毒感染哺乳动物的重要位点。

H9N2亚型流感病毒NS1蛋白位点突变对IFN-β及其诱导基因转录活性的影响

利用反向遗传技术拯救了H9N2亚型流感病毒NS1蛋白效应区第114,124,202和212位的定点突变病毒。病毒感染后9 h,荧光定量PCR结果显示,当NS1蛋白发生P114S、M124V、S212P氨基酸置换后,可以显著抑制IFN-β及RIG-1、PKR、OAS1、Mx1和ISG15等干扰素刺激基因(ISGs) mRNA的转录活性。由此表明,NS1蛋白的114,124和212位点与H9N2亚型流感病毒拮抗宿主先天性免疫应答密切相关。