血细胞形态学MCAI课件教学效果观察

目的 探讨MCAI课件在血细胞形态学教学中的应用价值。 方法 利用自制MCAI课件与传统教学方法进行对比研究 ,并通过理论与技能考核评估教学效果。 结果 该课件在很大程度上调动了学生的学习兴趣和积极性 ,提高了教学时效 ,提高了学生的学习能力及实践技能。 结论 本课件在血细胞形态学教学中有重要作用 。

BRD7基因在急性白血病细胞中的表达及SNP分析

目的：探讨BRD7基因在急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞（BMNCs）中的表达水平及单核苷酸多态性（SNP）分布。方法：采用半定量RT-PCR方法检测52例AL患者及30例非恶性血液病对照的BMNCs BRD7基因的表达水平，并应用单链构象多态性加直接测序法检测BRD7基因点突变或SNP，分析BRD7基因与AL的相关性。结果：在52例AL患者和30例对照组患者中均存在BRD7基因表达。急性淋巴细胞白血病（ALL）患者和急性非淋巴细胞白血病（ANLL）患者BRD7 mRNA的相对表达量均高于对照组（P=0．001；P=0.037）。BRD7基因编码区（447～844bp）存在3个cSNPs，即C657A，C495T和A737G，其中C495T和A737G偶联发生。C657A多态性的基因频率在AL组和对照中差异无统计学意义。两个偶联的SNPs等位基因频率及基因型频率在AL组和对照中差异存在统计学意义（P〈0．01）；但在AL组中3种基因型之间BRD7 mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：BRD7基因在急性白血病患者细胞中表达上调。BRD7基因编码区（447～844 bp）2个偶联SNPs（C495T和A737G）与AL存在相关性，可能是AL的遗传易感因子之一。

DLK1在急性白血病中的表达及其在K562细胞红系分化中的作用

目的:探讨急性白血病(acute leukemia,AL)患者骨髓单个核细胞DLK1基因的表达水平及其在K562细胞红系分化中的作用。方法:采用RT-PCR对65例AL患者及34例正常骨髓对照进行DLK1mRNA水平的检测,对其中20例AL患者及13例正常骨髓用Western印迹法检测DLK1蛋白表达水平。培养K562细胞,用氯化高铁血红素(hemin)诱导其分化,观察DLK1在红系分化中的变化。结果:在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中DLK1基因均存在明确表达。DLK1mRNA的表达水平AL组高于对照组,差异有统计学意义(P=0.018),但在ALL和ANLL之间DLK1mRNA的表达差异无统计学意义(P>0.05),且DLK1mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。对部分样品检测DLK1蛋白的表达,发现AL患者DLK1蛋白阳性表达率高于对照组,与mRNA表达趋势一致。在hemin诱导K562细胞向红系分化过程中,DLK1mRNA的表达水平逐渐下降。结论:DLK1基因可能参与了AL的发病过程,但DLK1mRNA的表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。DLK1基因可能抑制K562细胞向红系分化。

BRD7、NGX6基因在急性白血病中的表达

目的探讨急性白血病患者骨髓单个核细胞BRD7、NGX6基因的表达水平。方法采用RT-PCR对52例急性白血病(acute leukemia,AL)患者及30例正常骨髓对照进行NGX6、BRD7基因mR-NA水平的检测,对其中7例AL患者用免疫组化法检测BRD7蛋白表达水平。结果在AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞中BRD7、NGX6基因均存在明确表达。NGX6 mRNA的相对表达量在AL组与正常对照中差异无统计学意义(t=-1.014,P=0.982)。而BRD7 mRNA的表达水平AL组高于正常对照组,差异有统计学意义(t=3.672,P=0.001),但在AL各亚型之间BRD7 mRNA的表达差异无统计学意义(t=1.076,P=0.287),且BRD7 mRNA的表达水平与患者初诊时骨髓原始细胞数、外周血白细胞数及血小板数无关。其中,对部分样品检测了BRD7蛋白的表达,结果发现AL患者BRD7阳性表达细胞百分率均值高于正常骨髓对照。结论AL患者和正常骨髓对照的骨髓单个核细胞均表达BRD7和NGX6,且BRD7基因在急性白血病细胞中表达上调,但BRD7 mRNA表达水平与AL患者某些临床特征无相关性。

凝血酶原基因G20210 A多态性与心肌梗死和脑卒中的相关性

目的 :研究凝血酶原基因G2 0 2 10A(FⅡG2 0 2 10A)多态性在中国人群中的分布频率及其与急性心肌梗死和缺血性脑卒中之间的相关性。方法 :运用PCR、限制性内切酶消化及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法检测 173例缺血性脑卒中患者、97例急性心肌梗死患者及 10 7例正常人对照的FⅡG2 0 2 10A等位基因。结果 :未检出一例FⅡG2 0 2 10A基因突变者 ,提示被检病例及正常人FⅡG2 0 2 10A基因变异频率为 0。结论 :在中国人群中 ,FⅡG2 0 2 10A基因变异罕见甚至缺如。FⅡG2 0 2 10A基因多态性不足以成为中国人缺血性脑卒中与急性心肌梗死的危险因素。

急性心肌梗死患者凝血酶原基因G20210A变异频度分析

目的 :探讨FⅡG2 0 2 10A突变在中国人群中的分布频率及其与急性心肌梗塞之间的联系。方法 :运用FⅡG2 0 2 10A等位基因特异性引物PCR ,结合限制性内切酶技术及聚丙烯酰胺凝胶电泳等方法检测 97例急性心肌梗塞患者及 10 7例正常人对照的FⅡG2 0 2 10A基因频率。结果 :未检出 1例FⅡG2 0 2 10A基因突变者 ,提示被检病例及正常人FⅡG2 0 2 10A基因变异频率为 0。结论 :在中国人群中FⅡG2 0 2 10A基因变异罕见甚至缺如。FⅡG2 0 2 10A基因突变不足以成为中国人急性心肌梗塞的危险因素。

血小板CD40配体对内皮细胞表达组织因子的影响

目的探讨活化血小板CD40配体对内皮细胞表达组织因子、组织因子抑制物的影响及其分子机制。方法建立活化血小板与人脐静脉内皮细胞的共孵育体系(细胞比例10∶1),观察内皮细胞组织因子及其抑制物表达的变化,以及阻断CD40-CD40配体相互作用对上述效应的影响。结果活化血小板与脐静脉内皮细胞共育8 h后,内皮细胞组织因子mRNA及蛋白表达显著增高,而应用抗CD40配体的抗体和抗CD40抗体可分别抑制其表达(P<0.05)。但是组织因子抑制物mRNA无明显变化。结论活化血小板可通过其表达的CD40配体分子诱导内皮细胞产生组织因子,但并不能增强内皮细胞组织因子抑制物的表达,此效应对不稳定性斑块的形成可能具有促进作用。

血小板无力症患者血小板GPⅡbⅢa受体亲和力的改变及临床意义(英文)

目的 探讨血小板无力症 (Glanzmann’sThrombasthenia ,GT)患者血小板聚集功能异常的可能机制。方法 采用Western印迹分别检测正常人、GT患者及其父母血小板CPⅡbⅢa的含量 ,流式细胞术分析血小板膜CPⅢa的表达和血小板结合活化型单抗PAC - 1的能力。结果 与正常人相比 ,GT患者GPⅡbⅢa明显减少 ,其血小板结合PAC - 1的能力亦明显低下。结论 GPⅡbⅢa激活受阻可能为部分GT患者血小板聚集功能障碍的分子基础。

GPⅡb^(R995A)点突变对受体亲合力及PP125^(FAK)磷酸化的影响

目的:为了进一步探讨血小板膜(GPⅡb)胞内段在信号传递中的作用。方法:选择表达GPⅡb^(R995A)Ⅲa的CHO细胞为研究对象,以正常人血小板和表达GPⅡbⅢa的CHO细胞为对照,应用流式细胞术、免疫沉淀、western blot-ting等方法检测PAC-1且结合能力和PP125^(FAK)磷酸化。结果:GPⅡbⅢa CHO细胞几乎不结合PAC-1,而GPⅡb^(R995A)ⅢaCHO细胞结合PAC-1明显增加;GPⅡbⅢa CHO细胞只有在粘附纤维蛋白原后才有FAK磷酸化,GP血b^(R995A)Ⅲa CHO细胞在悬浮时即有微弱的FAK磷酸化。结论:本研究提示GPⅡb^(R995A)点突变能改变受体的低亲合力状态,使受体具有高亲合性;该突变还介导细胞内信号传导,引起非配体结合的FAK磷酸化。

整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响

目的 :探讨整合素αⅡbβ3缺陷对血小板由内到外信号传导的影响。方法 :采用DNA序列分析、流式细胞术、RT PCR和Westernblotting等检测细胞中转染cDNA的存在、表达及细胞结合PAC 1、纤维蛋白原 (fibrinogen ,Fb)的能力。结果 :血小板无力症 (GT)患者整合素αⅡbβ3明显低下 ,且血小板在ADP激活后不能结合PAC 1,转染β3和αⅡb(突变αⅡbR995A 或正常αⅡb)cDNA的CHO细胞株分别表达αⅡbR995A β3和αⅡbβ3,并且突变株中国仓鼠卵巢细胞(Chinesehamsterovary ,CHO)细胞αⅡb基因 30外显子上第 30 77和 30 78位碱基由CG突变为GC ,导致第 995位精氨酸被替换为丙氨酸 ;在未活化的情况下 ,αⅡbβ3CHO细胞几乎不结合PAC 1,但能结合Fb ,而αⅡbR995Aβ3CHO细胞能结合PAC 1,且Fb明显增加。结论 :αⅡbR995A 突变能诱导血小板内到外信号传导 ,使αⅡbR995Aβ3表现为激活型受体 ;而GT患者却因整合素αⅡbβ3缺陷使αⅡbβ3介导的血小板由内到外信号传导受阻 ,使该GT患者表现出血小板聚集异常。

全反式维甲酸诱导白血病细胞分化对brd7基因表达的影响

为了探讨brd7基因与白血病细胞分化的关系及其在白血病细胞分化中的作用,本研究采用全反式维甲酸(ATRA)诱导HL-60和K562细胞系分化,通过Wright-Giema染色在显微镜下观察细胞形态学变化,应用流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b的表达,以鉴定细胞分化程度,并在此基础上通过Western blot检测brd7基因在诱导分化前和细胞分化过程中蛋白表达水平的变化。结果发现,ATRA具有抑制HL-60细胞生长的作用,并可诱导HL-60细胞向粒系分化,在ATRA诱导细胞分化过程中HL-60细胞表面CD11b的表达水平逐渐上调,BRD7蛋白表达随着HL-60细胞的分化而增加;ATRA对K562细胞无诱导分化作用,brd7的表达也无明显变化。结论:随着HL-60细胞的分化,brd7基因表达上调,其机制有待进一步阐明。

血小板膜受体多态性与血栓性疾病

血小板膜受体具有高度多态性,其分子基础是受体基因变异,受体基因变异可导致受体功能缺陷,临床上导致出血;也可以不影响受体功能,但与血小板同种免疫反应密切相关。90年代以来,诸多研究认为受体多态性与血栓形成有关。本文综述了血小板膜受体多态性的组成、结构及其与血栓性疾病的关系等方面的研究进展。

苦参碱联合糖皮质激素治疗原发免疫性血小板减少症的临床疗效观察

目的:探讨苦参碱联合糖皮质激素治疗原发免疫性血小板减少症(ITP)的临床疗效。方法:将78例ITP患者按随机数字表法分为对照组(38例)和观察组(40例),对照组给予泼尼松片口服治疗,观察组在对照组基础上给予苦参碱注射液静脉滴注治疗。连续治疗2周后,对两组患者进行疗效评估,观察各组治疗前、后血小板计数及淋巴细胞亚群CD3、CD4、CD8细胞百分比及CD4/CD8比值的变化,并记录治疗期间的不良反应发生情况。结果:观察组治疗总有效率为94.73%,显著高于对照组的75.00%(P<0.05)。两组患者的血小板计数在不同治疗方式或不同治疗时间的比较,差异均有统计学意义(均P<0.05),且随着药物治疗时间的延长,血小板计数逐渐增加。治疗2周后两组CD3、CD4及CD4/CD8均显著高于治疗前(均P<0.05),CD8细胞所占百分比显著低于治疗前(P<0.05),且与对照组比较,观察组治疗前、后CD3、CD4及CD4/CD8的差异更为显著(均P<0.05)。两组治疗后的不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:苦参碱联合糖皮质激素治疗ITP的效果显著优于糖皮质激素单独用药,能够增加血小板数量,调节T淋巴细胞表达,增强机体免疫功能,且无明显不良反应,安全性较高,值得临床推广应用。

miRNA-19b在急性淋巴细胞白血病发病中的作用机制

目的探讨miRNA-19b对Notch1信号通路的调控作用及miRNA-19b调控下的Notch1信号通路在急性淋巴细胞白血病发病中的作用及机制。方法 Real-time PCR法检测急性淋巴细胞白血病中miRNA-19b和Notch1信号通路相关分子的表达水平。分别利用miRNA-19b前体片段及miRNA-19b anti-sense片段过表达及干扰miRNA-19b的表达,MTT法检测miRNA-19b过表达及干扰对急性淋巴细胞白血病患者单个核细胞数量的变化,同时利用Western印迹法检测miRNA-19b过表达及干扰后Notch1信号通路的激活水平。结果 (1)急性淋巴细胞白血病中miRNA-19b和Notch1信号通路相关分子Notch1及Hes5的表达水平较正常对照组显著升高(P<0.05)。(2)miRNA-19b过表达及干扰后MTT结果显示miRNA-19b可上调急性淋巴细胞白血病中单个核细胞的数量。(3)Western印迹检测显示miRNA-19b过表达可促进Notch1信号通路中Notch1及Hes5的表达,而miRNA-19b干扰后两分子的表达水平下调。结论 miRNA-19b通过激活Notch1信号通路促进急性淋巴细胞白血病的发病。

脐血CD34^+细胞体外培养生成成熟巨核细胞并产出血小板的研究

目的:诱导脐血造血细胞在体外分化为成熟的巨核细胞并产出血小板,以探讨血小板的生成及释放机制。方法:通过采用优化的培养体系对免疫磁珠分选后得到的脐血CD34+细胞分别进行向巨核系分化的液体培养和集落培养,将培养的细胞和分离的上清液中的血小板样颗粒进行流式细胞术、免疫组织化学染色、光镜、电镜及血小板聚集实验的检测。结果:培养的巨核细胞有前血小板伸出,培养的巨核细胞和血小板样颗粒与正常的巨核细胞和血小板结构一致。免疫组织化学染色检测显示培养的细胞表达血小板特异性抗原GPⅡbⅢa的阳性率为95%以上,且为强阳性。培养的血小板大小颗粒与正常血小板均能对凝血酶产生聚集反应。流式细胞仪检测显示培养的血小板与正常血小板均具有同样的CD41高表达率。结论:脐血造血细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞并产出血小板,为血小板生成机制研究提供一个良好的技术平台。

地西他滨联合CAG方案在急性复发难治性急性髓系白血病中的初步应用

复发难治性急性髓系白血病（Acute myeloid leukemia,AML）,除高强度的化疗、造血干细胞移植外,治疗手段十分有限。此类患者对常规诱导化疗的完全缓解（Complete remis-sion,CR）率显著降低,强烈诱导化疗患者早期病死率相当高,而小剂量化疗疗效差,患者生存期短。寻找新的有效治疗方案对改善患者预后及生存质量具有十分重要意义。

低龄多发性骨髓瘤一例并文献复习

目的提高对低龄多发性骨髓瘤的认识,减少其误诊率和漏诊率。方法分析1例19岁多发性骨髓瘤患者的实验室检查结果及治疗,并进行相关文献复习。结果患者首先表现为皮肤紫癜,血细胞沉降率明显增快,免疫球蛋白明显增高;后出现骨痛,放射性核素扫描全身骨显像示胸骨、肋骨、脊柱等多处骨质代谢异常;骨髓穿刺涂片显示大量异常原始浆细胞和幼稚浆细胞,成熟红细胞呈缗钱状分布。结论对于皮肤紫癜伴有血细胞沉降率明显增快、免疫球蛋白明显增高、不能用过敏性紫癜等引起紫癜的常见疾病解释者,即使是低龄患者,亦应警惕MM的可能性。

脐血CD34^+细胞体外诱导分化为成熟巨核细胞及产出血小板(英文)

背景:据作者查新检索,国外尚无通过体外诱导干细胞生成具有功能的血细胞并形成产品的报道。目的:体外诱导脐血CD34+细胞向成熟巨核细胞分化,并观察血小板产出情况。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2004/2006在湘雅医院及湘雅三医院中心实验室完成。材料:脐带来源于足月妊娠健康产妇,由湘雅医院提供。方法:免疫磁珠法分选脐血CD34+细胞,按5×107L-1密度接种于24孔培养板,加入含L-谷氨酰胺、铁饱和的人转铁蛋白、CaCl2、胰岛素、去离子牛血清白蛋白及重组人血小板生成素的StemPro-34无血清培养基,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度条件下向巨核细胞诱导培养14~21d。吸取细胞培养液,离心取上清,再次离心弃上清,余下物质即为细胞培养液中比重较小的血小板样颗粒。同法分离正常富血小板血浆中的血小板。主要观察指标:培养细胞与上清液中血小板样颗粒的形态变化、免疫组织化学染色结果、显微及超微结构观察,血小板聚集情况及CD41的表达。结果:培养第10天,巨核细胞诱导培养体系中出现丝状物质,并有血小板样颗粒产生,第16天达高峰;培养细胞强阳性表达血小板特异性抗原GPⅡbⅢa;光镜观察培养细胞呈成熟巨核细胞形态,但也可见幼稚巨核细胞样,巨核细胞旁可见血小板样颗粒;电镜观察培养细胞大多呈成熟巨核细胞形态,少量呈凋亡状态,上清液中血小板样颗粒与富血小板血浆中的血小板大小、超微结构基本一致,有的血小板表面光滑,有的则呈现不规则表面。上清液中血小板样颗粒与正常富血小板血浆中的血小板均能对凝血酶产生聚集反应,流式细胞仪检测两者具有同样的CD41高表达率。结论:脐血CD34+细胞能在体外诱导生成高纯度且成熟的巨核细胞,并产出血小板。

以特殊症状为首发表现的白血病临床分析

目的讨论以髓外浸润为首发表现的白血病的临床特点,提高对这一类白血病的认识。方法分析3例以髓外浸润为首发表现的白血病患者的临床表现、实验室及影像学检查,并进行文献复习。结果 3例白血病患者在确诊前均分别出现不同的髓外浸润症状:头痛、呕吐及颅骨破坏表现;会阴部感觉障碍,小便失禁;肢体麻木、疼痛。3例患者均经骨髓细胞形态学检查确诊为白血病,经抗白血病治疗,上述浸润症状得到明显改善。结论以颅骨破坏、颅高压、脊髓压迫症等为首发表现的白血病罕见,易给早期诊断带来困难,需提高对这一类白血病的警惕。