外周血snoRNA单一及组合panel对原发性肝癌的诊断价值

目的 探讨外周血中小核仁RNA(snoRNAs)单一及组合panel在肝细胞癌(HCC)患者中的水平差异以及联合甲胎蛋白(AFP)在临床诊断中的应用价值。方法 选取2022年12月至2023年8月该院就诊的35例HCC患者(其中AFP阳性30例,AFP阴性5例)作为研究对象(住院期间接受了“腹腔镜下肝段切除术”),另选择同期于该院体检的35例体检健康者作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)检测HCC组患者术前后以及对照组外周血中5条snoRNAs(SNORD17、SNORA42、SNORD52、SNORD105和SNORD126)的表达水平以及检测HCC组患者术前后外周血中AFP的水平,并建立受试者工作特征(ROC)曲线对表达差异具有统计学意义的snoRNAs的诊断价值进行评估。结果 所研究的5条snoRNA中发现有3条snoRNA在AFP阳性和阴性的原发性HCC患者与健康人群外周血的表达水平比较,差异均具有统计学意义(P<0.05),其中SNORD52、SNORA42表达显著升高;SNORD17表达显著下降。ROC曲线显示SNORD17、SNORA42、SNORD52以及联合指标均具有较高的诊断效能,snoRNAs联合AFP能进一步有效地提高诊断效能。并且在术后7 d, HCC患者的SNORD52、SNORA42表达下降(P<0.05),而SNORD17表达水平较术前比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 外周血中小核仁RNA SNORD52,SNORD17和SNORA42是一组与HCC诊断相关的潜在分子标志物,进一步联合现有的肿瘤标志物AFP能够极大地提高诊断效能,这对HCC的诊断与鉴别具有较高的临床价值。

T细胞抗原表位预测的研究方法进展

确定T细胞所识别抗原分子上的短肽序列对T细胞表位进行定位,对于研究特异性免疫应答有着重要意义。综述了近年来实验确定和理论预测T细胞蛋白质抗原表位的常用方法,以及T细胞抗原表位分析的研究方法。

基于“单碱基延伸和酶放大系统”的SNP漏声表面波生物传感器的实验研究

目的探讨漏声表面波生物传感器检测单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)的方法。方法分别在漏声表面波生物传感器反应体系加入2条仅存在一个碱基不同(A/G)的靶序列,与固定的探针杂交。利用酶生物信号放大系统,结合单碱基延伸技术,观察其杂交信号的改变。结果靶位点为完全匹配的A时,相位下降(6.47°±0.42°);而靶位点为错配的G时,相位下降仅为(0.77°±0.25°),两者差异有统计学意义(P<0.01)。结论成功建立了漏声表面波生物传感器检测SNP的新方法。

重庆地区不同育龄围产期女性B族溶血性链球菌的研究

目的探讨该地区不同育龄女性围产期B族溶血性链球菌（GBS）感染情况。方法采用聚合酶链式反应（PCR）和实时荧光定量PCR（RT-PCR）技术,对该院2015年1月至2016年1月3 206例标本进行GBS核酸检测。结果 GBS阳性标本226例,阴性2 980例,感染率为7.05%,20-25岁组为6.88%,26-30岁组为6.51%,31-35岁组为7.50%,36-40岁组为11.46%,40岁以上组为11.11%,其中30-40岁组感染率最高。不同组别之间两两比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。该地区育龄女性与北京、南京、上海等地区比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论对该地区34-37周围产期女性开展GBS筛查,降低感染率,为围产期保健提供临床价值。

探索ISO15189在检验科实习教学管理中的应用

检验医学涉猎知识面广,实习生任务繁重,为培养高素质、复合型医学检验专业人才,本文参照国内外医学实验室广泛认可的ISO15189质量管理体系对临床实习教学管理模式进行探索,以期实现高质量实习带教水平的目标。

重庆地区脑卒中患者Hcy水平及MTHFRC677T基因多态性研究

目的 研究重庆地区脑卒中患者血浆同型半胱氨酸（Hcy）水平及亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）C677T基因多态性的分布。方法 选取2015年4~11月在该院神经内科住院并诊断为脑卒中的患者共292例,其中排除52例未检测Hcy水平的患者,选取剩余的240例（男116例,女124例）作为本次研究对象。采用酶循环法检测患者Hcy水平。提取患者全血DNA,采用基因芯片技术检测其MTHFR C677T基因的多态性。结果 共检测出3种不同的MTHFR基因型：C677C型、C677T型、T677T型,频率分别为42.9%、44.2%、12.9%,其中C等位基因频率为65%,T等位基因频率为35%。CC基因型在男女之间的分布比较,差异有统计学意义（P=0.003）,C等位基因在男性患者中的频率明显高于女性患者（P〈0.05）。重庆地区与河南豫北地区脑卒中患者MTHFR C677C基因型与T677T基因型分布比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。TT型的Hcy水平与CC、CT型比较差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 重庆地区脑卒中患者MTHFR C677T基因存在多态性分布,且与河南豫北地区存在差异;MTHFR C677T基因多态性与Hcy水平相关,TT基因型的Hcy水平明显高于CC、CT基因型。

重庆地区CYP2C9和VKORC1基因多态性与华法令药物敏感性的相关研究

目的探讨重庆地区CYP2C9和VKORC1基因多态性频率分布及与华法令药物敏感性的相关性。方法收集陆军军医大学大坪医院2017年2月至2018年12月CYP2C9和VKORC1基因多态性检测患者657例作为研究对象,采用基因芯片杂交法检测CYP2C9及VKORC1基因多态性。结果(1)重庆地区共检测出8种基因型,主要以*1/*1 AA为主,频率为73.52%;(2)重庆地区人群以华法令敏感型(*1/*1 AA、*1/*3 GA、*1/*2 AA、*1/*2 GA、*1/*3 GG)为主,频率为74.73%,华法令建议起始剂量3.0~4.0 mg;(3)CYP2C9和VKORC1基因多态性分布在性别、疾病间差异无统计学意义(P>0.05)。结论重庆地区CYP2C9和VKORC1基因型以*1/*1 AA为主,其中华法令敏感型占74.73%,建议华法令用药前进行CYP2C9和VKORC1基因检测便于指导华法令用药。

RCA技术检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的应用研究

目的建立一种检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的滚环扩增技术(rolling cycle amplification,RCA)。方法以甲型H1N1流感病毒耐药基因M2基因和NA基因为研究对象,设计检测该基因突变位点的环化探针,环化探针通过与发生单碱基突变的基因特异性结合并被连接成闭合环状,进行滚环扩增后从而特异性地检测单碱基突变。讨论用于该检测的RCA技术的合适反应条件,通过对人工合成的野生型和突变型靶序列检测,确定该方法的特异性和灵敏度。最后通过对临床标本的检测及与测序结果比对,验证该方法的准确性。结果检测单碱基突变需要严格的反应条件,采用热循环连接法和提高连接温度(65℃),保证了检测特异性。通过对含有不同浓度突变靶序列标本的检测确定了该方法能检测出最低1%含量的突变株。RCA技术检测结果与测序方法结果一致。结论成功建立检测甲型H1N1流感病毒耐药基因单碱基突变的RCA技术。

泰国伯克霍尔德菌错误鉴定1例

目的鉴定1例曾被错误鉴定为类鼻疽伯克霍尔德菌的泰国伯克霍尔德菌。方法对1例肺脓肿合并败血症患者的痰液和血液标本进行细菌分离培养、生化鉴定、分子生物学鉴定和药敏试验鉴定。结果培养出革兰阴性短小杆菌;生化鉴定特征符合泰国伯克霍尔德菌;测序结果显示与泰国伯克霍尔德菌相似度达100%,与类鼻疽伯克霍尔德菌相似度为99%;全基因组测序结果显示该菌与泰国伯克霍尔德菌E444具有最近的亲缘关系。药敏试验结果显示该菌对亚胺培南、左氧氟沙星、哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑敏感。结论成功鉴定了1例泰国伯克霍尔德菌。

临床分子生物学检验住院医师规范化培训带教探讨

检验住院医师规范化培训是提高检验医师队伍素质的一条重要途径,本文结合临床分子生物实验室的特点,探讨了临床分子生物学检验住院医师规范化培训带教方法,旨在为培养基础技能扎实、实践能力强、结合临床的高素质复合型人才提供参考。

分子生物实验室带教体会

随着人类基因组计划的启动,现代医学和生命科学突飞猛进的发展,生物化学与分子生物学已成为高等课程教学中必不可少的部分,与此同时,分子生物学检验也已成为检验医学的重要组成部分。目前,基因检测已成为临床诊断和鉴别疾病的主要手段。因此,建立规范化的分子生物实验室,开展更多的有临床意义的基因检测项目,培养更多的分子生物学领域人才已然成了各医院及医学院工作的核心部分。现根据近年来对该院检验科分子生物实验室实习生及见习生的带教工作,总结了几点带教体会。

结核感染者外周血单个核细胞NLRP3的表达研究

目的检测NLRP3mRNA在潜伏期、活动期结核患者及健康者中的表达差异,探讨NLRP3在结核感染中的作用。方法选取10例活动期结核患者(活动期结核组),20例潜伏期结核患者(潜伏期结核组),20例健康体检者(正常对照组)作为研究对象,利用反转录PCR方法检测各组研究对象外周血单个核细胞中NLRP3mRNA的表达水平,并比较各组间的差异。结果活动期结核组NLRP3 mRNA表达量是正常对照组的3.71倍,差异有统计学意义(P<0.05);潜伏期结核组NLRP3 mRNA表达量是正常对照组的1.60倍,差异无统计学意义(P>0.05)。结论NLRP3可能参与了结核活动期的炎症反应过程,为进一步研究其在抗结核感染中的作用打下了基础。

肥胖对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征及血压的影响

目的探讨肥胖对阻塞性睡眠呼吸暂停综合征（OSAS）及血压的影响。方法测量261例OSAS患者的血压、腰围、腹内脂肪等指标，分析肥胖与睡眠监测相关指标及血压的关系，探讨OSAS者腹内脂肪在其中的作用。结果肥胖的OSAS的患者者高血压检出率明显高于正常体重OSAS患者；腹内脂肪面积≥85cm。组与〈82组比较，患者的收缩压较高，睡眠监测相关指标也有显著差异（P〈0．01）。结论肥胖及腹内脂肪堆积对OSAS及血压有显著影响。

一种新型PPy丙酮气体敏感膜的制备研究

目的利用羟丙基甲基纤维素(HPMC)作为模板在溶液中合成一种新型的纳米尺度的聚吡咯(PPy)颗粒,并初步探索该PPy颗粒对丙酮气体的反应性。方法吡咯单体在三氯化铁的作用下氧化形成PPy,非离子型表面活性剂HPMC在研究中作为模板以形成纳米尺度的聚合物颗粒,本研究使用场效应扫描电镜(FE-SEM)以及傅立叶红外光谱分析仪(FT-IR)对该新型PPy颗粒进行表征。将该聚合物材料旋涂于SAW器件表面制备成SAW气敏芯片,对10ppm、100ppm的丙酮气体和9.4ppm的氨气进行敏感性分析。结果使用HPMC作为模板合成的新型PPy颗粒直径有随HPMC含量一起增加的趋势,但均明显小于不用HPMC作为模板所合成的PPy颗粒的直径;红外光谱分析表征出了吡咯环典型的振动波峰;该PPy敏感膜对丙酮的反应性优于氨气,SAW传感器频率变化幅度随丙酮浓度增加而增加。结论利用HPMC作为模板合成了一种具有纳米尺度的新型PPy颗粒,该材料对丙酮气体敏感性较好,可以作为丙酮气体检测的敏感膜材料。

临床分子生物学实习带教模式转变的思考

结合多年实习带教经验和分子生物学学科特点,该院联合运用以问题为导向的学习教学法、演示加讲解教学法和角色互换案例式教学法进行分子生物学的实习带教。

一种新型500MHz声表面波氨气传感器的研究

介绍了一种新型声表面波氨气传感器的基本工作原理和设计方法,声表面波器件的振动模式为瑞利波模式,工作频率为500 MHz。聚苯胺作为敏感膜材料,电路结构采用参比-差分输出方式。通过优化声表面波器件设计、薄膜制备工艺和气路、电路设计,研制出声表面波氨气传感器,其具有灵敏度高,响应速度快和解吸附快的特点。

实验诊断学典型病例分析题库的构建

以检验报告单展开病例讨论的教学模式极大提高了实验诊断学的教学效果,现阐述构建实验诊断学典型病例分析题库必要性的基础上,介绍分析题库的构建过程,指出分析题库的构建对提高实验诊断学教学质量的重要作用。

全血中EB病毒DNA定量检测在鼻咽癌患者预后中的临床意义

目的探讨鼻咽癌(NPC)患者全血中EB病毒(EBV)DNA定量检测对NPC的治疗及预后的评估价值。方法收集2015年1-12月在本院初诊的NPC患者168例(初诊NPC组),NPC放疗患者142例(NPC放疗组),NPC伴转移患者28例(NPC伴转移组),以及NPC治愈后复查患者86例,分别采集全血标本,采用实时荧光定量PCR方法检测标本中EBV DNA含量,计算各组EBV阳性率及平均拷贝数,并分析NPC患病率与EBV感染率之间的关系,比较各组间EBV DNA拷贝数对数之间的差异。结果各组EBV DNA阳性检出率分别为初诊NPC组89.3%(150/168),NPC放疗组55.0%(78/142),NPC伴转移组100.0%(28/28),前3组明显高于NPC治愈后复查组6.9%(6/86);另外,各组EBV DNA平均拷贝数分别是初诊NPC组3.52×104,NPC放疗组1.12×102,NPC伴转移组8.68×104,NPC治愈后复查组2.21×10。结论 EBV DNA检测不仅是诊断NPC的一个重要因素,而且是评估患者治疗效果,疾病进展和预后的重要因素。

rs548234 T/C与中国西南地区汉族人群结核发生风险的关联性研究

目的在中国西南地区汉族人群中验证PRDM1-ATG5基因之间的rs548234 T/C单核甘酸多态性与结核病发生风险间的相关性。方法采用病例-对照研究设计,募集了234例结核病患者和208例健康对照个体。应用直接测序法对rs548234多态性进行分型,采用卡方检验和Logistic回归分析,校正性别和年龄等混杂因素的影响,评价rs548234位点与结核病发生风险,以及结核病亚型的遗传关联性。结果 rs548234位点在病例和对照组中的基因型分布均符合哈-温平衡。在整个研究人群中本位点与结核病的发生风险无遗传学关联。然而我们发现原发性肺结核病患者中CC基因型频率高于健康对照人群(CC vs TT:OR=2.14,95%CI=0.91～5.10,P=0.079;CC vs CT+TT:OR=2.50,95%CI=1.09～5.73,P=0.026),提示rs548234 C等位基因可能增加原发性肺结核病的发生风险。结论在中国西南地区汉族人群中PRDM1-ATG5基因之间的rs548234 T/C多态性位点可能参与了原发性肺结核病的发生发展。

长链非编码RNA MALAT1在鉴别结核感染中的价值

目的结核分枝杆菌毒力因子ESAT6对巨噬细胞长链非编码RNA MALAT1表达的影响,以及MALAT1在结核感染鉴别诊断中的价值。方法采用定量PCR观察MALAT1在THP-1巨噬细胞中的表达,采用电化学分析和siRNA干扰分析MALAT1对巨噬细胞分泌促炎性因子IL-1β的影响。采用定量PCR检测MALAT1在3种结核感染状态人群外周血单个核细胞中的表达水平,通过受试者工作特征(ROC)曲线探索MALAT1表达水平在鉴别结核感染状态中的价值。结果 MALAT1在ESAT6刺激THP-1巨噬细胞24 h后表达下调(P<0.05)。siRNA干扰MALAT1表达后,ESAT6诱导的巨噬细胞中IL-1β水平进一步上升(P<0.000 1)。MALAT1在活动组中的表达显著低于未感染组(P<0.05),活动组与潜伏组、潜伏组和未感染组组间表达无明显差异。MALAT1在鉴别未感染组和活动感染组的ROC曲线下面积为0.679。结论 MALAT1可能介导ESAT6诱导的巨噬细胞中促炎性因子IL-1β的分泌。同时,MALAT1可能是辅助诊断结核活动性感染的生物标志物。