空肠弯曲菌感染动物模型的研究进展

空肠弯曲菌是一种全球关注的人兽共患病原菌,感染后可引起人和动物多种疾病。动物模型是开展致病机理、疫苗评价和药物开发等研究的基础。空肠弯曲菌由于培养条件苛刻以及感染实验动物的疾病相似性、经济性和重复性等因素,仍缺乏良好的感染动物模型,其致病机理迄今尚不清楚。本文对已报道的空肠弯曲菌感染实验动物模型进行综述。

空肠弯曲菌鞭毛研究进展

空肠弯曲菌是世界范围内广泛流行的一种食源性病原菌,鞭毛是其主要的毒力因子,在其致病过程中发挥重要作用。本文对空肠弯曲菌鞭毛结构,合成机制及其作用进行综述,以期为了解空肠弯曲菌鞭毛的基本信息及其致病机理提供参考。

空肠弯曲菌FlhF单克隆抗体的制备与鉴定

目的原核表达空肠弯曲菌FlhF蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法扩增空肠弯曲菌flhF基因并将其插入到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,分别以亲和纯化柱纯化后的蛋白rHis-FlhF和rGST-FlhF为免疫原和检测原进行杂交瘤细胞的筛选。采用间接ELISA测定mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性。结果成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-flhF和pGEX-6p-1-flhF,并融合表达rHis-FlhF和rGST-FlhF蛋白。筛选获得2株稳定分泌抗FlhF的单克隆杂交瘤细胞株,分别命名为2C12和7A9,其Ig亚类均为IgG1,腹水效价分别为1×109和2×107,Western blot法分析表明2株mAb均能与纯化蛋白rHis-FlhF有良好的反应性,Dot-ELISA试验表明2株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应。结论成功制备了具有较高特异性的空肠弯曲菌FlhF蛋白的mAb。

维生素D缺乏模型小鼠子宫转录组的测序分析

背景:近来发现维生素D受体广泛分布在卵巢、子宫等女性生殖系统,与自然流产及妊娠期糖尿病等不良妊娠结局密切相关,但其具体机制尚不清楚。目的:通过对维生素D缺乏小鼠子宫组织进行全转录组分析,寻找潜在差异表达miRNA及相关调控网络。方法:取雌性C57BL/6J小鼠18只随机分为2组,维生素D缺乏组给予维生素D缺乏饲料喂养,正常对照组给予维生素D充足饲料喂养,每周记录小鼠体质量。8周后检测小鼠血清中25,(OH)D3和激素水平,对小鼠子宫组织进行苏木精-伊红染色并收集两组子宫组织进行转录组测序,进行基因本体、京都基因与基因组百科全书生物信息学分析。结果与结论:①两组小鼠间体质量无明显差异;与正常对照组相比,维生素D缺乏组小鼠血清25,(OH)D3、雌二醇水平显著降低,睾酮水平显著升高;②子宫组织苏木精-伊红染色结果显示,维生素D缺乏组子宫内膜皱褶减少;③转录组测序结果共筛选出差异表达的miRNA 25个,其中上调9个(如miR-541-5p和miR-205-5p),下调16个(如miR-378d和miR-708-5p);④同时维生素D缺乏小鼠在多项基因本体富集类别中具有显著差异,如发育过程、细胞成分组织或生物发生等;此外,京都基因与基因组百科全书功能富集结果显示,差异表达基因多与生化代谢途径和信号转导途径相关,且些富集通路中的差异表达基因主要影响了PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、胰岛素信号通路、促性腺激素释放激素信号通路及卵母细胞减数分裂通路,与生殖系统调控密切相关;⑤结果表明,维生素D缺乏可导致雌鼠子宫着床条件变差,并与调节小鼠生殖系统胰岛素等多个信号通路相关。

空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素单克隆抗体的制备与鉴定

【目的】原核表达空肠弯曲菌细胞致死性肿胀毒素B蛋白(CdtB),制备其单克隆抗体(mAb),并研究mAb抗毒性作用。【方法】扩增空肠弯曲菌cdtB基因并将其构建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表达载体,以原核表达的GST-CdtB蛋白为免疫原,应用杂交瘤技术进行细胞融合;采用间接ELISA方法测定细胞上清和mAb腹水效价,Dot-ELISA、Western blot分析mAb特异性,并以CaCo-2和HD-11细胞为模型,鉴定mAb抗毒性能力。【结果】成功构建重组原核表达质粒pET-30a(+)-cdtB和pGEX-6p-1-cdtB,并融合表达rHis-CdtB和rGST-CdtB蛋白。获得5株稳定分泌CdtB抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1F3,1F5,2E4,2E11,2F2。抗体Ig类和亚类检测显示2E11 Ig亚类为IgG2b,其他4株均为IgG1。抗体效价高达1:(1×108)。Dot-ELISA试验表明5株mAb均能与空肠弯曲菌标准株发生特异性反应,与非空肠弯曲菌呈阴性反应;Western blot法分析表明5株mAb均能与纯化蛋白rGST-CdtB有良好的反应性。基于CaCo-2细胞的黏附和侵袭实验表明mAb能显著降低细菌的黏附和侵袭能力(P<0.01)。【结论】成功制备了针对空肠弯曲菌CdtB蛋白的mAb。为进一步研究空肠弯曲菌致病机制,以及为研制治疗性类药物奠定了基础。

两例2p15-p16.1微缺失综合征的产前诊断

目的明确2例畸形流产患儿染色体拷贝数变异,分析引起2p15-p16.1缺失综合征畸形表型的相关基因以及关键区域。方法应用染色体微阵列分析(chromosomal microarray analysis,CMA)技术对畸形流产儿全基因组拷贝数目进行检测,并用计算机软件及生物信息学方法进行分析。结果CMA检测到2例患儿的染色体2p15-16.1区段有约255 kb的DNA拷贝数变异,2例患儿表型符合2p15-p16.1微缺失综合征遗传特征,缺失区域包含XPO1和USP34基因。结论2pl5近端73 kb的片段(chr2:61659957〜61733075,hg19)可能是引起2p15-p16.1微缺失综合征畸形表型的关键区域之一,XPO1和USP34为该缺失综合征的候选基因。