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SSCP技术解析硫酸盐还原反应器中微生物群落结构 被引量:18
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作者 赵阳国 任南琪 +3 位作者 王爱杰 刘广民 赵秋实 商淮湘 《环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第4期171-176,共6页
采用改进的单链构象多态性(SSCP)技术,以16SrRNA基因的V3区为靶对象,分析完全混合式硫酸盐还原反应器中微生物的群落结构以及硫酸盐还原菌(SRBs)与产酸菌(ABs)的种间关系.共得到13个可辨晰的SSCP条带,对其中的6条带(A1,A3,A4,A5,A9,A10... 采用改进的单链构象多态性(SSCP)技术,以16SrRNA基因的V3区为靶对象,分析完全混合式硫酸盐还原反应器中微生物的群落结构以及硫酸盐还原菌(SRBs)与产酸菌(ABs)的种间关系.共得到13个可辨晰的SSCP条带,对其中的6条带(A1,A3,A4,A5,A9,A10)进行了测序分析,分别同嗜柠檬酸明串球菌(GenBank登录号:AY453065,下同)、未培养细菌(AJ318147,AF227834,AJ576427)、产乙醇杆菌(AY434722)、梭杆菌(AB084627)等相似性较大.为检测系统中的SRBs,以SRBs富集培养基,对反应器中的活性污泥进行选择性富集,培养的混合菌群同样采用SSCP分析,带型与前者相差较大,其中有2条带与Bacteroidetes(AB074606)和脱硫弧菌(Y12254,U42221)最为相似.分析表明,SRBs在总DNA中的含量可能不到1·5%,但是它们与大量的ABs形成很好的种间协作关系,从而维持工艺系统较高的硫酸盐去除率和运行稳定性. 展开更多
关键词 微生物群落 群落结构 单链构象多态性 硫酸盐还原菌 产酸菌
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硫酸盐废水处理系统强化菌株的分离鉴定及功能基因分析 被引量:5
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作者 赵阳国 任南琪 +1 位作者 王爱杰 商淮湘 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2401-2406,共6页
Multiple strains of sulfate-reducing bacteria(SRB)were isolated from sulfate wastewater treatment bioreactor and determined by polymerase chain reaction(PCR) with SRB-specific 16S ribosomal RNA gene primers.One of... Multiple strains of sulfate-reducing bacteria(SRB)were isolated from sulfate wastewater treatment bioreactor and determined by polymerase chain reaction(PCR) with SRB-specific 16S ribosomal RNA gene primers.One of the strains isolated,strain F28-1 was further studied by sequencing the complete 16S ribosomal RNA gene,testing carbon resource utilization,and demonstrating the key enzyme gene structure related to sulfate metabolism,dissimilatory sulfite reductase(Dsr)gene.Blast retrieving results indicated that the SRB belonged to Desulfovibrio,its 16S ribosomal RNA gene sequence was similar to Desulfovibrio desulfuricans subsp.desulfuricans strain Essex 6(AF192153),with identity 99.9%,and therefore,the strain was named as D.strain F28-1.Strain F28-1 was able to use glucose,propionic acid,lactic acid,acetic acid,ethanol and methanol as sole carbon resource and reduce sulfate to sulfide.It removed 95% sulfate within 72 h in a lab-scale experiment with lactic acid as electron donor.ORF finder program checked out two open reading frames(ORFs)in dsr gene sequence,dsrA and dsrB,which had 14% identity.Corresponding α-and β-subunit amino acid sequences were obtained according to the DNA sequence.α-subunit contained two conserved motifs,i.e.(C-X5-C)-Xn-(C-X3-C),which was required for binding to siroheme; and CP-Xn-C-X2-C-X2-C required for binding to Fe4S4 clusters.In addition,the β-subunit contained only the Fe4S4 clusters binding site,but the siroheme binding site was missing.The SRB,which had multi-substrates utilization and high sulfate reduction power,supplies the starting bacterium for enhancing the efficiency of sulfate wastewater treatment.The detailed knowledge of the enzyme structure provides the target for the quantitative PCR gene locus and helps to improve its biological sulfate-removal potential. 展开更多
关键词 硫酸盐废水处理 脱硫脱硫弧菌F28-1 异化型亚硫酸盐还原酶基因
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快速筛检活性污泥中硫酸盐还原菌的新方法 被引量:1
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作者 赵阳国 任南琪 +2 位作者 赵秋实 王爱杰 商淮湘 《哈尔滨工业大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第4期571-575,共5页
由于硫酸盐还原菌(SRB)的生物学多样性以及在系统发育学上的分散性,采用传统方法筛选活性污泥中的SRB准确率不高,且耗时、耗力,而直接采用16S rRNA基因(rDNA)序列分析方法既耗资又不适合从大量细菌中检测SRB.本研究开发出一种新方法,采... 由于硫酸盐还原菌(SRB)的生物学多样性以及在系统发育学上的分散性,采用传统方法筛选活性污泥中的SRB准确率不高,且耗时、耗力,而直接采用16S rRNA基因(rDNA)序列分析方法既耗资又不适合从大量细菌中检测SRB.本研究开发出一种新方法,采用SRB16S rDNA特异引物SRB385F为正向引物,真细菌通用引物EUB926R为反向引物,通过梯度PCR,选择适当的退火温度来扩增SRB通用培养基分离的细菌,通过扩增条带与阳性和阴性对照比较,判断待检测菌株是否为SRB,整个过程仅需6h即可完成.将测试菌株进行16S rDNA测序表明该技术获得的阳性菌株全部为SRB. 展开更多
关键词 梯度PCR 快速筛选 硫酸盐还原菌 活性污泥
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SSCP技术在微生物群落监测中的应用 被引量:1
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作者 赵阳国 任南琪 +2 位作者 王爱杰 赵秋实 商淮湘 《中国给水排水》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期25-28,共4页
 综述了应用单链构象多态性技术(SSCP)对微生物群落进行分析的基本过程,以及在模式微生物群落、人工与自然群落结构和动态分析中的应用。并针对SSCP技术存在的问题提出了一些改进建议,指出在进行复杂微生物群落分析时,应采用含有甘油...  综述了应用单链构象多态性技术(SSCP)对微生物群落进行分析的基本过程,以及在模式微生物群落、人工与自然群落结构和动态分析中的应用。并针对SSCP技术存在的问题提出了一些改进建议,指出在进行复杂微生物群落分析时,应采用含有甘油的高比率凝胶(丙烯酰胺∶双丙烯酰胺>49∶1)和低pH值(7.7)的TBE电泳缓冲液,并以λ核酸外切酶将PCR产物中的反意义链去掉以减少大量非特异带的出现,提高技术的分辨率。另外,该技术在SSCP条带的菌种唯一性和纯培养标记等方面还有待改进。 展开更多
关键词 单链构象多态性 微生物群落 群落结构 动态监测
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PCR-SSCP技术分析碱度影响下硫酸盐还原反应器中微生物群落动态 被引量:9
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作者 任南琪 赵阳国 +4 位作者 王爱杰 高崇洋 商淮湘 刘一威 万春黎 《中国科学(C辑)》 CSCD 北大核心 2006年第1期51-58,共8页
采用PCR-单链构象多态性(SSCP)技术和杂交技术,分析进水碱度降低引起的产酸-硫酸盐还原反应器中微生物群落动态.试验结果表明,碱度人为控制在4000mg/L,硫酸盐负荷率为4.8kg/(m3·d)时,反应器25天启动成功,硫酸盐去除率达87%,此时Lac... 采用PCR-单链构象多态性(SSCP)技术和杂交技术,分析进水碱度降低引起的产酸-硫酸盐还原反应器中微生物群落动态.试验结果表明,碱度人为控制在4000mg/L,硫酸盐负荷率为4.8kg/(m3·d)时,反应器25天启动成功,硫酸盐去除率达87%,此时Lactococcussp.,Anaerofilumsp.和Kluyverasp.等占优势.当短时间降低进水碱度至1000mg/L以下时,硫酸盐去除率迅速降到35%;继而提高并稳定进水碱度为3000mg/L时,硫酸盐去除率稳定在55%,Dysgonomonassp.,Sporobactesp.,Obesumbacteriumsp.和Clostridiumsp.得以富集,同Lactococcussp.,Anaerofilumsp.和Kluyverasp.一起构成优势菌群.碱度继续降低并稳定至1500mg/L时,硫酸盐的去除率上升并稳定在70%,Dysgonomonassp.,Sporobactersp.和Obesumbacteriumsp.消亡,而Desulfovibriosp.和Clostridiumsp.的某些菌种得以大量富集.为探讨系统所能承受的最低碱度阈值,再次将碱度降低至400mg/L,发现硫酸盐去除率、pH值和出水碱度迅速下降,Petrotogasp.,Prevotellasp.,Kluyverasp.和Neisseriasp.的数量水平明显降低,杂交显示硫酸盐还原菌(SRB)的数量也随之降低.微生物群落结构特征和多样性分析表明,种泥中的SRB种群异常丰富,碱度降低使种群的丰度逐渐趋于单一.常驻种群绝大多数为发酵产酸菌(FAB),其中Firmicute门所占的比例最大,而SRB所占数量比例极少.这种群落结构体现了FAB与SRB之间的协同代谢作用,从而维持着系统硫酸盐较高去除率和运行稳定性. 展开更多
关键词 碱度 群落动态 单链构象多态性(SSCP) SOUTHERN杂交 发酵产酸菌(FAB) 硫酸盐还原菌(SRB)
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