CD44^(+)膀胱癌干细胞中角蛋白6B的表达和调控

背景:膀胱癌干细胞参与促进膀胱癌的术后复发及耐药性,而多项研究表明角蛋白6B参与多个不同类型肿瘤的发生和进展,并与肿瘤的预后密切相关。目的:观察角蛋白6B在CD44^(+)膀胱癌干细胞中的表达差异及其对膀胱癌干细胞增殖、迁移及自我更新的影响,并进一步探讨角蛋白6B表达对膀胱癌患者预后的影响。方法:①使用免疫磁珠分选法分选出人CD44^(+)5637膀胱癌干细胞,使用RT-PCR检测分选后的相关干性基因SOX2,OCT4和NANOG的表达,采用体外肿瘤球形成实验进一步验证CD44^(+)细胞具有肿瘤干细胞的自我更新能力,RT-PCR检测CD44^(+)膀胱癌干细胞中的角蛋白6B的表达情况;②将CD44^(+)5637膀胱癌干细胞分为2组,其中角蛋白6B沉默组将角蛋白6B小干扰RNA转染至分选后的CD44^(+)膀胱癌干细胞,未转染的CD44^(+)膀胱癌干细胞作为空白对照组,转染2 d后收集细胞,分别用平板克隆实验、划痕实验和体外肿瘤球形成实验检测角蛋白6B沉默后膀胱癌干细胞的增殖,迁移和自我更新能力;③采用免疫组织化学染色检测膀胱癌患者24例膀胱肿瘤组织切片的角蛋白6B和CD44v6的表达;④利用ONCOMINE数据库比较膀胱肿瘤组织中角蛋白6B的表达情况对患者总生存率的影响。结果与结论:①分选后的CD44^(+)细胞中相关干性基因(SOX2,OCT4,NANOG)和角蛋白6B表达高于CD44-细胞(P<0.05),其细胞增殖,迁移和体外成球能力显著升高(P<0.05),角蛋白6B小干扰RNA可下调角蛋白6B在CD44^(+)膀胱癌干细胞中的表达(P<0.05);②与空白对照组相比,角蛋白6B小干扰RNA转染后的CD44^(+)膀胱癌干细胞增殖和迁移能力显著降低(P<0.05),肿瘤球的数量明显降低(P<0.05),而Notch1和Hes1 mRNA表达升高(P<0.05);③角蛋白6B与CD44v6在患者膀胱癌组织中的表达差异有显著性意义(P=0.006),其中角蛋白6B高表达的膀胱癌患者总生存率低于角蛋白6B低表达的患者;④上述数据证实,角蛋白6B可在CD44^(+)膀胱癌干细胞中可高度表达,并且促进膀胱癌干细胞的增殖、迁移和自我更新,角蛋白6B高表达有助于膀胱癌患者生存情况的改善。