1型糖尿病酮症酸中毒并发非甲状腺疾病病态综合征者3型脱碘酶mRNA水平研究

目的:探讨1型糖尿病(T1DM)合并酮症酸中毒(DKA)及正常甲状腺病态综合征(ESS)患者3型脱碘酶(D3)mRNA水平的变化及其发生机制。方法:T1DM并DKA及ESS患者28例,于确诊24 h内及DKA纠正后7 d及14 d采血,选取同期住院的不伴感染、甲状腺疾病、缺氧、手术或禁食的同年龄同性别患者30例为对照组。采用放射免疫分析法检测血清T3、T4、FT3、FT4及TSH,采用Real-time PCR法测定血液D3 mRNA的表达水平。结果:DKA患者T3、FT3及FT4水平明显低于对照组,随着DKA的纠正,其水平逐渐回升,直至DKA后14d,FT3及FT4恢复至对照组水平,而T3仍未恢复至对照组水平。与之相对应,DKA者D3 mRNA水平明显高于对照组,随着DKA的纠正,D3 mRNA水平逐渐下降,14 d仍未降至对照组水平。结论:D3 mRNA水平的变化可能是T1DM合并DKA患者发生ESS的关键。

脓毒症患儿外周血CD4+T细胞Bip、ATF6及DDIT3表达水平变化

目的:探讨脓毒症(Sepsis)患儿外周血CD4^+T淋巴细胞免疫球蛋白结合蛋白(Bip)、激活转录因子6(ATF6)及内质网应激(ERS)特异性促凋亡因子DNA损伤诱导转录蛋白3(DDIT3)mRNA水平的变化。方法:收集确诊脓毒症儿童60例,根据出院结局分为存活组和死亡组各30例,另外选取同期健康儿童30例作为对照组。对60例危重病例进行评分(PCIS);采集三组外周静脉血标本,分离外周血CD4^+T淋巴细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法测定外周血CD4^+T淋巴细胞Bip、ATF6及DDIT3 mRNA的相对表达水平。PCR产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性。结果:脓毒症存活组C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白介素-6(IL-6)、血乳酸、D-二聚体及脑尿钠肽(BNP)均低于死亡组,PCIS评分高于死亡组,差异有统计学意义(t=7.77、11.40、21.88、5.11、9.53、4.27、2.80,均P<0.01)。三组Bip、ATF6及DDIT3 mRNA相对表达水平比较差异有统计学意义(F=586.49、313.55、764.23,均P<0.01),存活组Bip、ATF6及DDIT3水平高于对照组[(3.01±0.67)与(1.00±0.32)、(2.17±0.37)与(1.00±0.28)、(4.44±0.64)与(1.00±0.20)],而低于死亡组[(3.01±0.67)与(6.63±0.84)、(2.17±0.37)与(3.26±0.39)、(4.44±0.64)与(10.02±1.41)]。存活组确诊时与治疗后Bip、ATF6及DDIT3 mRNA相对表达水平比较差异有统计学意义(t=16.31、19.20、39.10,均P<0.01),存活组治疗后Bip、ATF6及DDIT3 mRNA相对表达水平低于确诊时水平。结论:脓毒症患儿外周血CD4^+T淋巴细胞Bip、ATF6及DDIT3表达水平增高,且随病情好转而降低,可通过ERS导致外周血CD4^+T细胞凋亡,从而在脓毒症多器官功能障碍综合征(MODS)的发生发展中起重要作用。

缺氧诱导因子1α在糖尿病并发症中的作用机制研究进展

缺氧诱导因子1α(HIF-1α)是一种转录调节因子,通过其下游基因的调控,在糖尿病并发症的发生发展中起重要作用。高血糖使心血管系统HIF-1α活性过高,促进心血管并发症及增殖性糖尿病性视网膜病变的发生与发展,加重糖尿病机体缺血/再灌注损伤的打击。HIF-1α及血管内皮生长因子与糖尿病神经病变程度相关。高血糖通过对肾脏及皮肤HIF-1α的水平和活性的改变,损害肾脏对缺氧状态的适应性反应,延缓皮肤创伤愈合的过程。HIF-1α在糖尿病并发症的防治中有潜在的临床意义。

百草枯暴露致帕金森病神经细胞程序性死亡机制研究进展

神经细胞尤其是多巴胺能神经元的程序性死亡是帕金森病(PD)的主要病理改变,涉及细胞凋亡、自噬样细胞死亡、细胞坏死等多种类型。百草枯能选择性地破坏黑质纹状体系统,诱发神经细胞的程序性死亡,导致PD。百草枯致PD的机制包括细胞凋亡和神经元自噬的过度激活以及星形胶质细胞的自噬障碍,可导致病理性蛋白聚集和清除障碍以及细胞坏死死亡通路的异常。百草枯暴露导致PD神经细胞程序性死亡的机制复杂,目前具体机制尚不清楚。

雌性肥胖大鼠皮下脂肪与内脏脂肪Vaspin mRNA的变化

目的:观测高脂饮食诱导雌性肥胖大鼠血糖、胰岛素、血脂及肾周脂肪组织(PAT)与皮下脂肪组织(SAT)内脏脂肪组织特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(Vaspin)mRNA的变化,探讨Vaspin在雌性肥胖大鼠糖脂代谢中的作用。方法:断乳雌性大鼠随机分成普通饮食组(A组)与高脂饮食组(B组),分别给予普通饲料与高脂饲料。实验开始时及喂养4周后测量体重(W)、体长(H)及腹围(AC)。取血并取SAT与PAT。氧化酶法测定空腹血糖(FPG),放射免疫法测定空腹胰岛素(FINS),酶法测定血总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)与高密度脂蛋白(HDL),实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)测定Vaspin mRNA水平。结果:两组大鼠W、H及AC差异均有统计学意义;B组大鼠FPG、FINS、TC、TG、LDL及PAT Vaspin mRNA水平均高于A组,HDL水平低于A组,SAT Vaspin mRNA水平差异无统计学意义。结论:高脂饮食诱导的雌性肥胖大鼠模型建立成功,出现糖脂代谢紊乱;PAT与SAT均可检测到Vaspin mRNA表达;雌性肥胖大鼠PAT Vaspin mRNA高于雌性非肥胖大鼠。

NTHi肺炎小鼠肺2型与3型脱碘酶mRNA的变化

目的:探讨不可分型流感嗜血杆菌(NTHi)肺炎小鼠血三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺素(TSH)及肺2型脱碘酶(D2)与3型脱碘酶(D3)mRNA水平的变化,推测肺炎并正常甲状腺病态综合征(ESS)的发生机制,为其治疗提供理论依据。方法:C57BL/6小鼠随机分为对照组、感染3d组、感染7d组与感染10d组。对照组取血及肺组织,感染组于制备小鼠NTHi肺炎模型后3、7及10d取血及肺组织,放射免疫分析法检测血清T3、T4及TSH水平,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法测定肺D2及D3mRNA水平。数据以SPSS13.0统计软件进行统计分析。结果:四组T3、TSH、D2及D3mRNA相对表达水平的差异有统计学意义,T4的差异无统计学意义。感染后3dT3与TSH水平低于对照组,后逐渐回升,于感染后10d其水平与对照组差异无统计学意义;与之相对应,感染后3dD3水平高于对照组,感染后7dD2水平方始高于对照组,后逐渐回落,于感染后10d仍均高于对照组,差异有统计学意义。结论:NTHi肺炎可并发ESS,D2与D3mRNA水平的变化与其发生有关。

缺氧对小鼠中枢神经系统3型脱碘酶mRNA水平的影响

目的探讨小鼠中枢神经系统(CNS)3型脱碘酶(D3)mRNA表达水平的空间特异性及缺氧对其影响。方法成年小鼠16只,随机分为对照组和缺氧组。将缺氧组小鼠移入底部盛有新鲜钠石灰的磨口瓶中,密封6 h后与正常喂养的对照组小鼠一起断头处死,分别取大脑、小脑、海马、下丘脑、垂体、延髓和脊髓,提取总RNA,逆转录后进行实时荧光定量PCR扩增,产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性。结果对照组小鼠CNS不同部位D3mRNA表达水平不同(P<0.01),小脑D3 mRNA表达水平最高,大脑、脊髓、海马、下丘脑与延髓依次减少;缺氧组小鼠CNS不同部位D3 mRNA表达水平亦不同(P<0.01),大脑D3 mRNA表达水平最高,小脑、脊髓、海马、下丘脑与延髓依次减少。缺氧致小鼠CNS不同部位D3 mRNA表达水平的改变不同,大脑D3 mRNA表达水平升高(P<0.01),延髓D3 mRNA表达水平的改变差异无统计学意义(P=0.09),而小脑、海马、下丘脑与脊髓D3 mRNA表达水平降低(P<0.01)。结论 CNS D3 mRNA表达水平具有空间特异性,缺氧所致CNS D3 mRNA表达水平改变也具有空间特异性,这为进一步阐明缺氧导致非甲状腺疾病病态综合征的机制提供实验依据。

脓毒症儿童CD4^+T淋巴细胞肌醇需求酶1信号通路的变化

目的探讨脓毒症儿童CD4^+T淋巴细胞免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)、肌醇需求酶1(IRE1)及X-盒结合蛋白1(XBP1) mRNA水平的变化。方法收集确诊的脓毒症儿童,分为存活组和死亡组,每组随机选取30例。记录临床及检查资料,进行小儿危重病例评分(PCIS)。另选同期体检的健康儿童30例为对照组。测定CD4^+T细胞Bip、IRE1及XBP1 mRNA的相对表达水平。数据采用SPSS 13.0统计软件进行分析。结果脓毒症存活组C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)、血乳酸、D-二聚体及脑尿钠肽(BNP)均低于死亡组,PCIS评分高于死亡组,差异有统计学意义(t=7.81、11.27、21.69、5.41、9.85、4.65、2.71,P<0.01)。对照组、存活组与死亡组Bip、IRE1及XBP1表达水平差异有统计学意义(F=503.83、842.92、1 081.92,P<0.01),存活组3者表达水平高于对照组[(2.22±0.32)vs(1.00±0.27)、(3.21±0.44)vs(1.00±0.32)、(4.45±0.61)vs(1.00±0.12),均P<0.01],而低于死亡组[(2.22±0.32)vs(3.26±0.36)、(3.21±0.44)vs(6.86±0.80)、(4.45±0.61)vs(10.22±1.19),均P<0.01]。结论脓毒症儿童CD4^+T细胞Bip、IRE1及XBP1水平增高,通过内质网应激致外周血CD4^+T细胞凋亡,在脓毒症多器官功能障碍综合征中起重要作用。

儿童Graves病与CTLA-4基因多态性研究

Graves病（简称GD）是一种常见的器官特异性自身免疫性甲状腺疾病。近年来儿童GD与成人GD一样有发病率逐渐增高的趋势,已成为一种危害儿童健康的常见病。其确切病因不明,但已肯定GD是一种多基因遗传的自身免疫性疾病。最新研究认为候选基因中HLA和CTLA-42个基因位点占GD遗传易感性的50％，而CTLA-4基因作为T细胞活化的一种重要的负性调节因子，已成为导致自身免疫性内分泌疾病的一个非常重要的易感位点㈣，也成为国内外学者研究的热点，儿童起病的GD与成人起病的GD在发病机制上截然不同，本研究旨在探讨CTLA-4基因第2外显子多态性与天津市儿童GD的相关性。

1例HMGCS2基因突变致线粒体3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A合成酶2缺乏症

目的 对1例HMGCS2基因变异导致的罕见遗传病,线粒体3-羟基-3甲基戊二酰辅酶A合成酶2缺乏症(HMGCS2D)的突变基因进行检测分析。结果 8个月余男性患儿,发热、频繁呕吐起病,随后出现呼吸深促,精神烦躁,表现为严重代谢性酸中毒、难以纠正的低血糖、肝脏增大、肝功能异常、炎症指标升高等,经积极治疗后,仍快速进展至代谢病危象,多脏器功能衰竭死亡。基因检测发现HMGCS2基因1p12区域存在7号外显子c.1201G>T(Glu401*)、9号外显子c.1499G>A(p.Arg500His)两个杂合突变位点,确诊为HMGCS2D,此杂合突变国内目前未见报道。

单纯男性化型21羟化酶缺乏症患儿41例青春发育与最终身高随访

目的探讨先天性肾上腺皮质增生症(CAH)的21羟化酶缺乏症(21-OHD)单纯男性化型(SV)患儿青春发育情况及身高变化。方法对天津市儿童医院1970年1月-2008年1月诊治的SV患儿,确诊后主要予醋酸可的松或氢化可的松口服治疗,之后依据血生化指标综合判断,调整剂量,以达到基本正常的生长速率及相对缓慢骨龄(BA)进展的维持量。出现中枢性性早熟(CPP)后联合促性腺激素释放激素类似物(Gn-RHa)治疗。随访至2008年12月31日前骨骺闭合的患儿41例(男18例,女23例)。通过对比41例患儿骨骺闭合时年龄、身高、进入G2/B2期的生物年龄(CA)、骨龄(BA)、进入G2/B2期至骨骺闭合时间及身高增长,观察其青春发育情况及身高变化,并比较服药依从性对骨骺闭合年龄和骨骺闭合时身高的影响。结果男性患儿睾丸容积≥4mL者78.26%发生于9岁前,38.89%女性乳房发育年龄低于8岁,66.67%初潮年龄低于10岁。不同性别进入G2/B2期至骨骺闭合时间及身高增长有统计学差异(Pa<0.01,0.05),服药依从性好者与服药依从性差者骨骺闭合年龄及骨骺闭合时身高比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论CAH的21-OHDSV患儿青春发育提前,青春期身高增长减少。规范治疗能改善身高。

应用胰岛素泵治疗1型糖尿病患儿不同依从性的原因与对策

目的探讨应用胰岛素泵治疗1型糖尿病(T1DM)患儿不同依从性的原因与对策。方法对2000年1月-2008年12月在天津市儿童医院收治的T1DM患者278人次,采用自行设计的T1DM胰岛素泵治疗调查问卷,分析影响糖尿病患者胰岛素治疗依从性的原因,并探讨相应的对策。结果T1DM患者278人次中,85.25%(237人次)同意胰岛素泵治疗,14.75%(41人次)拒绝胰岛素泵治疗。<3岁患者中58.33%(21人次)同意胰岛素泵治疗,>3岁患者中89.26%(216人次)同意胰岛素泵治疗,差异有统计学意义(χ2=23.83,P<0.01);第1次接触胰岛素泵者208人次中82.69%(172人次)同意胰岛素泵治疗,曾使用胰岛素泵或是否接触过使用胰岛素泵的患者中92.86%(65人次)同意胰岛素泵治疗,差异有统计学意义(χ2=4.30,P<0.05)。同意胰岛素泵治疗者与拒绝胰岛素泵治疗者对T1DM的认识得分(t=2.11,P<0.05)和对胰岛素泵的认识得分(t=10.53,P<0.01)的差异均有统计学意义。在治疗过程中由同意改为拒绝胰岛素泵治疗的主要原因为患者有异物感、使用过程中出现故障、发生低血糖;由拒绝改为同意的主要原因:未用胰岛素泵的情况下血糖控制不理想,同时住院的应用胰岛素泵的患者与之交流,期望血糖得到更好的控制。结论健康教育、心理行为干预、使用指导、疗效对比、正规熟练的操作可提高治疗的依从性。

百草枯中毒患儿CD4＋T细胞内质网应激ATF6通路的变化

急性百草枯（paraquat，PQ）中毒病死率极高，目前研究认为其发病机制包括氧化应激和免疫激活，导致细胞坏死／凋亡，而外周血CD4^＋T淋巴细胞在T细胞活化信号的传导和免疫激活中起重要作用。

急性百草枯中毒患儿外周血CD4^＋T淋巴细胞肌醇依赖酶1、凋亡信号调节激酶1及c-Jun氨基末端激酶水平变化的意义

目的探讨急性百草枯（PQ）中毒患儿外周血CD4^＋T淋巴细胞肌醇依赖酶1（IRE1）、凋亡信号调节激酶1（ASK1）及c-Jun氨基末端激酶（JNK）mRNA水平的变化。方法选择2014年6月至2016年6月于天津市儿童医院就诊的急性PQ中毒患儿30例，其中男18例，女12例；年龄2～14岁。记录患儿的一般临床资料及实验室检查资料，误服后2～20 h采集外周静脉血标本。选取同期来天津市儿童医院体检的健康儿童30例为健康对照组，男18例，女12例；年龄2～14岁。分离外周血CD4^＋T淋巴细胞，实时荧光定量聚合酶链反应（Real-time PCR）测定外周血CD4＋T淋巴细胞IRE1、ASK1及JNK mRNA的相对表达水平。PCR产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性。数据采用SPSS 13.0软件进行分析。结果30例患儿均有口腔黏膜溃烂、恶心、呕吐、腹痛，少尿、无尿19例，消化道出血16例，头痛、头晕12例，胸闷、憋气、呼吸困难11例，抽搐8例，黄疸5例。PQ中毒组IRE1、ASK1及JNK mRNA相对表达水平均明显高于健康对照组（1.70±0.16比1.02±0.18、3.56±0.85比1.05±0.31、5.22±0.87比1.01±0.33，t=15.26、15.21、24.78，均P〈0.01）。结论PQ中毒患儿外周血CD4^＋T淋巴细胞IRE1、ASK1及JNK mRNA相对表达水平升高，可能与PQ所致氧化应激和免疫激活有关，通过内质网应激形成复杂的细胞因子网络，导致CD4^＋T淋巴细胞凋亡，影响多脏器衰竭的发生、发展。

1型糖尿病酮症酸中毒患儿缺氧诱导因子-1α与血管内皮细胞生长因子mRNA表达水平的变化

目的探讨1型糖尿病(T1DM)酮症酸中毒(DKA)患儿缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)与血管内皮细胞生长因子(VEGF)mRNA水平的变化。方法天津市儿童医院住院T1DM并DKA患儿30例,于确诊24 h内(DKA 1组)及DKA纠正后10 d(DKA 2组)采血,另选取同期住院的不伴感染、缺氧、肿瘤或结缔组织病的同年龄同性别患儿30例为对照组。实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法测定其外周血CD4+T淋巴细胞HIF-1α与VEGF mRNA的相对表达水平。PCR产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定特异性。采用SPSS 13.0软件进行统计学分析。结果 3组HIF-1α及VEGF mRNA相对表达水平比较差异均有统计学意义(Pa<0.01)。DKA1组HIF-1α及VEGF水平明显高于对照组,差异有统计学意义(Pa<0.01);DKA纠正后HIF-1α及VEGF水平恢复,差异有统计学意义(P<0.05,0.01),但直至DKA纠正后10 d(DKA2组)仍未恢复至对照组水平,差异有统计学意义(P<0.01,0.05)。Real-timePCR产物行琼脂糖凝胶电泳,产物位于预期位置,确定产物特异性。结论 T1DM并DKA患儿CD4+T淋巴细胞HIF-1α与VEGFmRNA水平升高,且DKA纠正后HIF-1α与VEGF mRNA水平不能恢复至正常,这可能与T1DM并发症的发生发展有关。

缺氧缺血性脑损伤新生大鼠中枢神经系统2型脱碘酶mRNA的变化

目的探讨新生大鼠中枢神经系统(CNS)2型脱碘酶(D2)mRNA水平的空间特异性及缺氧缺血性脑损伤(HIBD)对其影响。方法 7日龄新生W istar大鼠16只,随机分为假手术组与HIBD组,每组8只。采用Real-time PCR方法测定2组大鼠大脑、小脑、海马、下丘脑、垂体、延髓和脊髓D2 mRNA表达。反应产物行琼脂糖凝胶电泳鉴定其特异性。采用SPSS 13.0软件进行统计分析。结果假手术组新生大鼠CNS不同部位D2 mRNA表达水平不同(F=30.88,P<0.01),大脑D2 mRNA表达水平最高,依次为海马、下丘脑、小脑、垂体、延髓和脊髓。HIBD新生大鼠CNS不同部位D2 mRNA表达水平的改变不同(F=42.81,P<0.01),大脑、小脑与垂体D2 mRNA表达水平的改变无统计学意义(t=0.58、0.93、2.05,Pa>0.05)。二组比较海马、下丘脑、延髓和脊髓D2mRNA表达水平的改变有统计学意义(t=6.31、6.84、10.19、7.13,Pa<0.01)。HIBD组海马、下丘脑D2 mRNA表达水平降低,延髓和脊髓的D2 mRNA表达水平升高。结论新生大鼠CNS D2 mRNA表达水平具有空间特异性。缺氧可致海马、下丘脑、延髓和脊髓的D2 mRNA表达水平改变,进而调节局部T3水平。

宫内窘迫与产时窒息对新生儿甲状腺功能的不同影响

目的 探讨宫内窘迫和产时窒息对甲状腺功能的影响.方法 将近5年我院儿科诊治的宫内窘迫及产时窒息新生儿分为宫内窘迫组（B组,87例）、产时窒息组（C组,36例）和宫内窘迫＋产时窒息组（D组,75例）,选择同期出生的正常新生儿为对照组（A组,30例）.均采用放射免疫分析法检测血清三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）和促甲状腺素（TSH）水平.结果 A、B、C、D4组血清T3、T4及TSH的水平分别为（0.86±0.22）μg/L、（0.62±0.21）μg/L、（0.46±0.19）μg/L、（0.54±0.19）μg/L;（125.13±36.37）μg/L、（107.46±32.21）μg/L、（74.60±26.52）μg/L、（102.23±30.29）μg/L;（6.28±1.96）mIU/L、（4.91±1.69）mIU/L、（8.66±2.02）mIU/L、（5.64±1.17）mIU/L.B、C、D组血清T3、T4水平明显低于A组,差异均有显著性（P〈0.01,P〈0.05）.D组TSH水平较A组无明显变化,B组较A组降低,C组较A组升高,差异有非常显著性（P〈0.01）.结论 宫内窘迫与生后窒息均可使新生儿血清T3、T4水平降低,宫内窘迫者出生后TSH多降低,产时窒息者TSH多升高.

内毒素血症小鼠肝脏1型脱碘酶与3型脱碘酶表达水平及活性变化

目的 探讨内毒素血症对三碘甲状腺原氨酸（T3）、甲状腺素（T4）及1型脱碘酶（D1）与3型脱碘酶（D3）mRNA水平及活性的影响。方法 将16只SPF级成年昆明种小鼠随机分为对照组和脂多糖（LPS）组，每组8只。LPS组小鼠复制内毒素血症模型。2组动物取股动脉血，放射免疫分析法检测其血清T3、T4；取肝脏组织，实时荧光定量聚合酶链反应法测其肝脏 D1及 D3 mRNA 表达水平，离子交换层析法结合放射性底物分析法测其肝脏D1及D3活性。数据采用SPSS13.0统计软件进行分析。结果 2组小鼠血清 T3水平、D1与D3 mRNA相对表达水平及活性比较差异均有统计学意义（P均 〈0.01），T4水平的差异无统计学意义（P 〉0.05）。结论 内毒素血症可并发正常甲状腺病态综合征，D1与 D3 mRNA表达水平与活性的变化是其可能的影响因素。