原细小病毒属病毒感染及其抗肿瘤机制研究进展

原细小病毒(Protoparvovirus,PtPV)是一类感染多种动物或人类并引起广泛的病理反应的病毒。在PtPV感染过程中,其衣壳蛋白和非结构蛋白发挥了重要作用。衣壳蛋白通过与宿主细胞膜上的受体相互作用,促使PtPV进入宿主细胞。非结构蛋白则在宿主细胞内复制时发挥作用。PtPV的非结构蛋白NS1是一种关键蛋白,它不仅在病毒复制中发挥作用,还具有嗜瘤性和溶瘤性。研究表明,NS1蛋白可以抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡,这使得异位表达NS1蛋白成为潜在的抗肿瘤策略。PtPV的衣壳蛋白也具有广泛的应用前景,衣壳蛋白可作为载体,在基因疗法和药物递送应用中发挥重要作用:衣壳蛋白组装为病毒颗粒,装载外源基因或药物,并通过PtPV的感染途径将其输送到宿主细胞中。这种基于病毒的基因或药物递送系统已被广泛研究,并在临床治疗中应用。虽然已了解PtPV感染的关键因素和效应,但其分子机制尚不完全清楚。研究表明,PtPV可能涉及多个信号通路的调节和活化,包括炎症反应、DNA损伤应答和细胞凋亡等。尽管PtPV可能引起多种疾病,但随着研究的深入,目前已有相关药物和疫苗可用于预防或治疗PtPV感染,而其衣壳蛋白和非结构蛋白在生物技术和医学领域具有重要的应用前景。关于PtPV的进一步研究和深入理解会促使其应用于新的领域,并更好地应对与其感染及相关疾病相关的挑战。

牛传染性鼻气管炎病毒微滴数字PCR检测方法的建立与初步应用

为建立牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)微滴式数字PCR(ddPCR)方法,本研究在实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法基础上,设计IBRV的特异性引物和探针,同时对其特异性、敏感性、重复性进行评估,最后进行临床样品的检测。结果显示,特异性检测只检测出IBRV,没有检测出其他对照的牛病病原;最低检测下限为4 copies/μL;变异系数为0.70%,重复性好。采用ddPCR方法对本单位收集保存的37份牛血清、肝、肺、脾、肠道、气管、粪拭子等样品进行检测,检测结果与临床检验结果相符。上述结果表明,本研究建立的微滴式数字PCR方法为牛传染性鼻气管炎的早期检测,以及牛血清、牛肉食品安全的定性与定量检测提供了技术支持。

水貂阿留申病毒核酸标准物质的研制

为研制均匀、稳定的水貂阿留申病毒(AMDV)核酸标准物质,选择水貂阿留申病毒AMDV-G株接种CRFK细胞进行病毒繁殖,经灭活后,制备水貂阿留申病毒核酸检测标准物质。利用微滴式数字PCR方法对制备的核酸标准物质进行均匀性检验、稳定性评估及联合8家实验室进行合作定值。均匀性检验结果:F=1.56<Fa(F(0.05,14,30)=2.04),表明本标准物质组内和组间无统计学差异。稳定性评估结果表明:本标准物质在-20℃环境中可稳定保存6个月、在4℃环境中可稳定保存9 d、在-20℃环境下可稳定冻融4次。经8家有实验室检测资质认证的实验室合作定值及不确定度评定,最后得到本标准物质的定值为1.05×10^(4)copies/μL,扩展不确定度为0.14×10^(4)copies/μL。本标准物质定值准确、均匀性好、量值稳定,可用于水貂阿留申病毒核酸检测等相关实验,有利于水貂阿留申病的诊断和防控。

貂肠炎病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用

建立一种貂肠炎病毒(MEV)微滴数字PCR(ddPCR)方法,对貂肠炎病毒的定量诊断提供技术支持。在实时荧光定量PCR(qPCR)检测方法的基础上,建立了貂肠炎病毒微滴数字PCR方法,优化了该检测方法的反应条件,并评估了其敏感性、特异性、重复性。结果显示,建立的ddPCR方法最佳引物和探针终浓度分别为900和250 nmol/L,最佳退火温度为55℃,最佳升降温速度为2.5℃/s,本方法的最低检测下限为1.07×10^(0)copies/μL,未发现与常见疫病病毒存在交叉反应,重复性试验的变异系数小于5%。采用该微滴数字PCR和实时荧光PCR对40份水貂肠道、粪便样品进行检测,检测结果与临床检验结果相符。结果表明,本研究中建立的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,适用于临床样品的貂肠炎病毒核酸检测,为貂肠炎病毒感染的早期检测提供了技术支持。

水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用

为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus,CDV)的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法,以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持,本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理,建立了水貂CDV数字PCR方法,并优化了反应条件,评估了特异性、敏感性以及重复性。结果表明:ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增,其他常见病毒特异性检测结果均为阴性;重复性试验的变异系数均小于5%。采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测,检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高,重复性好,可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测,对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法。