广泛靶向代谢组学分析枸杞酒酿造过程中代谢物的变化

为探究枸杞酒酿造过程中代谢物的组成及变化规律,采用超高效液相-电喷雾-三重四极杆线性离子阱-串联质谱的广泛靶向代谢组学技术分析了酿酒过程中3个阶段(预处理、主发酵、陈酿)的代谢物变化。研究结果表明:枸杞酒的酿造过程中共鉴定出1092种代谢物,包括195种黄酮类、193种酚酸类、174种生物碱、121种脂质、85种有机酸、80种氨基酸及其衍生物、48种核苷酸及其衍生物、45种木脂素和香豆素、35种萜类、10种甾体以及106种其他类物质;通过火山图筛选发现,预处理、主发酵和陈酿阶段分别鉴定出260、619种和130种差异代谢物,这些差异代谢物主要以脂质、酚酸类、黄酮类和生物碱为主;经过京都基因和基因组百科全书通路分析发现,赖氨酸降解途径,缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸的生物合成途径,植物激素信号转导途径,类黄酮化合物的生物合成途径是枸杞酒酿造过程中的显著富集通路。本研究可为了解枸杞酒在酿造过程中代谢物的变化提供数据支撑,为优化酿酒工艺和开发功能性枸杞产品提供理论依据。

ANXA2真核表达载体的构建

以膜联蛋白A2(AnnexinA2,ANXA2)真核表达载体的构建过程为基础,介绍一种易于成功构建真核表达载体的方法。以Hela细胞来源的cDNA为模板,半套式PCR为基础,通过两次PCR的方法,可获得5’端添加Kozak序列并融合表达HA标签基因和ANXA2的基因片段Kozak-HA-ANXA2,回收后克隆到pMD-18T克隆载体,获得合适的酶切位点,再采用双粘端连接法将其克隆入慢病毒真核表达载体pTRIP中。结果显示,经双酶切和测序之后确定真核重组载体pTRIP-HA-humANXA2构建成功。通过半套式PCR方法构建真核表达载体成功率高,为下一步细胞表达试验创造条件。