白腐真菌木质素降解酶的产生及其调控机制研究进展

以黄孢原毛平革菌为主,介绍了近年来白腐真菌木质素降解酶系的生理生化特性、基因组成及其调控的研究进展,并且对木质素降解酶系的外源性调控及其酶活的失活机制进行了综述。然而,尽管对白腐真菌木质素降解酶的研究已有很大的进展,但木质素降解酶的分子调控机制仍尚未明了。

纳米氧化铝在多重耐药质粒RP4接合转移过程中对细菌形态学的影响

目的探讨纳米氧化铝(平均粒径为20nm)对液相条件下多重耐药质粒RP4接合转移的影响,并从形态学角度初步探讨其影响机制。方法接合供体菌为大肠杆菌HB101(RP4),受体菌为Salmonella aberdeen Kauffmann 50312(strR),供、受体菌液均为109cfu/ml(浓度比为1∶3),纳米Al2O3浓度分别为0.005、0.05、0.5、5、50mmol/L,25℃静止接合8h后计算转接合子数,然后采用透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜进行形态学研究。结果RP4的接合转移随着纳米Al2O3浓度的升高具有上升趋势。5mmol/L和50mmol/L纳米Al2O3组接合率分别为空白对照组的150倍和40倍,差异均有统计学意义。透射电镜观察结果表明,空白对照组只能观察到单个供、受体菌接合,5mmol/L和50mmol/L纳米Al2O3组能观察到多个细菌同时发生接合的情况;50mmol/LAl2O3组一些细菌观察不到完整的细胞膜结构,该损伤可能是引起50mmol/L纳米Al2O3组接合率低于5mmol/L纳米Al2O3组的原因。激光扫描共聚焦显微镜观察结果提示纳米Al2O3能损伤细菌的细胞膜,细胞膜的损伤程度与进入细菌的纳米Al2O3的浓度呈正相关。结论纳米Al2O3能够促进接合子的产生,其影响机制可能是因为纳米Al2O3能够改变细胞膜通透性,间接影响接合过程,或者直接促进接合基因的表达所致。

活性黑对黄孢原毛平革菌锰过氧化物酶的影响

观察了活性黑KN-B(Reactive Black KN-B,RB KN-B)对黄孢原毛平革菌(Phanerochaete chrysosporium)锰过氧化物酶(MnP)酶活力和菌丝超微结构的影响以及黄孢原毛平革菌对RB KN-B的降解。于P.chrysosporium培养液MnP酶活达最高前,分别加入质量浓度为50 mg/L,200 mg/L,350 mg/L和500 mg/L的RB KN-B。分光光度法检测培养液MnP酶活,电镜观察菌丝超微结构的影响,紫外可见光谱法检测培养液中RB KN-B的降解。结果显示,1)与对照组相比,50 mg/L RBKN-B组的MnP酶活力增强,200 mg/L3、50 mg/L和500 mg/L组的MnP酶活力均显著低于对照组;2)电镜观察显示,经RB KN-B作用后,菌丝细胞膜受损,细胞内含物减少,胞质浓缩,出现质壁分离现象,500mg/L组有大量细胞解体;3)紫外可见光谱扫描显示,RB KN-B经黄孢原毛平革菌降解,可见光波段最大吸收峰由598 nm移至525 nm和556 nm,峰值减小,紫外波段的吸收峰由315 nm移至352 nm。结果显示,黄孢原毛平革菌对RB KN-B的反应类似机体对不良环境因子的应激反应,经历了诱导、抑制及衰退的过程;RB KN-B对黄孢原毛平革菌菌丝细胞超微结构的损伤随RB KN-B浓度增高而增强,表明RBKN-B对MnP酶活的抑制与黄孢原毛平革菌结构受损密切相关;黄孢原毛平革菌对RB KN-B具有一定的降解能力,其中MnP作为关键酶起了重要的作用。

间歇性无氧运动对小鼠脑、心肌、骨骼肌抗氧化能力及脂质过氧化损伤的影响

目的 :观察间歇性无氧运动对小鼠脑、心肌、骨骼肌抗氧化能力和脂质过氧化损伤的影响。方法 :选用 96只昆明雄性小鼠 ,建立间歇无氧运动模型 ,观察运动后脑、心肌、骨骼肌SOD活性、T -AOC能力及MDA含量的变化及间歇性无氧运动对小鼠行为能力的影响。结果 :间歇运动后 ,小鼠骨骼肌SOD活性、T -AOC及MDA含量显著高于对照组 (P <0 0 5 )。心肌SOD和T -AOC变化与骨骼肌大致相同 ,显著高于对照组 (P <0 0 5 ) ,但MDA差异不显著 (P >0 0 5 )。脑组织T -AOC升高显著 (P <0 0 5 )。结果显示 :间歇运动使小鼠体重自然增长速度延缓。间歇性无氧运动对小鼠抗氧化能力及脂质过氧化水平的影响存在较明显的组织差异。

氯灭活水中脊髓灰质炎病毒机制的研究

目的探讨氯对脊髓灰质炎病毒核酸和衣壳蛋白的破坏在灭活病毒中的作用,并对病毒基因组受损区域进行定位,阐明氯灭活脊髓灰质炎病毒的机制。方法以不同剂量(0.1、0.5、1.0、1.5和2.0mg/L)的有效氯对脊髓灰质炎病毒作用不同时间(0、15、30、45和60min),采用大片断逐步步移PCR(long-overlapping PCR)分析氯对病毒全基因组的损伤,以ELISA技术分析氯对病毒衣壳蛋白的破坏,以细胞培养检测病毒感染性。结果脊髓灰质炎病毒各部分对氯的抵抗力强弱存在如下关系:病毒衣壳>基因组蛋白编码区>基因组5′端非编码区(noncoding region,NCR)>基因组3′端NCR>poly A尾;脊髓灰质炎病毒的polyA尾和3'端NCR破坏可造成病毒的感染性下降,但不能完全灭活病毒;5′端NCR的破坏与病毒感染性的消失一致,损伤区域主要位于富含二级结构的区域。结论氯主要通过破坏脊髓灰质炎病毒核酸而非衣壳蛋白灭活病毒;病毒基因组5′NCR内二级结构区域的破坏对脊髓灰质炎病毒具有致死效应。

二氧化氯灭活水中脊髓灰质炎病毒的机制

目的探讨二氧化氯对脊髓灰质炎病毒核酸和衣壳蛋白的损伤在病毒灭活中作用,阐明二氧化氯灭活脊髓灰质炎病毒机制。方法观察不同质量浓度(0.1、0.2、0.4、0.8、1.2mg/L)和不同作用时间(0、1、2、4、8和12min)二氧化氯对脊髓灰质炎病毒的作用,用大片段逐步步移RT-PCR(long-overlappingRT-PCR)分析二氧化氯对病毒全基因组的损伤,用ELISA分析病毒衣壳蛋白的损伤,通过细胞培养检测病毒感染性。结果脊髓灰质炎病毒衣壳蛋白对二氧化氯抵抗力强于核酸;基因组各部分对二氧化氯抵抗力强弱存在差异;二氧化氯对PV15’-NCR124-679nt区域的损伤与PV1的灭活一致。结论二氧化氯主要通过破坏脊髓灰质炎病毒核酸而不是衣壳蛋白来灭活病毒;病毒基因组5’-NCR内二级结构区域的破坏对脊髓灰质炎病毒具有致死效应。

极低频电磁场及与铅联合作用对发光细菌Vibrioqin ghaiensis发光的影响

观察了 5 0Hz,0 .1～ 9.6mT ,10～ 30min的电磁场暴露及其与铅的联合作用对淡水发光细菌青海弧菌 (Vib rioqinghaiensissp .nov)发光的影响 .结果表明 ,电磁场暴露能增强发光细菌的发光 ,在 6 .4mT附近 ,增强作用最为强烈 ,在 0 .2～ 0 .4mT附近 ,增强作用显得最为微弱 ,提示ELFEMFs对发光细菌的效应具有剂量“窗口”特性 ;Pb(0 .2～ 1.6mgL-1)能抑制发光细菌发光 ,并随着Pb剂量的增大 ,抑制效应愈明显 ,呈明显的线性负相关 ;电磁场与Pb合并作用 ,Pb并没有改变电磁场对发光细菌效应的包括剂量窗口在内的特性 ,但 3.2～ 9.6mT的电磁场暴露提高了发光细菌对Pb剂量变化的敏感性 .图 3表 3参

纳米氧化铝对多重耐药质粒RP4接合转移的影响

接合供体菌为大肠杆菌HB101（RP4）,受体菌为Salmonella aberdeen Kauffmann50312（str^R）,供、受体菌液均为10^9cfu/mL（浓度比为1：3）,25℃静止接合8h后计算接合子,采用透射电镜和激光扫描共聚焦显微镜进行形态学研究,结果表明,RP4的接合转移随着纳米Al2O3浓度的升高具有上升趋势,5mmol/L和50mmol/L纳米Al2O3组接合率分别为空白对照组的150倍和40倍,具有非常显著的差异,说明,纳米Al2O3能够促进接合子的产生,其影响机理可能是因为纳米Al2O3能够改变细胞膜通透性,间接影响接合过程,或者直接促进接合基因的表达所致。

呼吸道肺炎克雷伯菌耐药性与CTX-M型ESBLs的研究

目的探讨来源于呼吸道肺炎克雷伯菌(KP)耐药性与CTX-M型超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的关系。方法采用PCR扩增和测序分析检测KP质粒和染色体上的CTX-M型ESBLs基因;采用纸片扩散法检测抗菌药物敏感性;使用χ2检验分析相关数据。结果有CTX-M-1群酶和CTX-M-25群酶检出,CTX-M型ESBLs的总检出率为39.02%(48株),其中质粒和染色体上同时携带CTX-M-1群酶的检出率为26.02%(32株)。β-内酰胺类抗菌药物头孢唑林、氟喹诺酮类抗菌药物左旋氧氟沙星、磺胺类抗菌药物复方磺胺甲恶唑等在CTX-M型ESBLs阳性组的耐药率明显高于阴性组(P<0.05)。结论在来源于呼吸道的KP中,在质粒和染色体上同时携带CTX-M-1群酶基因最常见,CTX-M型ESBLs与KP对某些抗菌药物产生耐药性关系密切。

云南白药水提取物抑制铜绿假单胞菌AlgR2-AlgR1双组份调控系统磷酸化研究

目的:研究亚致死剂量的云南白药水提取物(Aquatic Extract of Yunnan Baiyao,AEYB)对铜绿假单胞菌(Pseudomonas Aeruginosa,PA)AlgR1-AlgR2双组份调控系统的磷酸化、海藻酸盐的生物合成及生物膜形成的影响。方法:通过放射性同位素标记方法研究AEYB对AlgR1-AlgR2磷酸化的影响;采用real-time PCR分析YBX海藻酸盐合成酶基因algD转录的影响;用咔唑法和结晶紫法分别对海藻酸盐和静态生物膜进行定量测定。结果:AEYB并不抑制AlgR2的自磷酸化,但能抑制AlgR2的磷酸基团向AlgR1转移,从而抑制AlgR1的磷酸化。AEYB可显著下调algD基因的转录,并抑制alginate的合成,最终减少PA静态生物膜的形成。结论:云南白药可通过抑制AlgR1-AlgR2系统的磷酸化的途径来减少PA的alginate的生物合成,对PA生物膜的形成具有抑制作用。

CRISPR/Cas9技术存在的问题及其改进措施的研究进展

CRISPR/Cas9技术是一种RNA引导的基因组编辑技术,能对基因进行精确性敲除、敲入、替换等,从而实现探究基因功能、修复致病基因等目的。该技术凭借操作简便、价格低廉、可对基因位点进行编辑、可拓展性强等优势,在近几年迅速发展完善,已成为继锌指核酸酶技术和类转录激活因子效应物核酸酶技术之后的第三大基因组编辑技术。在简单介绍CRISPR/Cas9技术的作用机制后,主要针对该技术现阶段面临的精确修复比例低、PAM限制识别序列、脱靶现象、马赛克现象的问题以及相应的改进措施进行阐述,旨在让研究者客观的认识CRISPR/Cas9技术存在的不足之处,为合理使用或改进该技术提供系统的文献综述。

胸腺五肽联合复方氨基酸双肽辅助治疗重症肺结核

目的探讨胸腺五肽和复方氨基酸双肽联合治疗对重症肺结核病人的治疗作用。方法将160例重症肺结核病人随机分为4组:A组:采用常规抗结核化疗;B组:加用胸腺五肽治疗;C组:加用复方氨基酸双肽治疗;D组:联合胸腺五肽和复方氨基酸双肽治疗。结果①外周血前炎性因子的改变:4组患者在治疗后血清肿瘤坏死因子α(tumornecrosis factor alpha,TNF-α)、白介素10(interleukin 10,IL-10)和白介素6(interleukin 6,IL-6)水平均明显下降(P<0.01)。与A组相比,B、C和D组下降更明显(P<0.05),4组中D组下降最明显(P<0.01);②痰菌阴转情况:治疗12个月后,4组痰菌阴转率分别为74.3%、89.2%、86.5%、94.9%,B组和D组明显高于A组(P<0.05或0.01)。在治疗1、3、6、12个月时,D组与A组痰菌转阴率均存在统计学差异(P<0.05或0.01);③肺部病灶吸收情况:在治疗6个月和12个月时,D组与A组比较病灶吸收率存在统计学差异(P<0.05或0.01);④临床症状改善情况:在疗程结束时,A、B、C、D四组总改善率分别为65.0%、82.5%、80.0%和92.5%,各组间存在统计学差异(P<0.05或0.01)。结论采用胸腺五肽和复方氨基酸双肽联合治疗重症肺结核患者,对降低其外周血前炎性因子水平、改善临床症状、促使痰菌阴转和结核病灶吸收等均有较好的治疗价值。

肺结核病患者外周血前炎性因子及细胞亚群凋亡的研究

目的探讨前炎性因子及CD4+T淋巴细胞凋亡在结核病免疫病理过程中的作用及临床意义。方法对45例肺结核患者采用免疫酶联吸附法检测血清中的TNF-α及IL-10水平,分离外周血单核细胞标记后用流式细胞仪测定CD4+T淋巴细胞凋亡率,并进行相关性分析。结果肺结核患者血清中的TNF-α及IL-10水平明显高于健康对照组(P<0.05),其外周CD4+T淋巴细胞凋亡率明显高于健康对照组(P<0.05);涂阳组外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与涂阴组和健康对照组差异有显著性(P<0.05);复治组外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率显著高于初治组和对照组;外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与TNF-α及IL-10水平呈正相关(P<0.05)。结论外周血CD4+T淋巴细胞凋亡率与TNF-α及IL-10水平呈正相关,均参与了对结核杆菌感染的免疫病理过程。

临床路径联合监测降钙素原在成人社区获得性肺炎中的运用研究

目的探讨临床路径(CP)联合监测降钙素原(PCT)在成人社区获得性肺炎(CAP)中的运用价值。方法采用随机数字表法把100例成人CAP患者分为观察组和对照组,各50例。对照组采用CP治疗,观察组采用CP联合监测PCT治疗。统计比较两组的疗效、主要症状体征消失时间、抗生素使用指标、主要住院费用、住院时间和满意度。结果观察组的疗效明显好于对照组(P<0.05)。观察组主要症状体征消失所需要的时间、使用抗生素比例、抗生素疗程和抗生素费用等均明显少于对照组(P<0.05)。观察组的药费和总住院费等明显低于对照组(P<0.05)。观察组的住院时间明显短于对照组(P<0.05)。观察组的患者、家属和医生满意度均明显高于对照组(P<0.05)。结论 CP联合监测PCT可提高成人CAP的疗效,同时可优化抗生素的使用,降低住院费用和提高满意度。

细菌小RNA抗营养应激调控功能的研究进展

细菌生存的环境复杂多变,经常处于营养元素过剩或缺乏的状态。因此,细菌必须及时准确地调节其基因表达以适应不断变化的营养环境,才能得以生存。小RNA(small RNA,s RNA)是近年来在细菌中发现的一类RNA调控子,在细菌应对营养应激的基因表达调控中发挥重要作用。就细菌s RNA的特点及其抗营养应激的作用进行综述。

南海驻岛礁官兵生理指标改变及其干预措施

目的研究南海驻岛礁官兵守礁后生理指标的改变及综合干预措施。方法选择2012—0912月成建制守礁官兵166名，年龄19-37岁，均为男性，经医院全面体检身体合格。其中南海大礁104名官兵为干预组，小礁62名官兵为未干预组。检测守礁前后官兵的锌（Zn）、钙（Ca）、铁（Fe）、红细胞体积（meancorpuscularvolume，MCV）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensitylipoproteincholesterol，HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（10wdensitylipoproteincholesterol，LDL-C）、促卵泡刺激素（follicle-stimulatinghormone，FSH）、促黄体生成素（1uteotropichormone，LH）、胃泌素（gastrin，GAS）、神经降压素（neurotensin，NT）、肾上腺髓质激素（adrenalmedullahormones）、心钠素（atrialnatriureticfactor，ANF）、睾酮（testosterone，T）等指标的变化。结果与守礁前比较，未干预组守礁后Fe、MCV、HDL-C、FSH、LH、GAS下降，Zn、Ca、LDL-C、T、ANF、NT、。肾上腺髓质激素上升（P〈0．05或0．01）。与守礁前比较，干预组守礁后Zn、Fe、Ca、MCV、HDL-C、LDL-C、FSH、LH、GAS无明显差异（P〉0．05），NT、肾上腺髓质激素、ANF、T升高（P〈0．05）。结论针对守礁官兵生理指标发生改变进行综合干预后Zn、Fe、Ca、MCV、HDI，-C、LDL-C、FSH、LH、GAS得到纠正；NT、肾上腺髓质激素、ANF、T得到改善，但没达到完全纠正的目的，需继续探讨。总体干预成功，可全面应用于南海守礁官兵。

降钙素原在儿童社区获得性肺炎使用抗生素中的应用价值

目的探讨降钙素原(PCT)在儿童社区获得性肺炎(CAP)使用抗生素中的应用价值。方法选取收入住院治疗的儿童CAP 84例,采用随机数字表法把患儿分为观察组和对照组各42例。观察组依据PCT的浓度使用抗生素;对照组依据《抗菌药物临床应用指导原则(2015年版)》,和经验使用抗生素。统计两组的抗生素使用情况,抗生素处方使用率、治疗后情况、住院时间、住院费用和疗效。采用卡方检验和t检验分析数据。结果观察组使用抗生素构成比、抗生素使用天数、两种抗生素联合构成比、抗生素不良反应构成比、抗生素费用、住院时间和住院费用均明显少于对照组(P<0.05);在治疗第1、3、5天时,观察组的抗生素处方使用率均明显低于对照组(P<0.05)。在观察组中,治疗第5天后的抗生素处方使用率出现明显下降,而在对照组中是治疗后第7天;两组疗效和临床症状消失时间的差异均没有统计学意义(P>0.05)。结论以PCT指导儿童CAP抗生素使用的策略既不影响疗效,又可以有效减少抗生素使用率、抗生素不良反应、抗生素费用、抗生素疗程、住院时间和住院总费用。

舰艇官兵长航致部分生理指标改变后的干预措施研究

目的探讨长时间远洋护航对舰艇官兵部分生理指标的影响及干预措施的效果。方法选择2013年7-12月赴索马里海域护航官兵287名,年龄19～44岁,均为男性,出航前经医院全面体检身体合格。其中A舰161名官兵为干预组,B舰126名官兵为非干预组。对2组官兵护航前及护航后血液中的钾、钠、氯、钙、铁、铜、磷、镁、谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）、肌酸激酶（CK）、磷酸肌酸激酶同工酶（CK-MB）、乳酸脱氢酶（LDH）、尿酸（UA）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、脂蛋白a（Lpa）及肌钙蛋白l（c Tnl）指标进行检测。结果护航后非干预组与护航前相比,钾、钙、铁、铜、磷、镁、TP、ALB下降差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;钠、氯、ALT、AST、CK、CK-MB、LDH、UA、Lpa、LDL-C上升差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）;c Tl差异无统计学意义（P〉0.05）。护航后干预组与护航前相比：钾、钠、氯、钙、铁、铜、磷、镁、UA、TP、ALB、LDL-C、Lpa、LDH、c Tl差异无统计学意义（P〉0.05）;ALT、AST、CK、CK-MB差异有统计学意义（P〈0.05或P〈0.01）。结论综合干预后钾、钠、氯、钙、铁、铜、磷、镁、UA、TP、ALB、LDL-C、Lpa得到纠正;ALT、AST、CK、CK-MB得到改善,但未达到完全纠正的预期目标,经对心肌损伤特异性标志物c Tl检测证实,心肌未受明显损伤,认为酶类升高是强训和疲劳后引起含这些酶类细胞破坏的集中反应。

医、患、家属联合实施King达标理论对老年肺结核合并糖尿病患者的影响

目的:探讨医、患、家属联合实施king达标理论干预对老年肺结核合并糖尿病患者康复的影响。方法:将2017年9月至2018年5月我院传染科收治的64例肺结核合并糖尿病老年患者随机分为观察组与对照组,每组32例。观察组应用King达标理论,进行干预,对照组接受常规护理,观察两组干预前后的生存质量领域评分、护理工作满意度。结果:干预后,观察组老年肺结核合并糖尿病患者的血糖控制良好率96.87%,优于对照组的78.13%,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的生存质量各领域得分均明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者的满意度100%、护理达标率96.87%,优于对照组的87.50%、78.13%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:医、患、家属联合应用King达标理论能显著提高医务人员、患者及家属三位一体共同参与管理的积极性,明显改善生存质量,提高患者满意度,促进疾病康复。

珠海地区耐亚胺培南临床菌株耐药机制与耐药相关移动元件分析

目的了解珠海地区耐碳青霉烯类抗生素临床菌株耐药的表型特征和遗传特征,探讨碳青霉烯类耐药临床菌株的耐药遗传机制,为控制细菌耐药提供依据。方法收集2016年间中山大学附属第五医院(珠海)送检标本中分离的临床耐亚胺培南菌株,采用VITEK-2Compact全自动微生物鉴定仪对细菌进行鉴定及药敏分析,Carba NP-d试验检测碳青霉烯酶表型,聚合酶链反应(PCR)检测碳青霉烯酶基因、Ⅰ类整合子、插入序列共同区(Insertion sequence common region,ISCR1),并以ERIC序列(Enterobacterial Repetitive Intergenic Consensus,肠杆菌基因间的重复共有序列)为基础的指纹图谱分析技术对耐药菌株行ERIC-PCR分型。结果共收集耐亚胺培南临床菌株72株,Carba NP-d试验检测有54株菌碳青霉烯酶表型阳性,PCR结果显示62株携带有碳青霉烯酶基因,其中48株携带D类碳青霉烯酶(包括bla OXA-23、bla OXA-51、bla OXA-48和bla OXA-58),4株携带bla VIM,3株携带bla KPC和9株携带bla NDM-1。Ⅰ类整合子检出率为55.6%,其可变区携带有基因盒aad A1、aac A4、dfr A12、aad A5、dfr A17和未知功能的orf F。ISCR1检出率为22.2%。ERIC-PCR显示,相同菌种的耐药菌并非来源于同一基因型。结论该地区耐亚胺培南临床菌株并非单克隆传播,其耐药基因具有稳定遗传和水平播散的能力,应密切关注。