SPA菌体协同ELISA及其在检测血清抗HCV·IgM中的初步应用

采用HCV_1合成抗原多肽,SPA 菌体及酶标记抗人IgM 等建立血清抗HCV.IgM 检测SPA菌体协同ELISA(SPA-ELISA)。以多重替代试验、阻断试验及其2-巯基乙醇破坏试验证实其方法的特异性.将其用于一组临床标本的检测,并对该法检测血清抗HCV-IgM 的优点进行了探讨。

药瘾患者丙型肝炎病毒感染及其危险因素的血清学调查

对４４１例药瘾患者血清乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染指标检测结果表明：ＨＢｓＡｇ检出率为８．６２％，ＨＢＶｍ检出率为８４．１３％，抗ＨＣＶ检出率为６０．５４％．不同性别患者间上述两种肝炎病毒感染率均无明显差别，但随着年龄增加，ＨＢＶ感染率逐渐上升，而抗ＨＣＶ检出率则逐渐下降．ＨＢＶ和ＨＣＶ感染率与药瘾途径有关，即口服者最低，静脉药瘾者次之，两者兼而有之者最高．对药瘾患者ＨＣＶ感染的危险因素分析表明，长期药瘾、静脉药瘾、共用注射器、使用未消毒药瘾用具及药品稀释液是主要的危险因素．

维持性血液透析及肾移植患者乙型及丙型肝炎病毒感染调查

目的 了解维持性血液透析及肾移植患者乙型及丙型肝炎病毒感染状况。方法 采用 EL ISA及 PCR法测定 HBVm、抗 - HCV、HCV RNA,型特异性 HCV亚基因探针杂交分型。结果 长期血透者 HCV阳性率为37.2 4 % ,肾移植术后再透析者达 4 7.5 7% ,且与透析时间、输血次数、受血量正相关 ;HCV基因型以混合型为主 ,占 6 3.6 4 %。结论 本组患者 HBV、HCV感染率与输血次数、输血量及透析时间密切相关。

输血后肝炎的临床研究

利用血清学ＥＬＩＳＡ法和ＰＣＲ技术对１６９名输血后肝炎（ＰＴＨ）患者的病原学进行了研究。结果表明，ＰＴＨ主要致病原为ＨＣＶ（９８．２２％），其中部分患者（１４．０２％）同时合并有ＨＢＶ感染，３例ＰＴＨ病因尚不明确，有待进一步研究。ＨＣＶ所致ＰＴＨ患者抗ＨＣＶ检出时间为ＰＴＨ症状出现后７ｄ～１年，平均为５４．６２ｄ。ＨＣＶＲＮＡ在感染早期（６～２０ｄ，平均８．７２ｄ），即可检出。对８４名ＰＴＨ患者１．５～３年内抗ＨＣＶ和ＨＣＶＲＮＡ动态观察的结果表明，抗ＨＣＶ可较长时间持续存在，而ＨＣＶ病毒血症可有３种表现形式：一过性病毒血症、持续性病毒症和间歇性病毒血症。本研究证实，认真开展献血者抗ＨＣＶ筛查对于减少或防止ＰＴＨ发生十分重要；另外，医务人员应严格掌握输血指征，严禁无指征输血。

逆转录──多聚酶链反应检测丙型肝炎病毒RNA方法的建立及实验条件分析

对逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测丙型肝炎病毒ＲＮＡ（ＨＣＶＲＮＡ）的方法学进行了探讨。逆转录与多聚酶链反应是否在同一反应管内进行，对ＨＣＶＲＮＡ检测结果没有明显影响，但在操作难易程度、ＴａｑＤＮＡ聚合酶的选择等方面有差别。在防止污染的前提下，套式ＰＣＲ可提高ＨＣＶＲＮＡ检出率（７．８３％），这对于极低水平ＨＣＶ感染的诊断十分重要。本文对受检标本的贮存方式也进行了初步探讨。

重症肝炎患者HBV与HCV双重感染的血请学调查及其意义探讨

采用Ortho抗-HCV C100-3试剂检测了61例重症乙型肝炎,66例轻型慢性乙肝和22例多次受血治疗的非肝脏疾病患者血清中抗HCV C100-3抗体。重症肝炎中,抗-HCV检出率(36.07％)不仅明显高于轻型慢性乙肝组(4.55％),也高于受血治疗组(13.64％);对比分析重症肝炎HBV/HCV双重感染组与单纯HBV感染组的总胆红素、AST/ALT比值及病死率的结果,两组有显著性差异(P<0.05),提示重症肝炎患者由于多次受血治疗及肝脏本身的严重病变,因而对HCV的易感性较高;HBV/HCV双重感染可能加剧了肝脏的损害,加速了肝炎重症化的进程。

不同人群HCV感染状况及传播途径的研究

应用第二代抗ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ试剂对我国中南地区部分人群 ＨＣＶ感染状况进行了血清学调查，同时对ＨＣＶ感染的传播途径进行了研究。结果表明：１．ＨＣＶ感染率在不同人群中检出不一，凡与血液接触频繁的人群感染率较高，如恶性肿瘤患者（９．９％），献血（浆）员（１２．２５％），血液病患者（２４．３％），血液透析者（３７．２％），药瘾者（６０．５％）。无明显血液接触史者则较低，如性错乱者（４．９％），医务人员（０．３３％）及健康孕妇（０．２４％）。２．经血传播是我国ＨＣＶ传播的主要途径。除频繁接触血液者ＨＣＶ感染率高以外，血液制品中丙球制剂抗 ＨＣＶ检出率为 １００％，ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率为 ３１． ９％，其余制剂中虽然抗 ＨＣＶ检出率极低，但 ＨＣＶ ＲＮＡ阳性率仍达 ７． ９４％。提示应用被污染的血液制品也存在传播 ＨＣＶ的潜在危险。 ３．性接触和日常生活密切接触有可能传播ＨＣＶ，但机率较低。 ４． ＨＣＶ的家庭内聚集性感染的危险性远低于ＨＢＶ。 ５．职业性暴露感染 ＨＣＶ的危险性亦较低。 上述研究结果为阐明我国 ＨＣＶ感染流行规律及制订ＨＣＶ感染防治措施提供了客观依据。

稳定表达乙型肝炎病毒G145R变异表面抗原细胞系的建立

构建可以在真核细胞表达G145R HBsAg的重组质粒PCI-HBs145。用此质粒转染Hela细胞,经克隆化培养 以及G418筛选,建立稳定表达G145R HBsAg的细胞系。ELISA检测表明表达G145R HBsAg与野生型HBsAg 在免疫反应性上有较大的差异。生物学性状研究结果表明稳定表达G145R HBsAg的2A8细胞纯度好,遗传性状 稳定。

献血员人群HCV感染状况及其输血传播的调查

采用ELISA对1572份献血员血清进行抗HCV检测,阳性率为12.15％。其中女性献血员抗HCV阳性率较男性为高、单采浆献血员者较单纯献血全血者为高,抗HCV检测阳性率随献血员年龄增长而增高。近期ALT升高的单采浆献血者血清抗HCV阳性者显著地高于无近期ALT升高史的同类单采浆献血员。结果证实严格开展献血员HCV感染者筛选将有助于输血相关性的丙肝的预防。

我国肝病患者HCV感染的血清流行病学研究

应用第二代抗ＨＣＶ试剂对我国不同地区肝病患者血清抗ＨＣＶ进行了检测，同时调查了ＨＢＶ和ＨＡＶ感染状况。２０１６例肝病患者血清中抗ＨＣＶ检出率为１２．２５％，ＨＢＶｍ检出率为７４．５５％，抗ＨＡＶ－ＩｇＭ检出率为２９．３１％。各型肝病患者抗ＨＣＶ检出情况分别是：急性肝炎６２／７５２（８．２４％）；慢性迁延性肝炎４８／５４１（８．８７％）；慢性活动性肝炎９３／５２３（１７．７８％）；慢性重症肝炎５／３２（１５．６３％）；肝硬化３４／１４３（２３．７８％）；肝癌５／２５（２０．００％）。对不同年龄组肝病患者抗ＨＣＶ检出率的比较表明，抗ＨＣＶ检出率随患者年龄增加而增高。受血史及其它经血液暴露史与ＨＣＶ感染密切相关，但仍有近半数肝病患者ＨＣＶ感染途径不明。各型肝病患者中仅４７／２０１６（２．１３％）为单纯ＨＣＶ感染，其它ＨＣＶ感染者则为重叠感染。不同地区肝病患者血清抗ＨＣＶ检出率间差异较大（２．１５％～３０．９５％），北方地区较高，对其影响因素进行了探讨。

标本处理方法对多聚酶链反应的影响

对多聚酶链反应（ＰＣＲ）扩增条件相同情况下，５种标本处理方法ＨＢＶＤＮＡ检测结果进行了比较。结果证实，酶消化法、碱变性法和微波法ＨＢＶＤＮＡ检出率（均为７１．８８％，４６／６４）高于直接法和热变性法（均为６２．５％，４０／６４），而且酶消化法、碱变性法和微波法的敏感性明显高于直接法和热变性法。综合比较这５种ＰＣＲ方法，碱变性法和微波法不仅敏感性高、简便和快速，而且抗污染性强、结果稳定可靠，值得推广应用。

TTV感染血清学、原位杂交及干扰素治疗研究

目的了解ＴＴＶ感染状况，探讨ＴＴＶ致病性及对干扰素治疗的应答。方法采用ＰＣＲ和原位杂交方法检测血清和肝组织中ＴＴＶ ＤＮＡ，回顾分析８例ＴＴＶ／ＨＣＶ感染者干扰素治疗后病毒及ＡＬＴ应答状况。结果各型肝病患者（３６．７％～４２．８％）和职业供血员（４３．２％）ＴＴＶ感染率均显著高于义务供血员（健康对照人群，５．６％）。部分感染者采用斑点杂交方法可自血清中检出ＴＴＶ ＤＮＡ（３／３０，１０．０％），提示存在较高的血清病毒负荷， １６例慢性非甲～戊型肝炎患者及１６例肝炎后肝硬化患者肝组织以原位杂交检测，各６例ＴＴＶ ＤＮＡ阳性（３７．５％）。 ８例ＴＴＶ／ＨＣＶ混合感染者经２４周疗程干扰素治疗后，６例维持持久ＡＬＴ应答（停药后２４周ＡＬＴ正常），治疗１２周时， ８例血清ＴＴＶ ＤＮＡ均阴转，但 ２例停药后复阳， ＡＬＴ无应答的２例患者， ＨＣＶ ＲＮＡ呈阳性但ＴＴＶ ＤＮＡ阴怀；而ＴＴＶ ＤＮＡ阳转的２例患者ＡＬＴ均维持应答。结论 ＴＴＶ感染在肝病患者和职业供血员中较普遍， ＴＴＶ可在肝组织中活跃复制，其对干扰素治疗反应较敏感，ＴＴＶ／ＨＣＶ重叠感染时ＴＴＶ无明显致肝损伤作用。

丙型肝炎病毒在供、受血者间传播的调查

采用市售第二代抗HCVELISA试剂对一组供、受血者血清抗HCV进行了抽查。结果表明，未经地方血站抗HCV筛选的献血员血清抗HCV阳性率为18．57％，经筛选后为1．03％～5．24％，正常人群为1．98％，同期受血者为7．59％，抗HCV阳性与阴性献血者HCVRNA检测阳性率分别为56．8％与20．0％。在9例接受抗HCV阳性血液的受血者中，1例患者受血前后抗HCV均为阳性，5例抗HCV及6例HCVRNA阳转，6例血清HCV感染标志阳转者中4例ALT明显较正常为高，其中3例因临床症状较重而再次住院治疗。研究还发现3例输血感染者所接受的血液中抗HCV呈低表达状态（采用ELISA检测，OD值0．22～0．39），并对此进行了讨论。

戊肝与丙肝病毒在献血员人群中感染状况的对比研究

采用市售试剂对武汉地区乡村献血员进行血清抗ＨＥＶ与抗ＨＣＶ检测，两者的阳性率分别为５．７４％及９．３５％。在２８８份有ＡＬＴ记录的单采浆献血员中，有近期ＡＬＴ升高史的献浆者抗ＨＥＶ及抗ＨＣＶ检出率分别为１４．０４％及１４．１８％，均显著高于无近期ＡＬＴ升高史的献浆者。对上述标本同时进行多项血清ＨＢＶ标志检测，抗ＨＥＶ阳性及抗ＨＣＶ阳性组献血员多项ＨＢＶ标志检测结果与相应阴性组比较均未见显著的差别。

流行性出血热患者对野、家鼠型病毒多肽抗原的抗体应答

应用兔抗流行性出血热(EHF)病毒血清及EHF病人血清对野、家鼠型EHF病毒多肽抗原进行免疫识别,发现两型病毒多肽抗原间稍有差异。不同流行地区EHF病人血清大多数可与两型病毒49.6ku(50kd)多肽反应,提示该多肽可能是EHF病毒引起机体抗体应答反应的主要抗原成分。并对EHF病人血清中针对两型病毒多肽抗原的抗体检出率与临床病程及病型的关系进行了观察。

免疫转印技术在分析流行性出血热患者血清循环免疫复合物组份中的应用

免疫转印技术在分析流行性出血热患者血清循环免疫复合物组份中的应用武汉同济医科大学附属同济医院临床免疫研究室，武汉４３００３０陈悦，杨东亮，李方和，喻植群，郝连杰关键词出血热．流行性；循环免疫复合物；免疫转印技术中图法分类号Ｒ５１２．８免疫转印技术是本...

HBc-HLA-A＊ 1101-β2m复合物单体及其四聚体的制备和鉴定

目的制备HBc-HLA-A ＊ 1101-β2m复合物单体和四聚体,并对其特异性进行了鉴定。方法原核高效表达的HLA-A ＊ 1101-BSP和β2m蛋白,在抗原肽（乙型肝炎病毒的核心蛋白HBc88-96）的存在下,体外复性折叠成可溶性的HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体,经BirA酶作用并通过凝胶过滤层析法纯化复合物单体;然后将此复合物单体与藻红蛋白标记的链霉亲和素按一定比例耦合构建成四聚体;最后用流式细胞仪检测分析该四聚体结合特异性CTL的能力。结果Western blot和Dot-ELISA检测显示所制备的HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体具有天然构象,且可被生物素化;流式细胞仪分析显示所制备的四聚体可与HLA-A11^＋供者的抗原特异性CTL结合。结论成功制备了具有完整构象的生物素化HLA-A ＊ 1101抗原肽复合物单体;此四聚体可以特异检测抗原特异性的细胞毒性T细胞。