长春新碱长循环热敏脂质体的抗肿瘤活性

目的评价长春新碱长循环热敏脂质体(VTSL)的体内外抗肿瘤活性。方法采用MTT法评价长春新碱注射液(VCR)和VTSL对sw620、PANC细胞的细胞毒作用;使用香豆素-6(Cou-6)标记脂质体,Hoechst 33258细胞染色,激光共聚焦显微镜观察HT-1080细胞对长循环热敏脂质体(TSL)摄取情况;建立荷瘤裸鼠模型(Hep G-2、MCF-7),给药后加热肿瘤部位30 min,测量裸鼠体质量和肿瘤体积,比较研究VTSL的抑瘤效果。结果脂质体组给药后72 h,sw620细胞活性均<5%,PANC细胞活性均<20%,较VCR显示出更强的细胞毒作用;Cou-6标记脂质体加热后细胞内绿色荧光增强,细胞摄取增多;同剂量下VCR和VTSL对Hep G-2、MCF-7的抑瘤率分别是50.0%和69.7%,47.8%和76.1%,治疗结束后肿瘤质量存在显著性差异。结论将长春新碱制备成为VTSL提高了细胞毒性,加热能促进脂质体与细胞膜融合;在相同治疗剂量下,VTSL比VCR抑瘤率显著提升且存在一定的剂量依赖性。结果表明将长春新碱制备为VTSL应用于实体瘤治疗,能显著提高其治疗效果,有潜力拓展该药物的临床适用范围。

在线固相萃取-液相色谱串联质谱法测定阿姆西汀异构体的药代动力学差异

建立了在线固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法（ On-line SPE HPLC-MS/MS）测定大鼠血浆中S/R-阿姆西汀手性异构体的方法。血浆样品经过以下预处理步骤：采用甲醇-乙腈（50：50, V/V）沉淀蛋白；应用On-line SPE将血浆样品中的其它杂质去除；将保留在SPE柱上的阿姆西汀和内标洗脱后用分析柱进一步分离。分离后再用串联质谱法分别测定大鼠血浆中S/R-阿姆西汀的含量。 SPE柱为 Retain PEP Javelin（10 mm ×2.1 mm）；分析柱为ZORBAX SB-C18（50 mm ×2.1 mm×3.5μm）。质谱采用电喷雾离子源（ESI）,多反应监测（MRM）模式,检测离子为正离子,分别选择m/z 292.1/154.0和260.4/116.2作为S/R-阿姆西汀和内标（普萘洛尔）的检测离子对。结果表明,S/R-阿姆西汀的线性范围为0.2～1000μg/L,相关系数 R 分别为0.9903和0.9951,批内精密度 RSD 分别为1.2％～12.0％和0.4％～11.2％,回收率分别为94.2％～101.6％和94.3％～109.4％之间。本方法显著提高了阿姆西汀的检测灵敏度,可以满足大鼠灌胃给予阿姆西汀两种异构体的药代动力学研究要求。

HPLC法测定复方美托拉宗片中美托拉宗和缬沙坦的相关物质

目的建立复方美托拉宗片中美托拉宗和缬沙坦相关物质的HPLC测定方法。方法采用Agilent Eclipse SBC18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(pH=3.5)-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速:1.0 ml/min,柱温:30℃,检测波长:237 nm,进样量:20μl。结果美托拉宗、缬沙坦及其相关物质之间分离度良好;美托拉宗在3~30μg/ml、缬沙坦在0.1~2.0μg/ml、缬沙坦杂质B在0.08~2.0μg/ml范围内峰面积与浓度线性关系良好;其平均回收率分别为102.97%、100.81%和100.44%;该法的重复性及中间精密度均符合要求;检测用溶液在室温条件下放置24 h稳定。结论该法专属性强、灵敏度高、准确可靠,可用于复方美托拉宗片中美托拉宗和缬沙坦相关物质测定。

新型抗脑卒中化合物TID-101自微乳制剂大鼠体内生物利用度研究

目的建立测定大鼠血浆中防治缺血性脑卒中化合物TID-101的LC-MS/MS方法,并研究其自微乳制剂大鼠体内生物利用度及药代动力学特征。方法血浆样品用甲醇沉淀蛋白处理,以乙腈-水为流动相,采用ESI源以多反应监测方式进行负离子检测,用于定量分析的离子反应为m/z 353.4→323.2（TID-101）和433.4→353.4（醋酸地塞米松,内标）。将建立的方法应用于大鼠口服TID-101自微乳的生物利用度及药代动力学研究。结果 TID-101在10~95 000 ng/ml内呈良好的线性关系（r=0.999 8）,日内、日间精密度（RSD）均〈15%,回收率在83.4%~87.0%之间。应用此法测试大鼠静脉注射TID-101脂肪乳和口服原料药及自微乳制剂后的血药浓度,计算出原料药混悬液和自微乳的口服绝对生物利用度分别为2.8%和14.9%。结论本法操作简单、准确、灵敏度高,可用于TID-101大鼠体内药动学研究;自乳化释药系统能有效提高TID-101大鼠口服生物利用度。

羟基红花黄色素A的药代动力学及生物药剂学研究进展

羟基红花黄色素A(HSYA)是红花的主要活性成分,具有活血化瘀的功效,临床用于心脑血管疾病的治疗。由于HSYA生物利用度低,限制了其口服制剂的开发与应用。近年来,HSYA的生物药剂学研究取得了很大进展,本文着重从HSYA理化性质、药代动力学特征、增加HSYA口服吸收的策略和制剂研究4个方面综述HSYA的研究进展,为相关研究提供参考。

T7肽修饰的硫酸长春新碱脱铁铁蛋白纳米粒制备及其对胶质瘤细胞的体外靶向性研究

目的:制备T7肽修饰的硫酸长春新碱(VCR)-脱铁铁蛋白(APO)纳米粒,并研究其对胶质瘤细胞的体外靶向性。方法:采用解离-重组法制备VCR-APO纳米粒,以靶头(T7肽)修饰后制成T7-VCR-APO纳米粒。采用质谱分析和紫外-可见分光光度法评价靶头连接效率,并对所制纳米粒进行形态、粒径、Zeta电位、包封率等进行表征。以胶质瘤C6细胞为模型,考察T7-VCRAPO纳米粒对C6细胞及肿瘤球的靶向作用,并以低温条件和4种细胞内吞抑制剂考察C6细胞对T7-VCR-APO纳米粒的摄取机制。结果:经质谱检测证明T7肽已连接在纳米粒上,连接率为68.39%;所制得的T7-VCR-APO纳米粒形态圆整、均一,粒径为(31.14±1.26)nm,Zeta电位为(-23.30±0.42)m V,包封率为(39.49±2.84)%。体外靶向性研究显示,T7-VCR-APO纳米粒可有效地被C6细胞及肿瘤球摄取,并可到达肿瘤球核心位置;C6细胞对纳米粒的摄取是多通路共同作用的结果,主要是通过小窝蛋白介导的内吞并伴随巨胞饮途径。结论:本研究成功制得T7-VCR-APO纳米粒,其能够对胶质瘤C6细胞实现体外靶向递送药物,入胞效率大大提高。

琥珀酸去甲文拉法辛缓释片的质量检测

目的建立琥珀酸去甲文拉法辛缓释片释放度、含量、含量均匀度及有关物质检测方法,并进行方法学验证。方法采用紫外分光光度法测定释放度,高效液相色谱法测定含量、含量均匀度及有关物质,分别考察专属性、线性、回收率、精密度及稳定性等,进行方法学验证。结果释放度方法学验证结果显示,该方法专属性好,在10~200μg/ml范围内线性关系良好,回收率、重复性及中间精密度均符合要求;含量、含量均匀度检测方法验证结果显示,该方法专属性良好,在5~400μg/ml范围内线性关系良好,回收率、重复性及中间精密度均符合要求,溶液在24 h内稳定;有关物质方法学验证结果显示,该方法专属性好,灵敏度高,线性、回收率均符合要求,且溶液在室温条件下放置24 h稳定性良好。结论释放度检测方法简单、灵敏、专属性好、准确度高,含量及含量均匀度检测方法准确可靠,有关物质检测方法准属性好、灵敏度高,均可用于琥珀酸去甲文拉法辛缓释片的质量控制。

盐酸米托蒽醌热敏脂质体的制备及评价

目的制备盐酸米托蒽醌长循环热敏脂质体(M-LTL),建立其含量及包封率测定方法,并对其体内外热敏性进行研究。方法薄膜分散及pH梯度法制备M-LTL,高效液相色谱法(HPLC)测定脂质体中盐酸米托蒽醌(MIT)的含量,微柱离心法测定包封率。测定不同温度下M-LTL的释药率。以荷H22肝癌小鼠为肿瘤模型,肿瘤生长曲线和抑瘤率为指标,评价M-LTL的抑瘤效果。结果:M-LTL粒径均一,平均粒径为92 nm,平均包封率为99.8%。辅料和溶剂不干扰主药含量测定,线性范围2～20.0μg/ml。体外释药表明,药物在37℃与42℃下30 min内释药率分别为5.7%和63.7%。体内实验中M-LTL加热组和M-LTL不加热组抑瘤率分别为81.5%和61.1%。结论所制备的M-LTL粒径均一,包封率高。含量及包封率测定方法简便快捷,准确可靠。M-LTL加热时能够快速释药,具有热敏性,与热疗相结合能够有效抑制肿瘤生长。

咖啡因咀嚼片在比格犬体内的药代动力学研究

目的研究咖啡因咀嚼片在比格犬体内的药代动力学特征及其生物利用度。方法采用单剂量、双周期交叉实验设计,6只比格犬随机分为2组,分别先后口服咖啡因咀嚼片和静脉注射咖啡因注射液。采用LC-MS/MS法测定血浆中咖啡因含量,并进行了方法学验证。利用Winnonlin药代动力学软件计算药动学参数及生物利用度。结果口服咖啡因咀嚼片(规格:40 mg/片)和静脉注射1 ml咖啡因注射液(20 mg/ml)的AUC(0-∞)分别为33 321.4和15 233.4 μg·h/L;Cmax值分别为5346.7和4354.8 μg/L;t1/2分别为4.2和3.8 h;CL分别为124.4和158.1 L/h。由AUC(0-∞)估算,咖啡因咀嚼片绝对生物利用度为(109.37±46.50)%。结论咖啡因咀嚼片在比格犬体内吸收迅速,能快速发挥药效,生物利用度高且消除快。

高效液相色谱法法测定TH-302肝动脉栓塞微球的体外释放药量

目的建立TH-302肝动脉栓塞微球体外释放药量的测定方法。方法采用高效液相色谱法测定。色谱柱为:Venusil ASB C18(4.6 mm×150 mm,5μm);流动相为乙腈-水(30∶70,V/V);流速为1.0 ml/min;检测波长为316 nm;柱温30℃;进样体积为10μl。结果 TH-302的定量限与检测限分别为1.4和0.4μg/ml,在0.1~10μg/ml范围内呈良好的线性关系,线性方程为Y=10.867X-0.3034(R2=1.0000,n=8);各浓度的平均回收率在98.99%~101.77%之间,RSD为0.07%;稳定性实验结果表明TH-302在微球长期释放条件下不稳定。为能准确测定TH-302含量,本文建立了TH-302体外长期释放条件下不同时间实际峰面积与理论降解药量的线性关系,线性方程为:A实际=0.0523M降解-1.4166(R2=0.9919)。结论该法专属性良好,可准确、快速、灵敏地测定TH-302的含量。

聚乙二醇化生物技术药物面临的免疫原性挑战

聚乙二醇(PEG)化可有效延长药物半衰期,是目前生物技术药物变构化学中最重要最成熟的技术之一。在早期研究中,PEG并未表现出免疫原性及抗原性,一直被认为是生物惰性材料。然而随着越来越多的PEG化药物进入临床应用,关于患者体内产生抗PEG抗体造成药效损失的报道不断出现,有关PEG化蛋白药物重复给药后引发副反应的报道也逐渐增多。本文就PEG化生物技术药物面临的免疫原性问题及由此引发的加速血液清除(ABC)现象,综述了影响抗PEG抗体产生的关键因素及目前的应对策略。

酒石酸长春瑞滨长循环(热敏)脂质体在比格犬体内的药代动力学研究

目的：应用液相色谱质谱联用（ HPLC-MS／MS）建立长春瑞滨（ NVB）比格犬血浆检测方法并用于药代动力学研究。方法血浆样品采用蛋白沉淀和液－液萃取方法。色谱柱Venusil XBP C18（2．1 mm ＆#215;50 mm，3μm），柱温30℃，流动相∶水（10 mmol／L乙酸铵，1％乙腈）∶甲醇＝20∶80，流速0．3 ml／min，进样量5μl；采用正离子模式、电喷雾离子源（ESI）及多反应监测（MRM），NVB m／z 779．4～765．4，内标长春新碱m／z 825．4～122。结果 NVB在5～2500 ng／ml浓度范围线性良好（ r＝0．9994），准确度、精密度和提取回收率符合方法学验证要求，样品在－20℃和室温放置稳定性良好。比格犬给药后，Cmax分别为（833．51±150．42）和（1397．95±443．05） ng／ml、AUC（0－t）分别为（577．16±223．5）和（1059．82±408．27） ng／ml＆#183; h，Cl分别为（3014．64±1049．17）和（1633．10±551．77） ml／（h＆#183; kg）。显著性检验表明，两种制剂的Cmax、AUC（0－t）、AUC（0－∞）和Cl均有显著性差异（P≤0．05）。结论建立了准确、灵敏、可靠的定量检测比格犬血浆中NVB分析方法，可满足药代动力学研究。脂质体能提高药物达峰浓度，延长药物半衰期，增加药物暴露强度并降低毒性反应。

高效液相色谱法测定复方非洛地平控释片中2个组分释放度

目的建立复方非洛地平控释片2组分释放度测定方法。方法 以0.3%十二烷基硫酸钠(SDS)水溶液(磷酸调pH2.5)-乙腈-甲醇体积比(40∶50∶10)为流动相,流速1 mL.min-1,柱温25℃,进样量20μL,采用Agilent Eclipse C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱于233 nm处进行复方非洛地平控释片中非洛地平(FEL)和酒石酸美托洛尔(MET)释放度的检测。结果 非洛地平和酒石酸美托洛尔的相对保留时间分别为6.20和8.45 min,分离度达8.58,线性范围分别为1～24、10～240μg.mL-1,平均回收率分别为99.99%和99.91%,重复性及中间精密度实验2种药物的相对标准偏差(RSD)均小于2%。结论本方法快速、灵敏、准确,可用于复方非洛地平控释片释放度的测定。

高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用法测定紫杉醇热敏脂质体及其大鼠体内药动学研究

目的建立测定大鼠血浆中紫杉醇的高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用(LC-MS/MS)方法,并进行大鼠体内药动学研究。方法血浆经NaHCO3溶液(pH 8.0)碱化后,用叔丁基甲醚提取。液相分离采用Zorbax SB C18(2.1 mm×50 mm,3.5μm)分析柱,柱温25℃,以甲醇-水(含0.5 mmol.L-1乙酸铵)(70∶30,V/V)为流动相,流速为0.3 mL.min-1,进样量5μL;采用四级杆质谱检测器,电喷雾源(ESI),正离子方式检测,在选择离子监测(SIM)模式下检测离子对m/z 876.3→308.1(紫杉醇)和m/z 830.2→549.2(多西他赛)。两组SD大鼠分别尾静脉推注7 mg·kg-1紫杉醇热敏脂质体与紫杉醇注射液,采集血样后采用高效液相色谱-电喷雾源-质谱联用法测定血药浓度,计算主要药物动力学参数。结果血浆中无干扰测定的内源性物质,每个样品的分析时间为3.5 min;紫杉醇在2～1 000 ng.mL-1内呈良好的线性关系(r>0.998 5),定量限为2 ng.mL-1,日内、日间精密度RSD均小于15%。紫杉醇热敏脂质体的t1/2β、MRT、AUC和CL与紫杉醇注射液均具有显著性差异。结论本方法操作简便,特异性强,灵敏度高,可用于紫杉醇的药动学研究。与紫杉醇注射液相比,紫杉醇热敏脂质体能控制药物的释放,在一定程度上减轻了急性毒性,提高机体耐受性。

T7肽修饰的载长春新碱低密度脂蛋白纳米粒的制备及脑胶质瘤靶向性和治疗作用评价

本研究的目的是制备T7肽修饰的载长春新碱低密度脂蛋白(T7 peptide modified vincristine loaded low density lipoprotein,T7-LDL-VCR)纳米粒,用于血脑屏障(blood brain barrier,BBB)和脑肿瘤细胞双级靶向药物递送。首先通过超速离心法从人血浆中提取LDL纳米粒,然后采用干膜法将药物载入纳米粒脂质内核,再将T7肽共价修饰于纳米粒表面,表征其粒径、包封率和靶头连接效率。以Di R为探针,通过活体成像观察T7-LDL-VCR纳米粒在荷脑胶质瘤小鼠脑部中的分布情况,通过核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)观察纳米粒对脑胶质瘤的治疗作用,最后对小鼠的相对肿瘤体积和生存曲线进行测定。结果表明:制备的T7-LDL-VCR纳米粒粒径约30 nm,包封率为30.1%,T7-VCR-LDL的靶头连接效率为63.88%;在小鼠体内的脑靶向性及对脑胶质瘤治疗作用良好:T7-VCR-LDL、LDL-VCR和VCR的相对肿瘤体积分别为30%,51.50%和79.25%;中位生存期为36天,高于VCR-LDL 1.38倍、游离VCR 1.85倍和对照组2倍。本研究表明,T7-LDL-VCR具有BBB和脑肿瘤细胞双级靶向能力,是一种有前景的靶向治疗制剂。