lncRNA FENDRR靶向miR-362-5p抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭

目的:探讨FOXF1毗连非编码发育调控RNA(FENDRR)对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响,分析其机制是否与调控miR-362-5p表达有关。方法:qRT-PCR检测胶质母细胞瘤组织、细胞以及人脑正常胶质细胞HEB中FENDRR和miR-362-5p表达。以LN229细胞为研究对象,分别构建过表达FENDRR或抑制miR-362-5p表达的LN229细胞株,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活力,Transwell实验检测细胞的迁移侵袭能力,Western Blot检测细胞增殖相关蛋白[细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)]、迁移侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)]的表达水平。结果:胶质母细胞瘤组织、细胞中FENDRR的表达水平显著降低,miR-362-5p的表达水平显著升高(P<0.05)。过表达FENDRR或抑制miR-362-5p表达均可抑制Cyclin D1、MMP2和MMP9的表达,抑制LN229细胞的增殖、迁移和侵袭。过表达miR-362-5p可逆转FENDRR对LN229细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结论:lncRNA FENDRR可抑制胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移和侵袭,其机制可能与靶向负调控miR-362-5p表达有关。

下调miR-372靶向调控BTG1表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响

目的研究miR-372靶向调控B细胞易位基因(BTG)1的表达对胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子的影响。方法Realtime PCR方法测定胶质瘤细胞和正常星形胶质细胞中miR-372表达变化。在胶质瘤细胞中转染miR-372抑制剂(inhibitor),Realtime PCR方法检测下调效果,酶联免疫吸附试验(ELISA)测定细胞培养液上清中转化生长因子(TGF)-β1、血管内皮生长因子(VEGF)、白细胞介素(IL)-8含量。利用生物信息学软件预测miR-372的靶基因可能为BTG1,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。Western印迹检测miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞中BTG1蛋白表达影响。在胶质瘤细胞中共转染BTG1 siRNA和miR-372 inhibitor,检测细胞培养液上清中TGF-β1、VEGF、IL-8含量和细胞中BTG1蛋白水平。结果胶质瘤细胞中miR-372表达水平高于正常星形胶质细胞。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞分泌的TGF-β1、VEGF、IL-8含量显著减少。miR-372靶向调控BTG1。转染miR-372 inhibitor后的胶质瘤细胞中BTG1蛋白水平显著升高。BTG1 siRNA可以逆转miR-372 inhibitor对胶质瘤细胞分泌TGF-β1、VEGF、IL-8的抑制作用和BTG1蛋白表达的促进作用。结论下调miR-372靶向调控BTG1的表达抑制胶质瘤细胞分泌免疫抑制因子TGF-β1、VEGF、IL-8。

miR-18b-5p调控WWOX对胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的:研究miR-18b-5p对胶质瘤U251细胞增殖、凋亡的影响和潜在的分子机制。方法:qRT-PCR检测癌旁组织和胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达,MTT法和流式细胞术检测胶质瘤U251细胞增殖和凋亡率,Western blotting检测包含WW域的氧化还原酶基因(WWOX)、Cyclin D1、p21、Bax和Bcl-2蛋白表达,双荧光素酶报告系统验证miR-18b-5p和WWOX的调控关系。结果:与癌旁组织相比,胶质瘤组织中miR-18b-5p的表达量升高(P<0.01)。抑制miR-18b-5p表达可以抑制胶质瘤U251细胞增殖并促进细胞凋亡;miR-18b-5p靶向负调控WWOX的表达;过表达WWOX可抑制U251细胞增殖并诱导细胞凋亡;抑制WWOX表达逆转了抑制miR-18b-5p表达对U251细胞增殖、凋亡的影响(P<0.01)。结论:miR-18b-5p可能通过靶向调控WWOX表达抑制胶质瘤U251细胞增殖并诱导细胞凋亡,miR-18b-5p是胶质瘤潜在的分子靶点。

Hsa_circRNA_0006168在脑胶质瘤中的表达及其生物学意义

目的探讨胶质瘤细胞及脑胶质瘤组织中Hsa_circRNA_0006168的表达水平及其对胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭能力,以及对替莫唑胺(TMZ)敏感性的影响,并探讨Hsa_circRNA_0006168的表达水平对脑胶质瘤患者生存期的影响.方法选取2018年1月至2021年5月儋州市人民医院神经外科采用手术治疗的86例脑胶质瘤患者的肿瘤组织标本和25例因颅脑外伤行内减压术的非肿瘤脑组织标本进行细胞培养.采用人脑正常胶质细胞株(HEB)及人胶质瘤细胞株(U251、A172、U87和SHG-4)进行相关细胞研究.采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术检测所有细胞Hsa_circRNA_0006168的表达水平.Kaplan-Meier法分析Hsa_circRNA_0006168表达水平与脑胶质瘤患者生存期的关系,单因素及多因素Cox回归分析法分析Hsa_circRNA_0006168表达水平对脑胶质瘤患者生存期的影响.选择胶质瘤细胞U251,分为siRNA-circ抑制组、siRNA-对照组和空白对照组.CCK-8法检测细胞的增殖能力和对TMZ的敏感性,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭能力.结果与非肿瘤脑组织标本及人脑正常胶质细胞比较,脑胶质瘤组织及所有胶质瘤细胞中的Hsa_circRNA_0006168的表达水平均明显升高(均P<0.001).世界卫生组织(WHO)高级别脑胶质瘤患者肿瘤组织中Hsa_circRNA_0006168的表达水平高于低级别脑胶质瘤(分别为2.06±0.81、0.97±0.38,P<0.001).Kaplan-Meier分析结果显示,Hsa_circRNA_0006168高表达与脑胶质瘤患者生存期短有关(P<0.001).多因素Cox回归分析显示,除高级别脑胶质瘤、肿瘤远隔部位转移、TMZ耐药外(均P<0.05),Hsa_circRNA_0006168高表达是影响脑胶质瘤患者生存期的危险因素(HR=3.32,95%CI:2.92~7.31,P<0.001).siRNA-circ抑制组、siRNA-对照组及空白对照组Hsa_circRNA_0006168的表达水平分别为0.28±0.13、0.90±0.34、0.87±0.31,差异有统计学意义(P<0.001).siRNA-circ抑制组细胞增殖率低于siRNA-对照组(P<0.001).Transwell小室实验结果显示,U251细胞培养24 h,siRNA-circ抑制组、siRNA-对照组及空白对照组的细胞迁移数分别为(81.35±10.72)个、(173.26±28.40)个、(174.80±27.25)个;培养48h,3组的侵袭细胞数分别为(39.85±6.24)个、(106.48±14.73)个、(104.72±13.84)个,差异均有统计学意义(均P<0.001).给予不同浓度的TMZ处理U251细胞24 h,与siRNA-对照组比较,siRNA-circ抑制组细胞存活率均降低,差异均有统计学意义(P<0.001).结论Hsa_circRNA_0006168在脑胶质瘤组织及细胞中均呈高表达,其高表达与脑胶质瘤患者的预后差有关;下调Hsa_circRNA_0006168表达能抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭,并能促进对TMZ的敏感性.

HSP22对ox-LDL诱导的人脑微血管内皮细胞损伤的影响及机制

目的研究热休克蛋白22(HSP22)对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的HBMEC人脑微血管内皮细胞(HBMEC)损伤的影响及其机制。方法使用含不同浓度(0、20、40、80、160μg/ml)ox-LDL的培养基培养HBMEC细胞,Real-time PCR和Western blot检测HSP22和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA和蛋白表达;ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6和IL-1β含量;Griess法检测一氧化氮(NO)含量;在80μg/ml ox-LDL培养的HBMEC细胞中,采用ELISA、Griess、Real-time PCR和Western blot法检测干扰或过表达HSP22后TNF-α、IL-6、IL-1β、NO含量和eNOS mRNA、蛋白表达的变化。结果 ox-LDL能促进HBMEC细胞中HSP22表达(P<0.05),能诱导炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β释放,并抑制NO合成和eNOS mRNA表达,均呈浓度依赖性(P均<0.05)。在80μg/ml ox-LDL培养的HBMEC细胞中,干扰HSP22,炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β分泌增加,NO合成减少,eNOS mRNA表达下调(P均<0.05);过表达HSP22则结果相反。结论 ox-LDL能够诱导HBMEC细胞功能损伤,HSP22通过抑制TNF-α、IL-6、IL-1β分泌和NO合成并促进eNOS表达,对HBMEC细胞发挥保护作用。

血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平对创伤性脑损伤严重程度和预后评估的价值

目的探讨血清可溶性髓样细胞触发受体-1(sTREM-1)、白介素-12(IL-12)及白介素-33(IL-33)水平对创伤性脑损伤(TBI)严重程度和预后评估的价值。方法选取儋州市人民医院神经外科自2016年1月至2019年12月收治的142例TBI患者,根据治疗后28 d的预后情况将患者分为存活组(107例)和死亡组(35例),依据GCS评分将患者分为轻中度组87例(GCS 13~15分10例,9~12分77例)和重度组55例(GCS 3~8分)。比较各组第1、3、5天血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平变化。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平,预测TBI患者死亡的价值。结果死亡组GCS评分明显低于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。死亡组第1、3、5天血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平均明显高于存活组,差异有统计学意义(P<0.05)。重度组第1、3、5天血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平均明显高于轻中度组,差异有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线显示,第3天sTREM-1、IL-12及IL-33联合预测TBI患者死亡的曲线下面积(0.933,95%CI:0.875~0.994)最大,其敏感度和特异度为95.4%和88.0%。结论血清sTREM-1、IL-12及IL-33水平升高与TBI患者的病情严重程度相关,第3天采用3项联合检测对预测TBI患者预后有较好的价值。