胃酶消化马血浆工艺参数的优化

目的应用DOE试验优化破伤风抗毒素（tetanus antitoxin,TAT）生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数。方法以破伤风类毒素免疫后的马血浆为原料,通过AKTA avant25中UNICORN 6.0软件设计4因子2水平全因子DOE试验模型,并以抗体F（ab′）2含量为评价指标,对影响胃酶消化的主要因子即胃酶加量、消化反应pH值、反应温度和反应时间进行优化。结果胃酶消化马血浆的最适工艺参数为：胃酶加量为13~15 U/ml,消化反应pH值为3.0~3.1,反应温度为35~37℃,反应时间为90~120 min,在该条件下进行6次稳定性试验,制备的TAT抗体F（ab′）2含量平均值达83.1%,标准偏差为2.47%。结论 DOE试验优化了TAT生产中胃酶消化马血浆过程的工艺参数,建立了有效的消化工艺,为降低过敏反应,提高TAT制品的质量提供了实验依据。

牛病毒性腹泻病毒的体外培养及其多克隆抗体的制备

目的体外培养牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV),并制备其多克隆抗体。方法制备牛肾原代细胞,并进行传代,建立细胞库。将BVD/MD Oregon C24毒种接种至牛肾细胞,进行体外传代,建立BVDV毒种库。按MOI=0.01将BVDV接种至牛肾细胞,制备BVDV病毒液,经Sepharose CL-2B凝胶柱纯化后,分别免疫家兔和健康海蓝白产蛋鸡,制备兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体,ELISA法测定效价。结果牛肾细胞体外传至20代生长状态均良好,传代稳定。建立的BVDV毒种库的毒力达7.50 CCID_(50)/mL,BVDV病毒液毒力达7.00 CCID_(50)/mL以上,纯化后毒力达5.00 CCID_(50)/mL以上。获得的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价分别为1∶12 800和1∶6 400。结论体外成功培养了BVDV,制备的兔抗BVDV和鸡抗BVDV多克隆抗体效价较高,为BVDV检测试剂盒的研发奠定了基础。