野生型p53基因导入诱导神经细胞凋亡

目的 观察野生型 p5 3基因诱导神经细胞凋亡的现象 ,探讨外源性 p5 3基因对神经细胞 p2 1、c-fos和 c-jun基因表达的影响。方法 构建了野生型 p5 3基因的重组线病毒载体 ,体外转染胚胎大鼠神经细胞 ,应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的切口末端标记技术原位检测细胞凋亡 ,以免疫组化法测定 P2 1 、c-Fos和 c-Jun蛋白表达水平。结果 外源性基因导入神经细胞后 ,P2 1、c-Fos和 c-Jun蛋白水平显著增高 ,d UTP切口末端标记阳性细胞百分率约为 4 0 %。结论 野生型 p5 3基因可诱导神经细胞凋亡和促进 p2 1、c-fos和

低密度脂蛋白胆固醇测定匀相法试剂评价

目的评价国内市场7种LDL-C匀相法试剂的分析质量。方法用超速离心-HPLC法作为比对方法,7种LDL-C试剂与Hitachi 7170A组合构成的7种分析系统为待评常规方法。用比对方法和常规方法同时测定40份新鲜人血清,考察常规方法的精密度、偏差和总误差等。结果7种匀相法试剂均具有良好的精密度(CV<4%)。与超速离心-HPLC法相比,方法B、D、E和F测定的平均偏差和医学决定水平上的偏差均<4%,符合美国国家胆固醇教育计划(NCEP)的要求。方法C和G存在明显的特异性问题和校准偏差。所有7种方法测定的总误差均未能达到NCEP的要求,方法A、B、D和E测定的总误差达到美国临床实验室改进修正案(CLIA′88)的要求。结论目前有些LDL-C匀相法试剂的准确性和特异性尚不能满足要求,临床实验室应重视LDL-C试剂的选择和评价。

超速离心高效液相色谱准确测定血清脂蛋白(a)胆固醇

目的建立血清脂蛋白(a)胆固醇的准确测定方法。方法血清与含脯氨酸的溴化钠溶液混合,使背景密度为1.044,超速离心;用含2-巯基乙醇的溴化钠溶液将底部组分的密度调节至1.040,再次超速离心,高效液相色谱测定顶部组分胆固醇即为脂蛋白(a)胆固醇。结果用2-巯基乙醇使脂蛋白(a)解离,使成为不含载脂蛋白(a)的脂蛋白(a),脂蛋白(a)解离前后存在明显密度分界区域,使脂蛋白(a)的分离和测定成为可能。测定脂蛋白(a)胆固醇的批内和总变异系数分别为1.84%～2.17%和2.85%～4.29%。结论建立新的血清脂蛋白(a)胆固醇测定方法,方法精密、可靠,可望在脂蛋白(a)测定标准化中发挥作用。

单纯性肥胖青少年血清脂蛋白亚组分水平分析

目的探讨青少年单纯性肥胖与血清脂蛋白及其亚组分水平的关系。方法采用超速离心-高效液相色谱法测定60例肥胖青少年和19例体重指数正常者血清脂蛋白及其亚型水平。使用双能量X线吸收仪检测所有受试者全身及躯干部体脂比率。结果与正常对照组相比,肥胖组血清TC(4.47±0.90)比(3.79±0.50)mmol/L、TG(1.02±0.41)比(0.72±0.34)mmol/L、LDL-C(2.56±0.81)比(1.95±0.35)mmol/L、LDLa-C(2.39±0.83)比(1.74±0.37)mmol/L平均水平显著增高,而HDL-C(1.18±0.23)比(1.35±0.16)mmol/L、HDL2-C(0.73±0.21)比(0.91±0.16)mmol/L平均水平明显降低(P<0.01)。BMI、腰围、全身体脂及躯干体脂比率分别与TC、TG、LDL-C、LDLa-C水平呈显著正相关,与HDL-C、HDL2-C水平呈显著负相关(P<0.05,P<0.01)。结论单纯性肥胖青少年存在与肥胖相关的早期脂质代谢紊乱的趋势。

外源性Rb基因对神经细胞衰老的影响

目的 观察外源性 Rb基因对神经细胞衰老的影响 ,并探讨 Rb基因对神经细胞 P2 1基因表达的调控。方法 用外源性 Rb基因重组腺病毒载体感染体外培养的胚胎大鼠神经细胞 ,以β-半乳糖苷酶染色观察神经细胞的衰老变化 ,用免疫组化法测定 P2 1蛋白表达水平。结果 外源性Rb基因导入神经细胞后 ,P2 1蛋白水平显著增高 ,与衰老相关的 β-半乳糖苷酶表达也增加。结论 Rb基因可能通过上调 P2 1基因表达促进神经细胞衰老。

低密度脂蛋白胆固醇测定匀相法试剂评价

低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）升高是动脉粥样硬化性心血管疾病（CVD）的重要危险因素。饮食和药物干预研究结果表明降低LDLC可以减少CVD事件的发生和死亡。因此，在美国国家胆固醇教育计划（NCEP）成人治疗方案第三版（ATPⅢ）和我国成人血脂异常防治指南中，都将降LDLC治疗作为CVD防治的第一目标。

人重组载脂蛋白E在大肠杆菌中的表达和纯化

用含有载脂蛋白EcDNA的PET32a原核表达载体转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,使之高效表达载脂蛋白E thioredoxin融合蛋白。利用融合蛋白上的一段组氨酸序列 ,用镍离子亲合层析柱进行分离纯化。由于在载脂蛋白E和thioredoxin之间存在凝血酶的识别位点 ,用凝血酶消化后 ,经SephacrylS 30 0凝胶过滤得到人重组载脂蛋白E。用此方法可以从 1L大肠杆菌培养液中纯化 2 0～ 30mg高纯度的各种载脂蛋白E异构体和非自然存在的突变体 ,方法简便 ,产量高 ,纯度达 95 %以上。

Cholestech L·D·X血脂分析仪及其干化学测试卡的使用性能

ＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬ·Ｄ·Ｘ血脂分析仪及其干化学测试卡的使用性能国汉邦，唐蔚青，李培瑛（卫生部北京老年医学研究所生化室，北京１００７３０）美国加利福尼亚ＣＨＯＬＥＳＴＥ公司生产的脂类测定用于化学板配干ＣｈｏｌｅｓｔｅｃｈＬ·Ｄ·Ｘ分析仪，用３５μｌ...

丹参红花提取物保护内皮细胞免受氧化损伤的体外实验

目的:观察低密度脂蛋白和无血清培养刺激下人脐静脉内皮细胞内活性氧、NOX4mRNA水平和细胞凋亡的变化,以及丹参红花提取物的干预作用。方法:实验于2005-11/2006-05在卫生部老年医学重点实验室完成。取人新鲜脐带分离培养人脐静脉内皮细胞,分为:①正常对照组。②无血清培养组:用无血清培养基培养24h。③低密度脂蛋白处理组:以含有800mg/L低密度脂蛋白的培养基培养16h。④丹参红花提取物预处理组:用丹参红花提取物(商品名丹红滴注液,由陕西步长集团提供浓缩液,国药准字号Z20026866/Z20026867)预处理24h后加入800mg/L低密度脂蛋白继续培养16h或在无血清培养基中培养24h。以MTT法观察丹参红花提取物对人脐静脉内皮细胞生长的影响;应用反转录-聚合酶链反应检测NOX4mRNA水平;用流式细胞仪分析细胞凋亡率;并以DCFH-DA法检测细胞内活性氧生成量。结果:①低密度脂蛋白处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡为正常对照组的1.3倍,1.2倍和4倍。②无血清培养组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为正常对照组的1.4倍、1.6倍和3倍。③丹参红花提取物预处理组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为低密度脂蛋白处理组的0.4倍,0.5倍和0.2倍。④丹参红花提取物组NOX4mRNA表达、细胞内活性氧生成量和细胞凋亡分别为无血清培养组的0.2倍、0.5倍和0.6倍。结论:丹参红花提取物能够有效抑制高脂及缺血状态下NOX4mRNA表达水平,从而抑制人脐静脉内皮细胞内活性氧的产生及细胞凋亡,对内皮细胞起到很好的保护作用。

高密度脂蛋白及亚型与2型糖尿病高血压患者大血管病变相关性研究

目的研究2型糖尿病合并高血压患者中脂蛋白及亚组分与大血管病变的关系。方法测定52例2型糖尿病合并原发性高血压患者的血清脂蛋白亚型,其中合并大血管病变者28例。分析脂蛋白亚型与大血管病变之间的关系。结果大血管病变组的2型糖尿病家族史阳性比率及高血压病程均高于无血管病变组,年龄、性别、吸烟史、糖尿病病程、体质指数在两组间差异无显著性。大血管病变组HDL血清水平低于无血管病变组,HDL亚型水平低于无血管病变组,LDL及亚型高于无血管病变组,但差异无显著性。调整年龄、性别、吸烟史后,大血管病变与HDL,HDL2呈负相关;TG与HDL和HDL2呈负相关,与空腹血清血糖、LDLb呈正相关。增龄和HDL水平下降是2型糖尿病合并高血压患者罹患大血管病变的独立危险因素。结论2型糖尿病合并高血压患者发生大血管病变可能与HDL下降有关,对于此类患者应进行综合调脂治疗以防治血管病变。

北京部分职业人群血清非高密度脂蛋白胆固醇参考值及其分布

非高密度脂蛋白胆固醇代表除高密度脂蛋白胆固醇以外一切有致动脉粥样硬化作用的脂蛋白 (以胆固醇含量表示 )的总和 ,用总胆固醇减去高密度脂蛋白胆固醇即可算出。为了解北京部分职业人群非高密度脂蛋白胆固醇的参考值及其分布 ,选择调查 2 0 0 0～ 2 0 0 1年来院体检的北京市事业及企业单位干部与职工 (不包括体力劳动者 ) ,共计 2 816 1人 (男 女为 6 4 ) ,年龄 2 0～ 85岁。按标准化要求空腹测定总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及甘油三酯水平 ,以Freidewald公式计算低密度脂蛋白胆固醇水平。结果发现 ,非高密度脂蛋白胆固醇随年龄上升 ,5 0岁以下男性高于女性 ,5 0岁以上女性高于男性。非高密度脂蛋白胆固醇年龄标化均值男为 3.4 7mmol L、女为 3.2 9mmol L ,但老年男为 3.90mmol L、老年女高达 4 .2 1mmol L。假定甘油三酯在临界值 (1.7mmol L)时 ,非高密度脂蛋白胆固醇比低密度脂蛋白胆固醇高 0 .77mmol L ,由于该组人群甘油三酯水平较低 ,各年龄组两项指标的差距都或多或少地低于 0 .77mmol L。调查所得非高密度脂蛋白胆固醇水平比美国全国有代表性的数据大约低 2 0 % (男女相近 ) ,以上表明北京部分职业人群动脉粥样硬化性心血管病危险明显低于美国人。

白鲜皮水提物对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化早期病变形成的抑制作用

目的研究白鲜皮水提物对载脂蛋白E基因缺损小鼠主动脉弓粥样硬化早期病变形成的影响。方法将40只ApoE-/-小鼠随机分成空白对照组和白鲜皮高、中、低三剂量组(白鲜皮水提物3.2、1.6、0.8 g/kg)给药,计算各组主动脉弓粥样硬化病变的面积。体内检测血清中的脂质含量以及抗氧化指标丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽-S转移酶(GST)的活性变化。测定白鲜皮水提物对Cu2+介导的人血清低密度脂蛋白(LDL-C)氧化易感性的影响。结果与对照组相比,白鲜皮各给药组小鼠动脉粥样硬化早期病变面积均小于对照组,血清中MDA的含量降低,SOD、CAT活性增高,GST变化不明显,血清脂质含量组间没有显著差异。白鲜皮水提物明显延长Cu2+介导的人血清LDL氧化滞留时间和达峰时间。结论白鲜皮水提物对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化早期病变形成具有显著的抑制作用,其作用机制可能是通过对抗脂蛋白的过氧化作用而实现。

血清高、低密度脂蛋白胆固醇标准物质的研究

目的研制与临床样品基质相似的冰冻人血清HDL—C和LDL-C标准物质。方法按国家标准物质技术规范，选择身体健康、年龄和性别适当、无传染病的志愿者采取空腹静脉血，离心分离血清，以不同胆固醇水平分成3组，分别混合、除菌过滤和分装。检验血清HDL—C和LDL—C的均匀性和稳定性。分另q用DCM法和UC／HPLC法为HDL—C和LDL—C定值。评估不确定度。应用不同分析系统测定三种血清的HDL—C和LDL—C。结果①三种血清HDL-C和LDL—C均匀性检验方差分析P值均〉0．05，说明均匀性良好。②稳定性研究结果显示血清HDL—C和LDL—C在-80℃保存至少可稳定1年。③三种血清HDL-C和LDL-C的定值士不确定度（mmol／L）分别为1．640±0．028，1．652±0．027，1．184±0．022和4．577±0．097，2．492±0．072，1．788±0．041。④16家临床实验室以各自分析系统测定3种冰冻血清与新鲜血清反应趋势基本一致，HDL-C和LDL—C均值与定值偏差分男4为3．24％，2．7％，4．63％和－2．64％，0．64％，1．08％。结论3种冰冻人血清均匀、稳定，定值可靠，在常规分析系统中互通性良好，已被国家质量监督检验检疫总局批准为国家一级标准物质（GBW09178，GBW09179，GBW09180）。

2型糖尿病患者脂蛋白亚组分与冠心病的相关性分析

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者脂蛋白亚组分与冠心病(CHD)的关系。方法采用超速离心及高效液相色谱法测定84例(T2DM)患者的血清脂蛋白亚型。结果(1)CHD组年龄、高血压患病率升高(P<0.05)。(2)CHD与HDL和HDL2呈负相关;TG与LDLb呈正相关,与HDL、HDL2、HDL3和LDLa呈负相关(P均<0.05)。回归分析显示,年龄和HDL2是T2DM合并CHD的独立危险因素。结论HDL的抗动脉粥样硬化作用可能由HDL2完成,HDL2是比总HDL更好的糖尿病合并CHD的预测因子。

1981～2001年北京市职业人群血清总胆固醇水平的变动

分析 1981年至 2 0 0 1年 2 0年间北京市部分职业人群血清总胆固醇水平的变化。在力求做到血脂测定标准化的基础上 ,回顾性分析 2 0年来北京市部分机关和企事业单位工作人员 47434人次总胆固醇水平的变化 ,按年度、性别、年龄分组统计。结果发现 ,总胆固醇水平从 1981年至 1988年间上升幅度较大 ,年龄调整均值男性上升0 .73mmol/L (2 8mg/dL) ,女性上升 0 .6 2mmol/L (2 4mg/dL)。至 1990年已达最高值 ,2 0 0 1年低于 1991年 ,男、女年龄调整均值分别回落 0 .2 1mmol/L (8mg/dL)及 0 .2 3mmol/L (9mg/dL)。男女总胆固醇水平随年龄上升 ,从青年至老年 ,男性上升约 2 0 %,而女性升高达 35 %,上升趋势基本一致。不同年龄组间上升幅度有明显的男女差异 ,青年期男性大于女性 ,中年以后女性上升幅度增大 ,从 40～ 49岁至 5 0～ 5 9岁组男性平均上升 3%,而女性上升达 14%,6 0岁以后上升很少。所以总胆固醇水平在 5 0岁以前男性高于女性 ,5 0岁以后女性高于男性。以 1985年、1991年和 2 0 0 1年为例 ,无论男女 ,年龄标化的高胆固醇检出率 [总胆固醇≥ 5 .17mmol/L (2 0 0mg/dL)、≥ 5 .6 9mmol/L (2 2 0mg/dL)及≥ 6 .0 2mmol/L (2 40mg/dL) ]1991年比 1985年明显增高 ,而 2 0 0 1年与