光学方法分析GABA及GABAA受体在脑干听觉传入通路的作用

目的：旨在探讨脑干听觉传入通路中GABA能神经递质及GABAA受体对电刺激位听神经传入冲动的影响。方法：使用出生后0-5 d的ddy/ddy小鼠制备脑干切片。脑片经电压敏感染料NK3041染色,电刺激与脑片相连的位听神经残端。使用16×16像素的硅光电二极管阵列测量光学信号。所采集的数据使用ARGUS-50/PDA软件分析。结果：多部位的光学记录方法显示了从位听神经到耳蜗核和前庭核的兴奋性传导的时间-空间分布。其中每一个光学成分由快峰电位样反应和慢反应组成。抑制性神经递质GABA可降低诱发的光学信号的快反应和慢反应,GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱可增强这些反应。结论：16×16像素的硅光电二极管阵列可记录位听神经刺激诱发的多部位光学信号,每一个光学信号含有突触前及突触后电位成分。抑制性神经递质GABA和GABAA受体拮抗剂可调节光学信号的兴奋性传导。

电刺激听神经诱发小鼠脑干神经元活动的光信号及GABA能的作用

目的 使用光学记录的方法观察小鼠脑干听神经电刺激诱发冲动的时间 空间分布 ,及抑制性神经递质GABA和GABAA受体拮抗剂荷包牡丹碱 (BMI)对听觉诱发冲动的影响。 方法 使用出生后早期的 (0～ 5d)ddy/ddy小鼠 ,在冷冻条件下制作有活性的脑干切片 ;用电压敏感染料 (NK 30 4 1)做脑片染色 ;16× 16像素的硅光电二极管阵列 (16× 16pixelsSiliconPhotodiodeArray)设备用来记录刺激听神经所诱发的光学信号 ;观察GABA及竞争性GABAA受体拮抗剂BMI对听神经诱发信号的作用。 结果 刺激听神经诱发的光学信号以时间 空间分布的形式被记录。每一个光学信号分为两个成分 :快的峰电位样反应及慢的长时程反应。快电位的起始相具有突触前性质 ,晚期相具有突触后性质 ,慢的长时程反应可能与多突触传递有关。灌流液中使用 5 0 μmol/LGABA可最大限度地降低听神经诱发的脑干神经元信号的幅度 ,BMI可部分逆转GABA对此信号的作用。 结论 多部位的光学系统可以记录电刺激听神经的诱发反应 ,光学信号显示了时间 空间分布的类型。应用药理学的方法可以分析诱发反应的性质。GABA对出生后早期小鼠的诱发反应有明显的抑制作用 ,其抑制作用部分是通过GABAA受体实现的。

GABA_B受体对位听神经脑干传入通路神经活动的影响

目的本实验旨在探讨GABA能神经递质及GABAB受体对电刺激位听神经传入脑干通路兴奋性变化的影响。方法使用出生后0～5d的ddy/ddy小鼠制备脑干切片。脑片经电压敏感染料NK3041染色,电刺激与脑片相连的位听神经残端,使用16×16像素的硅光电二极管阵列测量膜电位变化引起的电压敏感染料吸光度的改变。观察GABA及GABAB受体拮抗剂2-Hydroxysaclofen (saclofen)对神经活动的影响,使用ARGUS-50PDA软件分析实验数据。结果多部位的光学记录方法显示了从位听神经到耳蜗核和前庭核兴奋性传导的时间-空间分布。神经活动可用电位或色彩的改变显示。每一个像素记录的电信号由快的峰电位样反应和慢反应组成。抑制性神经递质GABA可降低快的峰电位样反应及慢反应的幅度;GABAB受体拮抗剂saclofen能够部分逆转GABA的作用,随着saclofen(50μmolL～100μmolL)的浓度增加,在耳蜗核及小脑可引起去极化电位增强及后超极化电位。结论电刺激位听神经在脑干传入通路可引起兴奋性神经活动,GABA及saclofen对诱发的神经活动有调节作用,提示GABA及GABAB受体在听觉传入通路和小脑担负重要的生理功能。

电刺激听神经诱发小鼠脑干神经元活动的光信号特征(英文)

背景:光学记录技术是以电压敏感染料为介质,以硅光电二极管转换技术为特点的新型电生理检测方法,有助于分析复杂的神经结构中膜电位变化的时间-空间分布。目的:使用光学记录的方法观察小鼠脑干听神经电刺激诱发冲动的时间-空间分布,并分析抑制性神经递质γ-氨基丁酸和γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱对听觉诱发冲动的影响。设计:随机对照实验。单位:解放军总医院老年医学研究所,日本关西医科大学耳鼻喉科。材料:实验于2002-05/11在日本关西医科大学耳鼻喉科实验室完成。选取出生后0～5d的ddy/ddy小鼠100只,清洁级,雌雄不拘。方法:将全部动物麻醉后断头处死,在冷冻条件下制作有活性的脑干切片。脑片一侧与无损伤的听神经根残端连接。将脑片置于硅胶铺底的有机玻璃平皿中,用直径30μm钨丝固定。用钨丝电极刺激脑片一侧的听神经根残端,在耳蜗核、前庭核记录诱发反应。对照情况下使用正常的人工脑脊液作为灌流液;灌流液中加入50μmol/Lγ-氨基丁酸的人工脑脊液代替正常人工脑脊液孵育脑片20min后,记录γ-氨基丁酸对脑干听觉通路诱发信号的影响;灌流液中加入50μmol/Lγ-氨基丁酸和200μmol/L荷包牡丹碱的人工脑脊液代替含50μmol/Lγ-氨基丁酸的人工脑脊液孵育脑片20min后,记录荷包牡丹碱对脑干听觉通路诱发信号的影响。刺激条件为正相矩形波脉冲,电流强度5mA,持续时间5ms,频率0.1Hz,电刺激起始时间被设置为89.9ms。脑片染色采用电压敏感染料NK3041,使用16×16像素的硅光电二极管阵列设备记录刺激听神经所诱发的光学信号。主要观察指标:①主要结局;电刺激听神经诱发的脑干光学信号及其特点。②次要结局:γ-氨基丁酸和荷包牡丹碱光学反应记录结果。结果:实验纳入ddy/ddy小鼠100只,中途死亡56只,共44只进入结果分析。①电刺激听神经诱发的脑干光学信号及其特征:刺激听神经诱发的光学信号以时间-空间分布的形式被记录。在同侧耳蜗核,光学信号的潜伏期为(4.63±1.01)ms,前庭核的峰潜伏期为(6.00±0.89)ms。每一个光学信号分为两个成分:快的峰电位样反应及慢的长时程反应。快电位的起始相具有突触前性质,晚期相具有突触后性质;慢的长时程反应可能与多突触传递有关。②γ-氨基丁酸和荷包牡丹碱光学反应记录结果:灌流液中加入50μmol/Lγ-氨基丁酸可最大限度地降低听神经诱发的脑干神经元信号的幅度,快反应起始相的潜伏期没有延长,但幅度有所降低,晚期相以及慢反应的幅度被明显抑制;而灌流液中加入50μmol/Lγ-氨基丁酸、200μmol/L荷包牡丹碱后则可部分逆转γ-氨基丁酸对此信号的作用,快的峰电位样反应和慢反应的幅度有部分恢复。结论:多部位的光学记录系统可以收集电刺激听神经的诱发反应,光学信号显示了时间-空间分布的类型。γ-氨基丁酸能够使电刺激听神经诱发的脑干神经元信号的幅度明显降低,而γ-氨基丁酸A受体拮抗剂荷包牡丹碱可以竞争性地对抗部分而非全部的γ-氨基丁酸的抑制作用,提示γ-氨基丁酸能神经元对听神经诱发冲动的抑制作用除部分通过γ-氨基丁酸A受体实现外,还涉及其他亚型的γ-氨基丁酸受体。