基于ITS2序列及二级结构的维吾尔族药材孜然及其混伪品鉴别

目的:应用DNA条形码技术,建立维吾尔族药材孜然及其混伪品小茴香、芫荽子的分子鉴别方法。方法:提取38批孜然及其混伪品的基因组总DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增内转录间隔区2 (ITS2)序列并双向测序,测序结果经CodonCode Aligner软件进行序列拼接,利用MEGA软件分析序列特征,计算种内、属间遗传距离,构建邻接(neighbor-joining,NJ)系统聚类树,预测其ITS2二级结构。结果:孜然药材ITS2序列中主体单倍型为A1,序列长度均为226 bp,鸟嘌呤(G)+胞嘧啶(C)占比为47.79%~48.23%;小茴香ITS2序列中,主体单倍型为B1,序列长度均为224~227 bp,G+C占比为53.30%~55.36%;芫荽子ITS2序列中,主体单倍型为C1,序列长度均为220~227 bp,G+C占比为56.82%~56.83%。孜然的种内遗传距离明显小于属间遗传距离。二级结构表明,孜然及其混伪品螺旋区的茎环大小、数目、位置及螺旋角度均有明显差异。结论:ITS2序列作为DNA条形码能稳定、准确地鉴别孜然及其混伪品药材,为保障孜然临床安全用药提供了有效技术手段。

维医传统牛奶浸渍炮制工艺对马钱子镇痛作用及毒性的影响

目的:通过研究不同炮制方法对马钱子镇痛作用及其毒性的影响,为传统维吾尔医采用牛奶浸渍炮制工艺处理毒性药材的合理性提供科学依据。方法:小鼠分别灌胃给予生马钱子、中医砂烫法炮制的马钱子、维医牛奶冷渍炮制的马钱子和维医牛奶热渍炮制的马钱子混悬液,观察小鼠14 d内的活动情况及中毒反应。采用改良寇氏法计算马钱子及其炮制品对小鼠的半数致死量(LD50);采用小鼠扭体试验观察灌胃不同剂量各组马钱子炮制品的扭体反应次数,评价镇痛作用。结果:生马钱子及中医砂烫法炮制的马钱子、维医牛奶冷渍炮制的马钱子和维医牛奶热渍炮制的马钱子对小鼠的LD50分别为273.0、289.3、289.3和339.2 mg/kg。与模型组比较,维医牛奶热渍炮制的马钱子低剂量组以及维医牛奶冷渍炮制的马钱子高、低剂量组小鼠醋酸所致扭体反应次数显著减少(P<0.05)。结论:维吾尔医牛奶热渍法和冷渍法炮制工艺能够增强马钱子对小鼠的镇痛作用,提高其对小鼠的LD50。研究结果阐释了维医牛奶浸渍炮制马钱子增效减毒的药理学机制。

维吾尔药新塔花本草考证

目的:阐述新塔花本草来源,对其正本清源。方法:查阅自新塔花药用以来的主要本草、及相关注释书籍,对新塔花进行本草考证,从包括其名称、品种来源、药用部位、功能主治等进行归纳总结。结果:新塔花来源为唇形科塔花属植物新塔花Ziziphora bungeana Juz.和天山新塔花Z.tomentosa Juz.的干燥地上部分。夏秋季采收,切段晾干。功能主治各典籍变化不大,且与现代研究相互佐证,产地在欧亚大陆的许多山地均有分布。结论:澄清了新塔花本草来源,为更好的开发与利用该资源奠定基础。

基于ITS2序列及二级结构鉴别维吾尔药材黑加仑及混伪品

目的建立了基于核基因内部转录间隔区(ITS2)序列及二级结构鉴别维吾尔药材黑加仑及其混伪品(黑加仑葡萄和异果小檗)的方法。方法对维吾尔药材黑加仑及其混伪品的ITS2序列进行聚合酶链式反应(PCR)扩增并双向测序,Codon Code Aligner软件对测序峰图进行序列拼接,用MEGA 6.0软件对拼接后的序列进行多重比对。计算种内、种间遗传距离,构建邻接法(Neighbor-Joining,N-J)系统聚类树,预测其ITS2二级结构。结果经PCR扩增测序后,黑加仑药材ITS2序列长度均为238 bp,GC含量为57.14%~57.98%,A1为主体单倍型;黑加仑葡萄药材序列长度均为226 bp,GC含量为47.79%,仅为一个单倍型;异果小檗药材序列长度均为223 bp,GC含量为53.36%,仅为一个单倍型。并且维吾尔药材黑加仑的种内遗传距离明显小于种间遗传距离。二级结构表明黑加仑及混伪品其螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋角度均有明显差异。结论ITS2序列可以作为鉴定维吾尔药材黑加仑及其混伪品的DNA条形码,为维吾尔药材黑加仑的用药安全提供有效的科学技术手段。

加兰他敏介导Nrf2/HO-1信号通路对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞损伤的保护作用

目的探讨加兰他敏介导核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路对慢性高眼压大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)损伤的影响及其机制。方法48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、加兰他敏组、加兰他敏+ML385组,每组12只。假手术组大鼠进行手术操作但不烙闭巩膜静脉,其余各组大鼠采用巩膜上静脉烙闭法建立慢性高眼压大鼠模型。加兰他敏组大鼠ip 4 mg/kg加兰他敏溶液;加兰他敏+ML385组大鼠ip 4 mg/kg加兰他敏溶液和30 mg/kg ML385。采用便携式动物眼压计测定眼压;苏木精-伊红(HE)染色观察视网膜组织形态及RGCs数量;TUNEL染色检测RGCs凋亡情况;试剂盒法检测视网膜组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;Western blotting法检测视网膜组织中Nrf2、HO-1蛋白表达。结果与模型组相比,加兰他敏组大鼠眼压降低,视网膜组织病理损伤得到改善,RGCs数量增多,RGCs凋亡率降低,视网膜组织中SOD、CAT活性以及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均升高,MDA含量降低(P<0.05)。与加兰他敏组相比,加兰他敏+ML385组大鼠眼压升高,视网膜组织病理损伤加重,RGCs数量减少,RGCs凋亡率升高,视网膜组织中SOD、CAT活性以及Nrf2、HO-1蛋白表达水平均降低,MDA含量显著升高(P<0.05)。结论加兰他敏可能通过激活Nrf2/HO-1信号通路减轻慢性高眼压大鼠RGCs损伤。

HPLC同时测定新疆不同产地新塔花中3种有效成分的含量

为更加全面的反映维吾尔族药材新塔花的内在质量,对新塔花中的多种成分进行HPLC同步测定,比较不同产地新塔花中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量。样品制备采用回流提取,选用ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5.0μm）;流动相为甲醇（A）-0.2%冰醋酸溶液（B）,梯度洗脱,检测波长340 nm,柱温30℃,流速1.0 m L·min-1。咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷分别在240 mg·L-1（r=0.999 9）,360 mg·L-1（r=1）,7140 mg·L-1（r=0.999 9）呈良好的线性关系,平均回收率分别为100.9%（RS 1.3%）,98.25%（RSD 2.0%）,101.2%（RSD 1.5%）。测得13批新塔花中咖啡酸质量分数在0.081.07mg·g-1、迷迭香酸质量分数在1.233.59 mg·g-1、蒙花苷质量分数在2.0810.90 mg·g-1。该方法结果准确、重复性好,可用于测定新塔花药材中咖啡酸、迷迭香酸、蒙花苷的含量;3种成分在不同批次的新塔花药材中的含量差异显著,其内在质量差异较为明显。

维药新塔花(Ziziphora bungena)zbHDS基因克隆及组织表达分析

对维药新塔花(Ziziphora bungena)萜类化合物生物合成途径中,关键酶1-羟基-2甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合成酶HDS基因克隆,进行组织表达特异性分析,为研究新塔花萜类化合物生物合成途径与基因调控提供基础。结合新塔花转录组数据库,根据编码区序列设计引物,通过RT-PCR方法对Z. bungena基因HDS (zbHDS)的编码区cDNA进行克隆,对其进行相关生物信息学分析,通过Real-Time进一步分析其组织表达特异性。RT-PCR扩增了一个长2 465 bp的zbHDS (登录号:MG065856)基因片段,含一个2 229 bp的开放阅读框,编码742个氨基酸。进化树分析结果显示,与丹参(Salvia miltiorrhiza)具有较近的亲缘关系。Real-Time PCR结果显示zbHDS基因在各器官中均有表达,在茎和叶中表达量较高,根和花中表达量相对较低。本研究首次从新塔花中克隆HDS基因并获得其编码区序列,zbHDS基因具有组织表达特异性,为进一步研究新塔花中萜类化合物生物合成途径提供数据支持。