基于DNA条形码ITS2序列对阿魏属药用植物的鉴别研究

目的:建立一种快速、准确和标准化的中药材阿魏属植物DNA条形码鉴别方法。方法:提取新疆阿魏(Ferula sinkiangensis K.M.Shen)和阜康阿魏(Ferula fukanensis K.M.Shen)基因组DNA,扩增ITS2序列并测序;运用分析相似性搜索法,下载Gen Bank数据库中阿魏属植物13个物种26个样本基因ITS2序列并进行比对分析,计算种间种内遗传距离并构建系统进化树进行聚类分析。结果:通过计算,15个物种遗传距离分布范围为0.009~0.230,平均遗传距离为0.018;聚类分析结果显示DNA条形码ITS2序列能够将阿魏属32种植物聚为不同的类。结论:建立的阿魏药材DNA条形码ITS2序列鉴别方法可准确、快速地鉴别出阿魏属药材的正品和混淆品。

对叶大戟草的生药鉴别

目的:对维吾尔药材对叶大戟草进行生药鉴别。方法:进行药材性状、组织切片、粉末制片及薄层色谱鉴别。结果:对叶大戟草显微特征明显,茎表皮细胞类长方形,内含方晶;气孔不定式。果皮表皮细胞浅棕色,呈类长方形交错排列。薄层色谱特征明显。结论:上述特征可作为对叶大戟草质量标准制定的参考依据。

传统维医牛奶浸渍炮制工艺对马钱子中马钱子碱和士的宁的影响

目的通过研究不同炮制方法对马钱子中马钱子碱及士的宁的影响,为传统维吾尔医采用牛奶浸渍炮制毒性药材的合理性提供科学依据。方法采用HPLC法测定牛奶冷渍和牛奶热渍工艺炮制马钱子,以及中医的砂烫法炮制品及其生马钱子中马钱子碱及士的宁。结果各炮制工艺对两种生物碱的影响大小依次为牛奶热渍炮制>牛奶冷渍炮制>砂烫法炮制。砂烫法并不能有效降低生马钱子中士的宁和马钱子碱的量,牛奶冷渍与牛奶热渍炮制工艺均能不同程度的降低马钱子碱及士的宁碱的量。与生品比较,采用牛奶热渍炮制工艺对两种生物碱量的影响均具有极显著性(P<0.001)。结论维吾尔医牛奶热渍法炮制工艺能显著降低马钱子中马钱子碱及士的宁的量。

维吾尔药材易混品种整理及分子生物学应用的研究进展

目的维吾尔医药学作为我国传统医药的重要组成部分,在保健强身、防病治病方面发挥了不可替代的作用。由于地区用药习惯、本草记载等方面存在差异,维吾尔药材同名异物、同物异名现象普遍存在,作者对其易混品种进行整理。方法统计新疆维吾尔药材标本库标本,市场调研,民族医院走访,民间医生调查。结果统计出常见的误用品、混淆品、伪品维吾尔药材30种。由于易混药材外观形态十分相似,综述了运用分子生物学技术(RFLP、AFLP、DNA条形码)对药材鉴定方面的应用研究进展。结论 DNA条形码为药材鉴定提供信息化的分类标准,成为药材鉴定的新途径。

新疆一枝蒿cDNA文库构建方法研究

目的:建立构建新疆一枝蒿cDNA文库的方法。方法:采用改良Trizol法提取一枝蒿幼嫩叶片总RNA,反转录成单链c DNA,长距离聚合酶链反应法(LD-PCR)合成双链cDNA;PCR产物经蛋白酶K消化,采用sfiⅣ酶切,酶切产物用CHROMA SPIN-400柱分级分离,回收0.4 kb以上的cDNA,以λTripl E×2噬菌体连接并进行体外蛋白包装,利用SMART技术构建一枝蒿全长cDNA文库;随机挑取文库中20个单克隆,电泳法测定原始文库滴度、文库容量、cDNA插入片段的重组阳性率与大小。结果:原始文库滴度为1.94×107pfu/mL,库容量为0.97×107pfu;cDNA插入片段重组阳性率为96%,大小为0.5~2.0 kb,平均为0.9 kb。结论:所构建的高库容、高质量的文库可为新疆一枝蒿cDNA文库的构建提供基础。

维吾尔药材石榴花质量标准研究

目的:建立维吾尔药材石榴花的质量标准,提高其质量控制水平。方法:参照《中国药典》2015年版通则相关方法,测定石榴花药材的水分、灰分、浸出物含量;以石榴花药材中没食子酸和粉末相关特征性结构成分作为相关指标,采用薄层色谱法和显微鉴别法进行定性鉴别研究。结果:该10批次石榴花药材测定结果为水分在6.64%~9.36%之间,总灰分在6.34%~14.14%之间,浸出物在61%~65.07%之间。薄层色谱法结果表明其分离度较好,斑点较为清晰。显微鉴别中相关特征性结构成分,具有一定的适用性。结论:实验所建立的方法准确可靠,可用于维吾尔药材石榴花内在的质量控制与评价。

维药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别研究

目的建立维吾尔药毛菊苣及其易混品菊苣的位点特异性PCR鉴别方法。方法采集不同地理区域的毛菊苣及其易混品,提取样品基因组总DNA。通过对其叶绿体rbcL基因片段进行扩增、测序,进行多重序列比对后根据其变异位点设计位点特异性鉴别引物,对其反应条件进行优化,确定检出限,建立位点特异性PCR鉴别方法。结果建立的位点特异性PCR鉴别体系优化结果为30μL反应体系包含Taq酶0.25 U、10×buffer 2.5μL、d NTP 2.0μL、正、反向引物各0.5μL、总DNA 2μL、dd H_2O 22.25μL。适宜的扩增条件为94℃预变性3 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,32个循坏;最后72℃延伸7 min。对20份毛菊苣与菊苣药材进行扩增,其中毛菊苣能够扩增出约230 bp目的片段条带,而菊苣样品则不能扩增出明显的目的条带。结论建立并优化了毛菊苣及其易混品菊苣位点特异性PCR鉴别技术,能够准确而可靠的达到2种药材的有效鉴别。

基于GenBank核酸数据库ITS2序列鉴定一枝蒿与其混淆品种

目的：利用GenBank核酸数据库中ITS2序列鉴定维吾尔传统药材一枝蒿与其混淆品种。方法：提取一枝蒿药材基因组DNA、扩增ITS2序列并测序，采用CodonCode Aligner V3．0对测序峰图进行校对拼接，并提交至GenBank核酸数据库；运用分析相似性搜索法（BLASTI）进行序列鉴定，下载易混淆品种的ITS2序列，再应用MEGA5．0软件计算种内种间（K2P）遗传距离和构建邻接（NJ）系统聚类树。结果：一枝蒿与其混淆品种之间的K2P遗传距离分布于0．019-0．254之间，远大于一枝蒿种内遗传距离（O．008）；NJ系统聚类树结果表明能将一枝蒿与其混淆品种区分开来，单独聚为一类。结论：ITS2序列适用于维吾尔药材一枝蒿与其混淆品种的鉴别，可为一枝蒿的质量和用药安全提供鉴定依据。