NAD的耗尽与补充对髓核细胞的退行性变的影响

目的明确调节细胞内NAD水平对体外髓核细胞退行性变指标的影响。方法分组利用FK866及NMN处理大鼠尾椎椎间盘髓核细胞。CCK-8法检测髓核细胞的增殖的影响。WST-8法检测NAD含量;RT-PCR测定退变相关指标的表达水平。结果FK866处理下的髓核细胞NAD含量减少,退行性变水平增加(P<0.05);NMN处理后的髓核细胞NAD含量增加,但退行性变水平改变差异无统计学意义(P>0.05);NMN干预FK866预处理的髓核细胞,NAD含量升高,较低浓度可恢复降低髓核细胞的退行性变水平(P<0.05),但高浓度处理可加重退行性变(P<0.05)。结论NAD的含量显著降低与髓核细胞的退行性变相关,但补充需要维持在合理剂量,NAD缺失的髓核细胞施用大量NMN可能加重退行性变;NAD池的稳态对于维持髓核细胞正常功能有重要意义。

肠炎沙门菌菌影的制备及其作为疫苗载体的特性分析

目的制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究。方法以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负载沙门菌菌影后转染小鼠巨噬细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测GFP的表达情况;用负载重组质粒pVAX1-NspA的沙门菌菌影经口灌胃免疫BALB/c小鼠,ELISA检测诱导抗体产生情况。结果重组菌诱导后的裂解效率达99%。沙门菌菌影负载pEGFP-N1转染小鼠巨噬细胞后可检测到GFP的表达。3次免疫两周后,负载重组质粒pVAX1-NspA沙门菌菌影免疫小鼠特异性血清IgG水平和黏膜IgA水平(A_(450)值)分别为0.60±0.05和0.53±0.06,负载pVAX1沙门菌菌影免疫组分别为0.32±0.07和0.22±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。结论制备的肠炎沙门菌菌影免疫能诱导特异性IgG和IgA抗体产生,可作为疫苗载体介导抗原的表达。