联合骨髓涂片和骨髓活检诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯

目的探讨骨髓涂片和骨髓活检在非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓浸润诊断中的价值。方法 NHL患者同时做骨髓涂片和骨髓活检。骨髓涂片经瑞氏染色,分类计数肿瘤细胞;骨髓切片采用塑料包埋法,制作组织切片,常规HGF染色。结果 62例NHL患者经骨髓涂片和骨髓活检联合检测,确诊为NHL细胞骨髓侵犯,其中49例(79.0%)骨髓涂片检出NHL细胞,59例(95.2%)骨髓活检检出肿瘤细胞浸润灶,骨髓活检阳性率略高于骨髓涂片,但差异无统计学意义(P>0.05)。NHL细胞形态分为4种类型:小细胞成熟型、大细胞幼稚型、大细胞原始型和组织细胞型。13例骨髓涂片检查阴性而骨髓活检阳性的病例中,10例是小细胞成熟型(76.9%);9例为骨髓淋巴瘤细胞轻度侵犯(69.2%),3例为重度侵犯合并骨髓纤维化(23.1%)。结论骨髓涂片和骨髓活检都是诊断NHL骨髓侵犯的重要手段,两者各有优势,联合应用可以提高诊断阳性率。骨髓活检在淋巴瘤细胞轻度骨髓侵犯或合并骨髓纤维化,以及浸润瘤细胞为小细胞成熟型时,更能准确地提供诊断依据。

蛋白芯片用于筛选急性髓系白血病患者血清标志物的初步研究

目的利用生物素标记蛋白芯片筛选急性髓系白血病(AML)患者血清中可用于AML早期诊断、预后判断的血清标志物。方法采用生物素标记抗体芯片技术,对11名不同细胞遗传学和分子生物学特征的AML患者[分为预后良好组(5名),预后不良组(6名)]和5名健康体检者(对照组)的血清检测,采用芯片分析软件提取数据,获得的数据采用AAH-BLG-1数据分析软件作统计分析。结果 2个AML组与正常对照组相比,生长因子MFG-E8、osteoactivin、Hepassocin、M-CSF、M-CSF R、Insulin R,白细胞介素家族的IL-20、IL-3、IL-1 F8、IL-2 R alpha、IL-2 R beta、IL-1 R6凋亡因子(Fas)、粘附因子(ICAM-3)、趋化因子(CCL21)、载脂蛋白(Lipocalin-1)、跨膜蛋白(TMEFF1)、基质金属蛋白酶(MMP-3)和肿瘤坏死因子受体超家族的GFR alpha-4、TNF-alpha、TNFRF18、TNFRSF21等22个标志因子水平明显上调(P<0.05);预后不良组与预后良好组相比,IL-17RD、VEGF-D、IGFBP1、基质金属蛋白酶抑制剂TIMP-2、血管生成抑制剂Endostatin、蛋白水解酶uPA、趋化因子MIP-2、FGF-19、结合蛋白LBP、粘附分子L-selectin、载脂蛋白SAA等11个标志因子水平明显上调(P<0.05)。结论生物素蛋白质芯片共检测出33个AML血清标志物,证实这些标志物参与了AML细胞趋化、黏附、迁移、降解基质、恶性增殖、抗凋亡等过程。蛋白芯片有助于早期正确判断AML患者的预后,指导不同强度的个体化治疗。

流式细胞术在首诊非霍奇金淋巴瘤骨髓侵犯中的作用

目的探讨流式细胞术(FCM)在诊断非霍奇金淋巴瘤(NHL)骨髓浸润中的价值。方法采用骨髓涂片和切片联合FCM检测NHL骨髓侵犯。骨髓涂片经瑞氏-吉姆萨液染色,分类计数瘤细胞。骨髓切片采用塑料包埋法制作组织切片,常规苏木精-姬姆萨-酸性品红(HGF)染色。流式细胞仪每份标本分析10 000个细胞。检测方案采用CD45/侧向散射角(SSC)设门,重点分析幼稚细胞群及成熟淋巴细胞群,经前向散射角(FSC)、SSC、异硫氰酸荧光素(FITC)标记的单克隆抗体(McAb1-FITC)、藻红蛋白(PE)标记的单克隆抗体(McAb2-PE)、CD45-Percp五参数分析确定免疫表型。结果 17例骨髓首诊病例中,骨髓穿刺(BMA)确诊12例(70.6%),骨髓活检(BMB)确诊15例(88.2%),FCM确诊17例(100%),FCM确诊率最高,较BMA差异有统计学意义(P<0.05),较BMB差异无统计学意义(P>0.05)。BMB检查发现NHL骨髓浸润方式间质型、结节型和弥漫型均易见,分别占23.5%,23.5%和52.9%。FCM检测结果为B细胞淋巴瘤13例(76.5%)、T细胞淋巴瘤和NK/T细胞淋巴瘤4例(23.5%)。结论骨髓涂片和骨髓切片检查是诊断NHL-BMI的基本方法,可以做出定性诊断。FCM可进一步做出明确的病理诊断。对于骨髓检查首诊NHL-BMI的病例,3种技术的联合应用可以提高NHL-BMI的诊断正确性和阳性率。

急性髓系白血病伴骨髓增殖异常相关改变的形态学及染色体核型研究

目的研究急性髓系白血病伴骨髓增殖异常相关改变(AML-MRC)的遗传学及形态学改变,以提高检出率。方法通过对281例急性髓系白血病(AML)初诊患者回顾性研究,其中分别有60例AML-M2,68例AML-M4,54例AML-M5,51例AML-M6及48例AML-MRC。对各组的原始细胞数(原始细胞/原始粒细胞+原始幼稚单核细胞)、有核红细胞数、每个类型病态造血的细胞个数及染色体核型,进行统计学分析。结果原始细胞数比较:M2(99.70±36.11),M4(110.26±40.23),M5(159.77±29.22),M6(35.05±19.70),MRC(59.39±17.94),方差分析差异有统计学意义(F=121.456,P<0.05);MRC组与其他各组比较,M6原始细胞数<MRC组<AML-M2,4,5组(P均<0.05);有核红细胞数比较:M2(16.66±17.17),M4(14.15±14.64),M5(9.09±10.62),M6(126.31±27.75),MRC(47.43±21.21),方差分析结果差异有统计学意义(F=309.407,P<0.05),MRC与其他各组比较,M2/4/5组有核红细胞数<MRC组<M6组(P均<0.05)。各系病态造血:其中,粒系的假性佩许氏畸形、环状核等,红系的多/奇数核、母子核等,巨核系的小巨核、多核或单核圆核巨核细胞等,各组出现的个数比较,MRC组远高于其他组[(P<0.05)且异常细胞大于60%];另外,粒系的空泡、核溶解等,红系的核分裂相、芽孢等及巨核系的巨大巨核细胞、核断裂等比较,MRC组与其他组出现频率差异无统计学意义[(P>0.05)且均低于20%]。染色体核型分析:AML-MRC核型异常58.8%(20/34),包括MDS相关改变核型14例,及其他复杂核型6例。结论染色体核型异常的MRC仅58.8%;AML-MRC的形态学特征:原始细胞轻度增高,但较其他组增多并不明显,红系不受抑;各系病态造血现象:病态造血现象中前部分为异常特征性改变,主要见于AML-MRC及MDS,对AML-MRC具有诊断意义;后部分为非特征性改变,可见于各类疾病,包括感染、巨幼细胞贫血、白血病等。通过以上特征,可以更好的鉴别AML-MRC与其他各亚型。

BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病2例并文献复习

目的探讨BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病的特点及其可能原因。方法对2例BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病患者的临床资料、细胞形态学、流式细胞仪免疫分型结果及荧光原位杂交术进行分析,并结合文献进行复习。结果文献及本组病例共6例,6例患者均BCR-ABL融合基因阳性或t(9;22)(q34,q1l)即Ph染色体阳性;3例慢性粒细胞白血病急变为BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病,3例无慢性粒细胞白血病病史,初发诊断为BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病;4例双系列型,1例双表型,1例系列转换型。结论初发的BCR-ABL融合基因阳性的急性混合细胞白血病鲜有报道,部分病例由慢性粒细胞白血病急变而来。

156例涂片诊断再生障碍性贫血患者的骨髓活检分析

目的探讨再生障碍性贫血（AA）的诊断方法及发病机制。方法应用骨髓塑料包埋病理检查。结果 156例中125例患者切片内造血组织比例小于20%,16例患者切片内造血组织所占比例为25%-50%,7例患者切片内造血组织比例小于25%,但残余造血组织内造血细胞生长旺盛,3例患者切片内造血组织/脂肪组织小于20%的同时检出粒系不成熟前体细胞异常定位（ALIP）现象,5例患者切片内造血组织减少,脂肪组织增多不明显,造血组织内造血细胞减少,剩余空间均被成熟红细胞充斥。结论大多数患者切片内造血组织与脂肪组织比例下降明显,呈典型的AA骨髓活组织像;少部分介于骨髓活检诊断AA的临界值,需要对造血细胞增生度及巨核细胞数量联合判断。

儿童再生障碍性贫血转化急性淋巴细胞白血病并文献复习

目的 探讨儿童再生障碍性贫血转化为急性淋巴细胞白血病的特点及其可能原因.方法 对儿童再生障碍性贫血转化为急性淋巴细胞白血病的临床资料、细胞形态学、骨髓活检病理、流式细胞仪免疫分型结果进行分析,并结合文献进行复习.结果 19例儿童首发全血细胞减少,诊断为再生障碍性贫血;经过1～4周自然缓解或治疗后缓解;但间隔1~10个月发展为急性淋巴细胞白血病.结论 儿童再生障碍性贫血是急性淋巴细胞白血病前期表现;再生障碍性贫血转化为急性淋巴细胞白血病的临床资料及在疾病发展中多种技术联合诊断,有助于提高急性淋巴细胞白血病前期的诊断.

B淋巴细胞淋巴瘤的基因改变和相关发病机制

现有的造血理论认为,与髓系一样,淋系来源于淋巴干细胞,但是淋系的发育过程比髓系复杂,已知的淋系肿瘤也更多。WHO 2016分类包括的淋系肿瘤超过50种,B淋巴细胞（下文均简称为B细胞）和T淋巴细胞肿瘤的发病占了90%以上,在分类、临床特征和病理机制上T淋巴细胞肿瘤比B细胞肿瘤复杂,发病率相对较低,本文将重点阐述常见的慢性B淋巴细胞淋巴瘤的来源、基因改变和相关发病机制[1]。

荧光原位杂交技术在判断异基因造血干细胞移植预后中的应用

目的 研究荧光原位杂交（FISH）技术在判断异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）预后中的意义.方法 收集异基因外周血干细胞移植、骨髓移植、脐血移植及多种干细胞联合移植标本63例,收集条件为融合基因（BCR/ABL、AML1/ETO）阳性表达,供受者性别不同或同时满足以上2项条件者,分为同性别间干细胞移植和不同性别间干细胞移植两组：同性别间干细胞移植者20例,应用相应的基因探针进行检测;不同性别间干细胞移植者应用相应的基因探针及XY染色体探针联合检测.结果 43例异性allo-HSCT的受者中,25例供、受者骨髓嵌合率在99%以上;13例早期嵌合率偏低（82%~98%）,在随访过程中逐渐上升至99%以上,微量残留病灶（MRD）阴性,移植后原病均未复发;3例嵌合率由99%~100%逐渐下降,MRD比例上升,出现血液学复发.20例供、受者性别相同的allo-HSCT受者中,15例移植后未检测到原来的异常基因;2例检测到微量残留病灶,经免疫抑制剂减量、供者淋巴细胞输注等治疗后降为1%,目前仍在完全缓解中;3例在移植后1~4个月时出现原来的基因异常,复查骨髓为原病复发.结论 FISH技术简便、快速、准确性高、特异性强,对异基因干细胞移植预后判断具有重要意义.

双克隆慢性淋巴细胞白血病1例报道并文献复习

慢性淋巴细胞白血病（CLL）是造血系统的一种小淋巴细胞惰性淋巴瘤,免疫表型主要为CD5~＋和CD23~＋。其临床特征表现为克隆性B淋巴细胞在外周血、淋巴结、骨髓和脾脏等淋巴组织大量积聚。根据世界卫生组织造血和淋巴组织肿瘤分类要求,CLL定义需要外周血至少存在高至5×10~9/L的单克隆B细胞群[1],并且3个月以上,以成熟小淋巴细胞为主,幼稚淋巴细胞小于55%。白血病细胞限制性表达κ或者λ,

探讨急性淋巴细胞白血病患者费城染色体阳性的生物学特征及临床预后

目的分析费城(Ph)染色体阳性(+)急性淋巴细胞白血病(ALL)的发生率,探讨其生物学特征与临床预后的关系。方法应用G显带的常规细胞遗传学技术对300例ALL患者进行检测,其中Ph染色体(+)患者36例,Ph染色体阴性(-)患者264例,分析Ph染色体(+)组患者与Ph染色体(-)组患者的生物学特征、缓解率、生存期差异。结果 300例ALL初诊患者发现Ph染色体(+)患者36例,Ph染色体阳性率为12.0%。Ph(+)组患者的中位血红蛋白、血小板计数、外周血和骨髓幼稚淋巴细胞比例与Ph染色体(-)组患者比较,差异均无统计学意义(P>0.05);但Ph(+)组患者的白细胞计数明显高于Ph(-)组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。36例Ph染色体(+)患者免疫分型资料显示:前B-ALL 9例、My+-ALL 5例、Common-ALL 22例。预后分析显示:Ph(+)组ALL患者和Ph(-)组ALL患者的第1次缓解率分别为52.8%(19/36)和84.8%(224/264),两组比较,差异有统计学意义(χ2=29.89,P<0.05);两组复发率分别为57.9%(11/19)和25.4%(57/224),两组比较,差异有统计学意义(χ2=22.13,P<0.05)。两组患者随访期内中位生存期分别为8、34个月。结论 Ph染色体(+)ALL患者比Ph染色体(-)ALL患者预后更差,生存期短,临床上要注意根据Ph染色体阳性与否采取相应的治疗策略。

322例急性髓系白血病分子遗传学分型特征的研究

目的分析急性髓系白血病(AML)患者的染色体及基因改变情况,并对其进行基因分型。方法对2017年5月至2018年12月于该院就诊的322例初诊AML患者的骨髓细胞进行染色体、荧光定量PCR和二代测序检测。用WHO2016髓系白血病分型系统和NEJM2016文献定义的标准对其进行基因分型。结果322例AML患者中,95.7%的患者检测到遗传学或分子学改变;FLT3、NPM1、DNMT3A、NRAS、CEBPA双突变为最常见的5种基因改变;58.7%的AML可被分到WHO2016定义的基因型中,77.8%的AML可被分到NEJM2016定义的基因类型中,差异有统计学意义(P<0.05)。结论结合染色体和基因检测结果,依据现有的国际统一的WHO疾病分型标准,超过半数的AML可被划分到一个独立的基因型;依据NEJM2016的研究结果,更多的患者可以被划分到一个独立的基因型。

人工智能识别系统在骨髓细胞形态进修教学中的应用研究

探索人工智能识别系统在骨髓细胞形态学进修教学中的应用效果。本研究证明,人工智能教学的优势是在学习过程中更能吸引学习者,简单方便,同时节省了师资人力成本,值得推广应用。

慢性粒细胞白血病加速期及急变期的形态学与免疫学分型的相关研究

目的探讨慢性粒细胞白血病(CML)加速期及急变期的细胞形态学和免疫学分型特征。方法对73例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BP)患者的骨髓标本分别进行光镜细胞形态学及相关细胞化学染色观察,确定其FAB类型;应用流式细胞仪检测免疫学一系列相关抗原。结果 73例CML-BP患者的FAB分型为慢性粒细胞白血病急髓变(CML-AML)44例,急性淋巴细胞白血病(ALL)21例,急性混合细胞白血病(HAL)8例。流式细胞术行免疫表型分析,21例CML向急性淋巴细胞白血病转变(CML-ALL)患者中,其免疫表型B-ALL 19例,T-ALL 2例;且12例含髓系标志。8例CML向急性混合细胞白血病(HAL)转变(CML-HAL)患者中,免疫表型为B+My 6例;T+My 2例。44例CML-AML患者中,15例含T细胞标志,2例含B细胞标志,其他未见跨系表达。73例CML-BP患者中有29例在CML加速期行流式检查,其中16例急变为急性髓细胞白血病(AML),13例急变为非AML(ALL 9例,HAL 4例)。非AML中2例加速期查见髓系原始细胞和前体淋巴细胞同时存在,余9例为髓系原始细胞或伴淋巴细胞标志。结论流式细胞术对CML-BP的方向及鉴别诊断有一定的提示作用。

探讨非霍奇金淋巴瘤骨髓实验诊断体系的临床应用价值

目的探讨联合多种检测技术的骨髓实验诊断体系诊断非霍奇金淋巴瘤骨髓浸润的价值。方法以骨髓涂片检查、切片检查、流式细胞术、荧光原位杂交技术和染色体核型分析技术为基础,建立骨髓实验诊断体系。体系内容包括实验流程和诊断结果评价体系。实验流程的检验顺序为:(1)骨髓涂片、骨髓切片;(2)FCM分析和染色体培养分析;(3)FISH探针检测。诊断结果评价体系以骨髓涂片(BMA)和病理切片(BMB)作为定性诊断指标,特异性的FCM或免疫组织化学(IHC)的免疫表型和FISH探针的基因表型作为分型依据。CAA结果作为诊断及预后判断指标。各项检测技术的实验操作按常规进行。结果总例数为115例,BMA和BMB完成检查各115例,FCM完成74例,FISH 85例,CAA 23例。各单项检出阳性率分别为BMA 72.17%,BMB 89.96%,FCM 90.54%,FISH 54.12%。实验诊断体系综合分析检出率为100%。单项比较,BMB和FCM的阳性检出率明显高于BMA和FISH,差异显著。将75例淋巴结病理确诊为NHL患者的诊断结论在定性、免疫分型和病理分型3个层面上,做骨髓实验诊断结果与淋巴结病理诊断结果的对比分析,其吻合率分别为98.67%,91.94%,72.00%,说明骨髓诊断NHL在较精准的病理分型水平上还有差距。结论骨髓实验诊断的各单项技术对NHL-BMI的诊断有其临床价值,也有不足和局限。骨髓涂片和骨髓切片检查是基本方法,可以做出定性诊断。进一步做FCM或IHC可以明确免疫分型,配合FISH及CAA可以得到精细的病理分型诊断。多技术联合应用的实验诊断体系是诊断NHL的有效方法,可以提高NHL-BMI的诊断正确性和阳性率。

CAR-T治疗急性B淋巴细胞白血病后出现靶抗原丢失及疾病复发1例

难治性和复发性急性B淋巴细胞白血病（B-ALL）经规范化治疗后仍有较高的复发率和病死率,这使得临床治疗需要新的方法或手段。大多数B-ALL细胞表面没有CD20抗原,而有CD19抗原。针对B-ALL的CD19抗原,目前国内外通过输注CD19嵌合抗原受体T细胞（chimeric antigen receptor T cell,CAR-T）来进行免疫治疗的这种新手段文献报道不少。

预判急性白血病患者Auto-PBSCT动员、采集效果影响因素的临床研究

目的：探讨急性白血病患者外周血干细胞动员、采集的效率及影响因素。方法对37例急性白血病患者经化疗＋生长因子动员，动员第5～10天，当外周血WBC＞5×109/L，CD34＋＞20个/μl时，使用CS-3000 Plus血细胞分离机（Baxter公司）进行外周血干细胞采集；采集前外周血WBC分类单个核细胞（MNC，包括幼稚细胞、淋巴细胞及单核细胞），计算MNC%×WBC计数＞（4～6）×109/L预计需要采集循环血容量。分析不同化疗动员时机、疾病、年龄、性别的动员采集，并对采集前外周血进行白细胞计数、分类以及干细胞采集物进行WBC计数、分类和CD34＋检测。结果所有患者均成功动员和采集到了外周血干细胞（MNC＞6×108/kg，CD34＋＞2×106/kg），并成功造血重建。急性髓细胞白血病患者采集所获得的 MNC 与急性淋巴细胞白血病患者采集获得无明显差异；但急性淋巴细胞白血病患者采集获得CD34＋细胞明显较多（P＝0.015）；动员时机的化疗病程与采集物的CD34＋细胞呈负相关，动员时机≤3个疗程与≥6个疗程比较，前者CD34＋细胞明显较好，具有统计学差异（P＝0.028）；外周血MNC数值与采集物MNC及CD34＋细胞具有相关性（r＝0.600，P＝0.00；r＝0.510，P＝0.001）。结论根据不同的疾病、性别、年龄，采用不同的动员采集方案，一般可以成功采集。外周血 MNC 数值对采集物中 CD34＋细胞的总量具有一定预测意义。

急性混合细胞白血病的形态学、免疫学及细胞遗传学观察

急性混合细胞白血病（hybrid acute leukemia，HAL）是世界卫生组织（World Health Organization）白血病分型独特的一个系列，诊断主要依赖于免疫分型的结果。其发病率较低，约占急性白血病的4％，目前对该病种的白血病细胞形态特征、免疫表型及基因改变认识尚不够深入[1]。近年来，本科室采用骨髓细形态学、流式细胞术和荧光原位杂交技术诊断了15例HAI。患者，现将对这些患者的形态学、免疫学及细胞遗传学观察结果报道如下。

荧光原位杂交技术检查、PML／RARα融合基因阴性伴11q-急性早幼粒细胞白血病一例

患儿男性，5岁，因“鼻出血5d”于2012—05—09入本院，入院查体：T为36．8℃，R为23次／min，P为90次／min，BP为102mrnHg／58mmHg（1mmHg-0．133kPa），体质量为20kg。