解淀粉芽孢杆菌HE活性成分鉴定及抗菌特性分析

为明确解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)HE发酵液中的活性成分及抗菌特性,根据解淀粉芽孢杆菌发酵液抑菌活性稳定性,用PCR检测脂肽合成相关的基因,再采用UPLC-Q-TOF-MS对活性物质进一步分析;用二倍稀释法测定脂肽对嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC),并从显微结构上来探讨其抗菌作用。稳定实验表明该菌株产生抑菌活性物质对高温、酸、碱和蛋白酶具有一定的耐受性;4对引物的扩增产物经过克隆、测序和BLAST分析,表明解淀粉芽孢杆菌HE基因组含有ituA、fenB、sfP、mycB的脂肽合成相关基因;液质联用分析发现脂肽粗提物中含有Surfactin、Iturin和Fengycin这3类脂肽类抗生素;抑菌圈法测定抗菌脂肽对嗜水气单胞菌的MIC和MBC均为137.97μg·mL-1;显微特征表明脂肽可以导致嗜水气单胞菌细胞膜塌陷和孔洞。该研究结果可为解淀粉芽孢杆菌活性代谢产物结构鉴定和安全性评价提供参考。

乌鳢致病性维氏气单胞菌的分离鉴定及生物学特性研究

从患病乌鳢体内分离出一株细菌WL161,人工感染试验显示,该菌株具有较强的毒力。经理化特性及16SrRNA基因序列分析,该病原菌为维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)。药敏试验结果显示,头孢克肟、头孢曲松钠等药物对菌株WL161有较好的抑菌效果;部分毒力基因的检测结果证实,该菌携带气溶素、细胞毒性肠毒素、丝氨酸蛋白酶、黏附素、LuxS等多种毒力基因。

不同饲料对稻田养殖克氏原螯虾肌肉质构特性和营养品质的影响

为研究稻田养虾模式下不同饲料对克氏原螯虾肌肉质构特性和营养品质的影响。选取分别饲喂5种饲料和不饲喂饲料自由采食的养殖克氏原螯虾,采用物性分析、生化分析、色谱分析等方法,对克氏原螯虾质构特性、氨基酸和脂肪酸含量进行分析。结果显示,稻田养殖条件下,饲喂大豆组克氏原螯虾肌肉的弹性、凝聚性、胶着性、咀嚼性和回复性等质构特性均优于其他组。测定的17种氨基酸中,自由采食组克氏原螯虾肌肉总氨基酸含量、必需氨基酸总量和呈味氨基酸总量均高于其他组。测定的39种脂肪酸中,自由采食组克氏原螯虾肌肉总脂肪酸含量最高,饲喂商品饲料B组不饱和脂肪酸总含量最高,不投喂饲料组不饱和脂肪酸总含量略低于饲喂商品饲料B,两者均高于其他组。结果表明,稻田养殖模式下不同饲料饲喂克氏原螯虾在肌肉的口感和营养品质方面存在一定差异,综合来看,饲喂大豆的克氏原螯虾在口感方面更具优势,而不饲喂饲料自由采食的克氏原螯虾在肌肉营养品质方面更具优势。

不同动物源性维氏气单胞菌生物学特性比较研究

为深入了解维氏气单胞菌,本试验选取8株不同动物源性的维氏气单胞菌,并对其染色特性、理化特性、培养特性、耐药性、不同pH值、温度、渗透压对其生长的影响以及16S rRNA序列的相似性等生物学特性进行比较研究.结果显示,多数维氏气单胞菌在体外培养的老龄培养物中呈现多形性;理化特性大致相同;可以在TSA培养基、RS培养基、S.S.培养基、BS培养基、HE培养基上生长良好;可以在4 c｜C、25℃～40℃、pH值6～9、氯化钠含量0％～4％中生长;对青霉素G、克林霉素、万古霉素、多粘菌素B、氨苄西林、新生霉素等表现出耐药性;经比对,不同维氏气单胞菌菌株的16S rRNA基因序列具有较高的相似性,但存在一定的差异.研究结果将为维氏气单胞菌的检验检疫、疾病预防奠定基础,同时为该菌的深入研究提供数据支持.

不同饲料对稻田养殖克氏原螯虾生长、非特异性免疫酶及体成分的影响

为探明在稻田养殖模式下,不同饲料对克氏原螯虾(Procambarus clarkii)生长、非特异性免疫酶和体成分的影响,于2018年3—5月,将体重为(2.09±0.20)g、体长为(4.54±0.13)cm的克氏原螯虾虾苗随机分为6组(A1~A6组,每组7100尾),其中向A1~A5组分别投喂5种不同饲料(A1组饲喂玉米、A2组饲喂大豆、A3组饲喂添加了复方黄芪多糖蛋白质含量≥26%的饲料、A4组饲喂蛋白质含量≥26%的饲料、A5组饲喂蛋白质含量≥28%的饲料),A6组不投喂饲料,每组设置一个平行组。养殖周期为60 d,测定该虾的生长性能、非特异性免疫以及体成分等指标。结果显示:1)A3组体重增加率最大,与A5组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05);A3组体长增加率最大,与A4和A5组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05)。2)A2组超氧化物歧化酶(SOD)的活性最高,但与其它组差异不显著(P>0.05);A5组酸性磷酸酶(ACP)的活性最高,与A1组差异不显著(P>0.05),与其它组差异显著(P<0.05);A6组溶菌酶(LSZ)的活性最高,与A1组、A2组和A3组差异不显著(P>0.05),但与A4和A5组溶菌酶(LSZ)的差异显著(P<0.05)。3)含肉率和系水力方面,A1组克氏原螯虾的含肉率最高,与其它组差异显著(P<0.05);A3组系水力最高与A2组、A4组和A6组差异不显著(P>0.05),与A1组和A5组差异显著(P<0.05);A6组的含水率最高与其它组差异显著(P<0.05)。4)粗蛋白含量最高的是A5组,与其它各组差异不显著(P>0.05);A1组粗脂肪含量最高,其次为A5组,两组差异不显著(P>0.05),两组与其它各组差异显著(P<0.05);粗灰分含量最高的是A4组,但各组差异不显著(P>0.05)。在本试验条件下,综合分析不同饲料对克氏原螯虾生长、非特异性免疫酶和体成分的影响,添加了复方黄芪多糖蛋白含量≥26%的饲料优于其它饲料。

维氏气单胞菌生物膜体外模型的建立及影响因素的研究

为探索不同理化因素对致病性维氏气单胞菌（Aeramonasveronii,AV）‘TH0426成膜的影响,采用改良微孔板法建立致病性AV生物膜体外模型并对其进行了研究。结果表明,AVTH0426能够在聚乙烯酶标板表面形成生物膜,PH值4~6,10℃和NaCl浓度4 g/L培养18 h是形成生物膜的最适条件,黄颡鱼（Pseudobagrusfulvidraco）的肝脏提取液对AV TH0426形成生物膜有促进作用。这为进一步探讨维氏气单胞菌生物膜形成机制和致病机理提供了参考。

维氏气单胞菌感染下乌鳢头肾消减cDNA文库的构建及差异基因的筛选

为筛选乌鳢(Channa argus)抗维氏气单胞菌(A.veronii)相关基因信息,本研究利用抑制性消减杂交(SSH)技术,构建A.veronii感染乌鳢头肾消减cDNA文库,经鉴定和测序,共获得202条差异表达序列标签(EST),其中,73个序列未检索到同源性,其余129条序列按可能功能共分为6大类,免疫相关基因序列25条,占总数的13%。该研究结果为探索乌鳢抗A.veronii感染的分子机理奠定了基础。

5种喹诺酮类药物对维氏气单胞菌体外抗生素后效应的研究

为了解喹诺酮类药物对维氏气单胞菌(A.veronii)的体外抗生素后效应(PAE),本研究采用试管二倍稀释法测定加替沙星、盐酸环丙沙星、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星5种喹诺酮类药物对A.veronii TH0426株的最小抑菌浓度(MIC),采用菌落计数法测定5种抗生素的PAE值。结果显示:5种喹诺酮类药物在1、2、4、8倍MIC时,对A.veronii TH0426的PAE值分别为0.50±0.23、0.80±0.25、1.30±0.21和1.40±0.13(加替沙星);0.30±0.20、0.70±0.12、1.30±0.19和2.20±0.22(盐酸环丙沙星);0.40±0.10、1.00±0.23、2.20±0.15和2.50±0.17(盐酸左氧氟沙星);0.20±0.11、0.20±0.14、0.40±0.18和0.80±0.15(诺氟沙星);0.50±0.20、1.00±0.22、1.40±0.11和1.90±0.12(依诺沙星)。结果表明5种喹诺酮类药物对A.veronii均产生PAE,并且与药物浓度具有明显剂量依赖性。本研究为水产动物合理给药提供实验依据。