中药白芨提取物作为基因载体的制备与表征

目的分离纯化并制备阳离子型白芨多糖,研究其表征,探讨其作为基因载体的可能性。方法经热水抽提,乙醇沉淀,Sevag法脱蛋白,阴离子交换纤维素柱(DE-52)和凝胶柱(Sephadex G-100)色谱,分离纯化得白芨多糖,通过高碘酸钾氧化得到含醛基的还原性多糖,该还原性多糖与精胺在碱性条件下形成希夫碱式共轭物,经硼氢化钠还原得含伯胺基的阳离子型多糖,分别通过盐酸羟胺法和三硝基苯磺酸法测醛基与伯胺基的产量,并考察了氧化反应时间对反应产物的影响。进一步通过琼脂糖凝胶电泳检测该阳离子型多糖对基因的结合与保护作用。结果所提纯的白芨多糖为一种不含阳离子基团的非还原性多糖,通过胺化还原反应的方法可成功制备出含伯胺基的阳离子型多糖,红外光谱证实了多糖上伯胺基的存在,进一步的研究表明,该阳离子型多糖可以结合并保护质粒DNA。结论通过胺化还原反应方法制备的阳离子型白芨多糖,有望作为一种多糖基的多聚阳离子型基因载体在真核细胞基因转染中发挥作用。

介入途径下中药白芨提取物作为基因递送载体的可行性

目的:探讨经介入途径中药白芨提取物作为基因递送载体的可行性.方法:从中药白芨中提取其有效成分-白芨多糖,采用胺化还原法制备阳离子型白芨多糖,体外实验检测该阳离子型多糖对质粒DNA的结合与保护作用,以及阳离子白芨多糖载基因复合物对肝癌细胞系HepG2的转染,进一步通过介入途径经肝动脉给予该复合物,以GFP作为报告基因检测复合物在体内对活体兔肝细胞的转染.结果:所制备的阳离子型白芨多糖载基因复合物可以结合并保护质粒DNA免受DNA酶的降解;体外实验证实该复合物可以转染入体外培养肝癌细胞,以阳离子白芨多糖作为转染载体时转染效率要低于脂质体组,差异具有统计学意义(28.87%±3.27% vs 36.64%±6.87%,P<0.05).采用介入方法经肝动脉给药时复合物能靶向转染入活体兔肝细胞内并实现表达.结论:采用介入途径经肝动脉给药时阳离子白芨多糖载基因复合物可以实现活体肝细胞靶向转染,有望作为一种新型的多聚阳离子型的基因载体在基因治疗中发挥作用.

IL-12基因治疗对兔VX2肝癌的微血管及免疫微环境的影响

目的:研究白介素12(interleukin 12,IL-12)基因治疗对介入栓塞后兔VX2肝癌模型的肿瘤微血管,以及对免疫微环境的影响,探讨IL-12抗肿瘤作用的机制.方法:成功建立VX2移植性肝癌模型的新西兰兔随机分为4组,每组8只,1组为对照组,经动脉灌注生理盐水,2组行肝动脉碘油化疗栓塞(超液态碘油+丝裂霉素),3组经肝动脉灌注治疗基因(编码人IL-12的重组基因),4组行肝动脉内碘油化疗栓塞+经肝动脉灌注治疗基因(超液态碘油+丝裂霉素+肝动脉内灌注编码人IL-12的重组基因).于治疗后第14天处死所有实验兔,免疫组织化学法检测肿瘤组织微血管密度值与CD3^+、CD4^+、CD8^+效应性T细胞,以及Fox P3^+调节性T细胞.结果:化疗栓塞组肿瘤微血管密度、Fox P3^+细胞明显高于对照组,CD3^+、CD4^+、CD8^+T细胞与对照组之间无明显差异(P>0.05).I L-12基因治疗后肿瘤微血管密度明显低于化疗栓塞组与对照组,而CD3^+、CD4^+、C D8^+T细胞高于化疗栓塞组与对照组,两个基因治疗组(3组与4组)之间无明显差异.IL-12基因治疗后,Fox P3^+细胞变化不明显,3组与1组之间差异、4组与2组之间差异无统计学意义.结论:IL-12基因治疗可以抑制肿瘤血管生成,并且诱导CD3^+、CD4^+、CD8^+效应性T细胞浸润,但存在于肿瘤中以及化疗栓塞后高表达的Fox P3^+调节性T细胞可能会限制IL-12的抗肿瘤作用.

双亚基共表达重组人白细胞介素12真核质粒pEGFP-C1_IL-12的构建及表达

目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和人白细胞介素12双亚基目的基因(hIL-12,P35、P40)的真核表达质粒pEGFP-C1_IL-12,为进一步研究基因的定位、表达及hIL-12的抗肿瘤作用奠定基础。方法提取脂多糖(LPS)诱导后的人脐带血淋巴细胞总RNA,RT-PCR法扩增人白细胞介素12的双亚基P35和P40的全长cDNA,采用重叠PCR法连接两个亚基,双酶切双亚基片段及载体pEGFP-C1,T4DNA连接酶连接,重组质粒转化大肠埃希菌,挑取阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定证实质粒构建成功。借助脂质体将重组质粒转染人肝癌细胞系HepG2,通过荧光显微镜检测报告基因的表达,RT-PCR及Western blot法检测目的基因的表达。结果PCR及测序鉴定证实重组质粒pEGFP-C1_IL-12构建成功,RT-PCR及Western blot法证实重组质粒在HepG2细胞内正常表达。结论携带报告基因(GFP)和双亚基目的基因(hIL-12,P35、P40)的重组真核质粒pEGFP-C1_IL-12构建成功,并能在人肝癌细胞系HepG2中表达。

左肾静脉受压综合征的介入治疗(附6例报道)

目的探讨左肾静脉受压综合征的影像学特征及介入治疗的方法和价值。方法对我院收治的6例行介入治疗的左肾静脉受压综合征患者的临床资料进行分析总结,讨论其临床特点、影像学特征及介入治疗的价值。结果6例患者影像学检查均呈典型胡桃夹综合征表现,CT血管造影多平面重建(MPR)图测得肠系膜上动脉与腹主动脉夹角为20.6°±4.04°,DSA造影术中测得受压近远侧血压差为(6.4±0.4)cmH2O;支架置入术后1年未发生支架移位、脱落及再狭窄等并发症,患者自觉症状改善明显。结论支架置入术治疗左肾静脉受压综合征安全、微创、有效。

白及多糖体外抗肿瘤实验研究

目的探讨白及多糖的抗肿瘤作用。方法体外细胞培养的人胃癌细胞(sgc)、人卵巢癌细胞(A2780)和肝癌细胞(HepG2)经不同剂量白及多糖处理后,应用MTT法测定细胞的增殖情况,流式细胞仪测定白及多糖对3种肿瘤细胞周期的影响。结果白及多糖对sgc、A2780和HepG2的增殖抑制作用具有时间及剂量依赖性。流式细胞检测显示经200μg/mL白及多糖作用72 h后,sgc G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少;A2780 S期细胞增多,G2/M期细胞减少,G0/G1期细胞无明显变化;HepG2 G0/G1期细胞增多,S期细胞无明显变化,G2/M期细胞减少。结论白及多糖可通过抑制sgc、A2780和HepG2的生长增殖、细胞周期阻滞作用发挥抗肿瘤作用。

Stanford B型主动脉夹层腔内修复术后血管重塑分析

目的 探讨Stanford B型主动脉夹层患者经胸主动脉腔内修复术（TEVAR）治疗后血管形态学转归。方法 回顾性分析51例接受TEVAR术治疗的Stanford B型主动脉夹层患者术前及术后临床及影像学资料,分析术后1个月内、1-6个月、6个月后主动脉各段真假腔内径及假腔血栓化情况。结果 TEVAR术后胸主动脉真腔扩大、假腔缩小,与术前比较差异有统计学意义（P〈0.05）,腹主动脉管径真腔和假腔变化较术前无统计学差异（P〉0.05）,腹部重要分支动脉血供情况较术前有所改善。结论 TEVAR术治疗Stanford B型主动脉夹层患者的近中期效果确切,但仍需要远期随访观察。

射频消融对比手术切除治疗小肝癌的Meta分析

目的:比较射频消融术与外科手术切除在治疗小肝癌中的疗效.方法:计算机检索1991-2011年发表的有关采用射频消融术(radiofrequency ablation,RFA)与外科手术肝切除(surgical hepatic resection,HR)治疗小肝癌的对照试验,按照Cochrane系统评价员手册4.2.2版所推荐的质量评价标准来筛选试验,评价纳入研究的方法学质量,用RevMan5.0.25版软件对研究进行系统评价及Meta分析.结果:共纳入2个随机对照试验,9个非随机对照试验,其中英文9篇,中文1篇,韩文1篇.所纳入的研究共包括2965例患者:其中射频消融组患者1459例、外科手术切除组患者1506例.Meta分析表明:外科手术组在3年、5年生存率及1、3、5年无瘤生存率上明显高于射频消融组,差异均有统计学意义(P<0.05),两者1年生存率相比无显著差异(P>0.05);术后严重并发症射频消融组明显低于外科手术组(P<0.05).结论:现有的证据表明,对于小肝癌,射频消融术后严重并发症明显少于外科手术切除,但是外科手术切除治疗小肝癌总体疗效仍明显优于射频消融治疗.

白及多糖微球的制备工艺和表征

目的利用白及多糖制备空白白及微球,考察其最佳制备工艺与表征。方法分离纯化白及多糖,乳化-冷凝-化学交联法制白及微球,单因素实验并以水-油相比率、白及多糖浓度、搅拌速度、交联剂浓度4个因素进行3水平的正交实验,以微球的产率作为评价指标,优化出白及微球的最佳制备工艺。扫描电镜与激光粒度仪观察微球形态和大小,观察微球分散性、悬浮性和沉降时间、吸水溶胀率、导管推注表现及溶解时间。结果微球呈圆形,大小较均匀;水-油相比和白及多糖浓度对微球的产率影响较大。微球在生理盐水与欧乃派克中形成不稳定悬液,分散性良好,沉降时间与粒径成正比;在生理盐水中溶胀速度快于造影剂中,不同pH值时溶胀率无明显变化。微球较容易通过5F导管,但大于400μm微球吸水后难以通过3F微导管,约6周后微球完全融解。结论优化制备的白及微球符合栓塞剂的基本要求。

经皮肾造瘘治疗移植肾积水的疗效观察

目的探讨移植肾积水介入治疗的方法及疗效。方法收集16例右髂窝肾移植术后肾积水患者,B超和X线透视导向下,采用同轴穿刺法进行肾造瘘,然后根据病情选用不同的介入处理。术后观察尿液颜色、尿量,并复查尿常规、肾功能。结果16例患者造影均显示不同程度肾积水和输尿管梗阻,其中输尿管完全梗阻7例,不完全梗阻9例。行经皮肾外引流术3例,经皮穿刺肾输尿管狭窄段球囊扩张联合内外引流术13例。患者血清尿素氮和肌酐平均水平术前分别为28.3mmol/L和537.7μmol/L,术后1周分别下降至9.7mmol/L和148.6μmol/L。术后B超检查示移植肾积水消失。随访4～48个月,除1例患者术后2个月因双J管引流不畅复发肾积水而行外引流术外,其余患者均无肾积水复发。结果介入治疗具有操作简便、创伤小和并发症少的特点,是移植肾积水安全和有效的治疗方法。

槐耳清膏联合化疗栓塞对兔VX2肝癌肝功能、VEGF及MVD的影响

目的:观察槐耳清膏联合经肝动脉化疗栓塞对兔VX2肝癌肝功能、VEGF及MVD的影响.方法:将36只MRI证实已成功接种VX2肝癌的荷瘤兔随机分为3组,开腹经肝动脉穿刺分别给予不同处理:A组为生理盐水对照组,经肝动脉注入0.2mL/kg体质量生理盐水;B组为TACE组,经肝动脉注入超液态碘化油0.2mL/kg+丝裂霉素0.5mg/kg体质量乳剂;C组为TACE+槐耳清膏灌服组,TACE方法同B组,同时术后每天灌服槐耳清膏500mg/kg体质量.介入治疗前1d及治疗后3、7、14d抽血检测血清的ALT和AST.术后2wk用免疫组织化学方法检测各组肿瘤细胞Ⅷ因子及VEGF的表达情况,对Ⅷ因子染色阳性血管内皮细胞进行MVD计数.结果:介入治疗前1d,3组动物ALT、AST水平差异无显著性;介入治疗后3和7d,3组动物ALT和AST水平相比差异有统计学意义(F=28.411,55.537,均P<0.05;F=8.565,6.401,均P<0.05),C组与B组相比差异有统计学意义(P<0.05).3组动物MVD值和VEGF的表达强度以C组最低,B组最高,3组相比差异有统计学意义(F=5.22,P<0.05;χ2=7.247,P<0.05),C组与B组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:槐耳清膏可以改善动物TACE术后的肝功能,并可通过减少VEGF表达,抑制肿瘤血管生成达到治疗肝癌的目的.

重组人p53腺病毒基因经介入后在兔VX2肝癌中表达

目的:探讨重组人p53腺病毒基因(rAd-p53,1×1012VP/支)经介入在兔VX2肝癌中的表达特点,为临床应用提供理论依据.方法:将30只新西兰大白兔采用移植法建立兔VX2移植性肝癌模型,于移植术11d行MRI、CT检查.随机抽取27只移植成功的荷瘤兔,平均分成3组:A组:经肝动脉单纯灌注rAd-p53(5×106VP);B组:rAd-p53(5×106VP)+超液态碘油(每只0.5mL)经肝动脉灌注;C组:瘤内rAd-p53(5×106VP)直接导入.所有荷瘤兔术中均行DSA.介入术后24、72h,6d分别处死实验兔,免疫组织化学方法检测肿瘤组织及瘤周P53和Bax、Bcl-2蛋白的表达.结果:30只大白兔均经MRI及CT检查,证实有27只种瘤成功,成功率95%.免疫组织化学检测各组中P53和Bax蛋白均有表达,于72h达到最高峰,以C组表达率最高,与其他两组有显著性差异(P53:70.3%±3.4%vs62.4%±3.2%,65.4%±2.1%;Bax:43.7%±2.1%vs35.7%±1.3%,37.6%±2.4%,均P<0.05);C组对Bcl-2蛋白表达率最低,在72h达最低点,与其他两组有显著性差异(12.0%±2.6%vs18.0%±4.3%,16.2%±3.1%,均P<0.05).结论:P53、Bax、Bcl-2蛋白在兔VX2肝癌模型中的表达呈现时间曲线关系;不同rAd-p53介入导入方式P53蛋白表达不同,以瘤内及瘤周直接注射方式表达最高,超液态碘油混合灌注及单纯肝动脉灌注次之.

血管内支架成形术治疗颈动脉狭窄的临床分析

目的:探讨颈动脉血管内支架成形术(CAS)治疗颈动脉狭窄的疗效及并发症。方法:回顾性分析20例颈动脉狭窄患者行21例次CAS的临床资料。结果:20例患者的手术成功率100%。21支颈动脉治疗前后平均狭窄程度分别为(83±13)%、(10±5)%。术中,4例出现血压下降、心动过缓,1例出现血管痉挛,1例出现脑出血;术后1月,3例出现血压下降、心动过缓,1例出现脑过度灌注综合征,1例大卒中,1例术后2天死亡;术后长期颈动脉B超或CTA或MRA复查及电话随访,19例有不同程度脑缺血症状的患者中16例有好转,1例大动脉炎患者于术后9月出现再狭窄,狭窄程度约60%。结论:CAS治疗颈动脉狭窄是一种有效且相对安全的方法,但应重视术中及术后并发症的预防及处理。

经导管动脉栓塞对肝癌血管生成的影响

目的:探讨肝癌经导管动脉栓塞(transcatheter arterial embolization,TAE)对残存肿瘤血管生成的影响.方法:建立20只兔VX2肝癌模型.TAE处理组(n=10),接受150-250μm聚乙烯醇经导管肝动脉栓塞;对照组(n=10),接受蒸馏水经导管肝动脉注入模拟TAE.栓塞后6h或3d,处死实验兔进行肿瘤组织取样,采用免疫组织化学方法评价样本的血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)蛋白表达和微血管密度(microvessel density,MVD),微血管标记采用CD31抗体,实时PCR检测VEGFmRNA表达.结果:TAE处理组肿瘤呈不完全性中央坏死,坏死区周围可见肿瘤细胞存活.TAE处理组肿瘤的VEGF蛋白、mRNA水平和平均MVD均显著高于对照组(P=0.001,0.000,0.001).VEGF蛋白水平与MVD呈显著性正相关(r=0.677,P=0.001).结论:肝癌TAE可激活残存肿瘤血管生成,VEGF在TAE相关性血管生成中发挥重要调节作用.

人白细胞介素12重组基因抗肿瘤作用的初步研究

目的研究重组人白细胞介素12真核表达基因(pEGFP-C1_IL-12)在体内外的抗肿瘤作用。方法将pEGFP-C1_IL-12基因转染入体外培养的肝癌细胞HepG_2,MTT法检测肝癌细胞的增殖能力,半定量PCR法检测肝癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)的表达情况。进一步经动脉导入重组基因至VX_2移植性肝癌组织,观察与化疗栓塞联合应用时在体内对VX_2肝癌的生长的影响。结果在体外实验中,肝癌细胞的增殖能力及VEGF表达与对照组相比无显著性差异。在体内,基因治疗与化疗栓塞联合应用时,肿瘤生长速度明显减慢。结论重组基因pEGFP-C1_IL-12在体外并不表现出抗肿瘤作用,但在体内抗肿瘤作用明显,这种抗肿瘤作用可能并非重组基因表达产物的直接作用,可能是由间接途径介导的。

基于双源CT双能量成像的犬无复流心肌活性实验研究

目的：通过双源 CT（DSCT）心肌灌注扫描观察心肌缺血无复流动物模型的 CT 表现，初步探讨双能量心肌灌注扫描在评估无复流心肌中的应用价值。方法：通过球囊堵塞（60～90 min）加微粒明胶海绵栓塞犬前降支中远段，建立犬心肌缺血无复流模型（n＝6），采用 DSCT 进行首过及3、5、10、15 min 多期延迟心肌灌注扫描，观察梗死区 CT 表现，完成检查后取犬心脏标本行氯化三苯基四氮唑（2，3，5-TTC）染色及 HE 染色，与 DSCT 检查结果进行对照。结果：2只犬在介入手术过程中死亡，4只犬完成模型建立。扫描过程中犬平均心率为135 bpm。DSCT 扫描均可见心肌梗死区 CT 值较正常心肌减低，首过及多期延迟扫描呈固定灌注减低表现，TTC 染色显示梗死区范围与 DSCT 所见相符，HE 染色梗死中心区和边缘区均可见心肌坏死。在不同能量的 DSCT 图像中，100 kV 灌注图像对心肌密度区分能力最强，140 kV 灌注图像噪声最低，而双能量融合灌注图像则在实现密度差异的前提下保证了较低的噪声。结论：DSCT 可以较好地在快心率状态下显示心肌，心肌灌注扫描显示固定灌注减低可能与心肌完全坏死有关。

MSCT和MRI在布加综合征诊疗中的应用

目的:探讨多排螺旋CT(multislice spiral computed tomography,MSCT)及核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)在布加综合征(Budd-Chiari syndrome,BCS)诊疗中的应用价值.方法:回顾性分析53例经数字减影血管造影(digital subtraction angiography,DSA)或介入手术证实BCS患者的MSCT、MRI和手术资料.男35例,女18例;原发型49例,继发型4例;将BCS分为3型:下腔静脉型、肝静脉型和混合型.分析其直接征象、侧支血管、尾叶改变、强化特点、门脉高压征象以及合并疾病等,与DSA结果比较.结果:MSCT和MRI对BCS的诊断正确率分别为82.9%、93.8%,差异无统计学意义(?2=1.489,P>0.05).49例准确显示B C S病变部位、阻塞性质、阻塞长度及走形方向、与周围组织的关系;准确显示肝内、肝外侧枝血管及其空间位置关系.下腔静脉(inferior vena cava,IVC)膜性阻塞17例,有孔型9例,无孔型8例;IVC节段性闭塞7例(≤2.5 cm),长段闭塞8例(>2.5 cm).14例清晰显示"危险"侧支血管,清晰显示需成形的肝静脉(hepatic vein,HV)7例,副肝静脉3例.8例MRI准确显示IVC和/或HV内血栓的位置、血栓分期,12例MSCT发现IVC和/或HV内血栓;18例MSCT显示IVC内钙化.全部手术成功,3 m o后复查,治疗血管血流通畅、支架位置佳.结论:MSCT和MRI为BCS的诊断和介入治疗提供丰富、全面的信息,具有重要的应用价值.

消瘤汤联合介入疗法治疗中晚期原发性肝癌疗效观察

目的:观察消瘤汤联合介入疗法治疗中晚期肝癌的临床疗效。方法:62例中晚期肝癌患者随机分为两组,治疗组38例行肝动脉化疗栓塞术(TACE)联合消瘤汤治疗,对照组24例行TACE治疗,比较两组患者临床症状、肿瘤大小、血清清蛋白的变化。结果:在临床症状改善方面,治疗组有效率84.21%,对照组有效率54.16%,两组疗效比较,P<0.05;在控制肿瘤大小方面,治疗组有效率89.47%,对照组有效率83.33%,经统计学分析,无显著性差异;在保护肝功能、稳定血清清蛋白方面,治疗组优于对照组,其差异有统计学意义。结论:与单纯介入疗法比较,消瘤汤联合介入疗法治疗中晚期肝癌临床疗效更好。

结肠癌并胆囊结石误诊一例分析

1临床资料 患者，女，56岁，因反复发作性右上腹疼痛2年再发加重二周入院。患者于2年前无明显诱因出现右上腹疼痛，为持续性钝痛，阵发性加剧，伴恶心及呕吐，在当地诊所行输液治疗后缓解（具体用药不详）。2年来，上述症状反复发作，2周前，患者再次出现右上腹疼痛，恶心、呕吐胃内容物数次，在当地诊所行输液治疗无效，遂转入本院。

下腔静脉梗阻的CT/MR特征与介入治疗相关危险因素评估

目的探讨术前影像学评估梗阻特征、危险侧支及下腔静脉内飘浮血栓,在布加综合征腔内治疗中的作用。方法回顾性研究112例在我院行腔内治疗的下腔静脉梗阻患者的临床资料。两名影像学专家评价患者的影像资料,采用Likert五分法评估诊断精确度、一致性。采用Spearman’s相关系数评估影像特征与介入手术操作的相关性。结果两名阅片者对各梗阻特征的诊断敏感度为81.25%～100%。对于评价下腔静脉内飘浮血栓,ROC曲线下面积分别为0.87～0.975;诊断精确度的一致性为0.745～0.927。对于危险侧支的评价,两名阅片者共报告了20例(20/112),一致性为1,共9例在血管造影中显示。Spearman’s检验显示术前影像学特征与介入手术操作之间的相关性有统计学意义。结论术前CT/MR可精确判断下腔静脉梗阻患者的特征且预测介入手术的穿刺路径与操作方法 ,并可显示与介入手术相关的一些危险因素,有助于制定介入手术方案及减少并发症。