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空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定
1
作者
杜联峰
夏墙
+3 位作者
余妍
杨瑞
宋明英
孙万邦
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2015年第12期1100-1103,共4页
目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进...
目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。
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关键词
Peb1A基因
LTB基因
大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位
原核表达
黏膜佐剂
基因融合
原文传递
题名
空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定
1
作者
杜联峰
夏墙
余妍
杨瑞
宋明英
孙万邦
机构
遵义医学院珠海校区贵州省免疫学研究生教育创新基地
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2015年第12期1100-1103,共4页
基金
贵州省教育厅自然科学研究项目(No.20090105)
文摘
目的采用重叠PCR方法将大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位ltB基因和空肠弯曲菌外膜蛋白peb1A基因进行连接,构建ltB-peb1A融合基因原核表达系统,对其进行诱导表达与鉴定。方法利用PCR技术扩增ltB与peb1A基因,用重叠PCR法将ltB与peb1A基因进行融合,然后插入pET-28a(+)中,构建原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A。用重组体转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白LTB-PEB1,SDS-PAGE分析重组蛋白表达情况,ELISA法鉴定其与牛Gm1活性,Western blot鉴定重组蛋白的反应原性。结果 PCR及测序证实ltB-peb1A融合基因原核表达载体pET28a(+)-LtB-peb1A构建成功,SDS-PAGE分析目的蛋白最高表达量占全菌总蛋白的28%左右,其分子质量单位为40.7ku。ELISA法鉴定纯化的重组蛋白与牛Gm1有结合活性,Western blot分析重组蛋白能被兔抗空肠弯曲菌识别。结论成功构建了ltB-peb1A融合基因原核表达载体,并获得高效表达的目的蛋白,为空肠弯曲菌黏膜免疫疫苗的研制奠定了基础。
关键词
Peb1A基因
LTB基因
大肠埃希菌不耐热肠毒素B亚单位
原核表达
黏膜佐剂
基因融合
Keywords
Peb1Agene
ltB gene
Escherichia coli heat-labile enterotoxin B subunit
prokaryotic expression
mucosal adjuvant
gene fusion
分类号
R378.22 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
空肠弯曲菌peb1A与大肠埃希菌ltB基因融合基因的构建、表达及鉴定
杜联峰
夏墙
余妍
杨瑞
宋明英
孙万邦
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2015
0
原文传递
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