ITS2序列作为DNA条形码鉴定紫堇属植物的有效性研究

[目的]利用DNA条形码技术对6种紫堇属植物进行分子鉴定,评价内转录间隔区2(internal transcribed spacer 2,ITS2)序列对紫堇属植物的鉴别能力。[方法]从江苏南京、安徽合肥、浙江磐安、浙江缙云等地采集紫堇(Corydalis edulis)、黄堇(C.pallida)、小花黄堇(C.racemosa)、延胡索(C.yanhusuo)、东北延胡索(C.ambigua)和刻叶紫堇(C.incisa)6种紫堇属植物共29份样品。提取其DNA后用ITS2序列的通用引物进行PCR扩增并测序,运用Codon Code Aligner软件拼接和校对序列,MEGA5.1软件分析序列并构建K2P模型的邻接树。[结果]ITS2序列对所研究的29个样品的扩增和测序成功率均为100%。ITS2序列长度在225bp^248bp间,保守位点190个,变异位点71个,变异比例为27.2%。首次扩增获得小花黄堇和紫堇的ITS2序列并上传至Gen Bank。6个物种的种内遗传距离为0~0.0206,种间遗传距离为0.0403~0.1678,小花黄堇和黄堇的遗传距离最小;黄堇与刻叶紫堇的遗传距离最大。不同物种在邻接树中各自进化为单系。6种紫堇属植物的ITS2二级结构均有不同程度的差异。[结论]ITS2序列能够准确鉴定紫堇、黄堇、小花黄堇、延胡索、东北延胡索和刻叶紫堇这6种紫堇属植物,对中药鉴定具有潜在的应用价值。

水液代谢在胃黏膜损伤中的调控及腹水草的干预作用研究

[目的]研究腹水草水提液对乙醇型胃溃疡大鼠胃液及水通道蛋白(aquaporins,AQPs)表达水平的影响,从水液代谢途径探讨腹水草抗乙醇型胃溃疡的作用机制。[方法]36只SD大鼠随机分成6组,正常组和模型组给予生理盐水;雷尼替丁组给予0.027 g/kg·d雷尼替丁混悬液;腹水草低、中、高剂量组分别给予0.7、1.4、2.8 g/kg·d腹水草水提液。连续灌胃给药14d,于最后1次灌胃后,除正常组外,其余各组用无水乙醇制备胃溃疡模型。造模1h后脱颈处死。收集胃液并测量胃液量,酸碱滴定法测定胃液总酸排出量,毛细管法测量胃蛋白酶活性,夹心ELISA和荧光定量RT-PCR分别检测胃组织AQP1、AQP3、AQP4蛋白及m RNA的表达水平。[结果]正常组的胃液量极少,无法收集。模型组的胃液量和胃液总酸排出量最大,胃蛋白酶活性最高。与模型组比较,腹水草低、中、高剂量组的胃液量和胃液总酸排出量均显著减少(P<0.01),且呈剂量依赖关系;腹水草低、中、高剂量均能显著抑制胃蛋白酶活性(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,腹水草组显著下调AQP3和AQP4的蛋白含量及m RNA的相对表达量(P<0.05,P<0.01),上调AQP1的蛋白含量和m RNA的相对表达量(P<0.05,P<0.01)。[结论]腹水草通过上调AQP1和下调AQP3、AQP4的表达水平从而抑制胃液和胃酸分泌、降低胃蛋白酶活性等水液代谢调控途径来实现对胃黏膜的保护和修复作用。