5-Aza对奶牛乳腺上皮细胞中mTOR蛋白和β-酪蛋白表达的影响

本实验以健康的泌乳期中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞为实验模型,通过使用DNA去甲基化药物5-氮杂-脱氧胞苷(5-Aza)对奶牛的乳腺上皮细胞进行处理,采用CASY细胞分析仪测定细胞活力,最后采用western blotting检测mTOR蛋白和β-酪蛋白的表达量。实验结果显示,0.1μmol/L 5-Aza处理后的奶牛乳腺上皮细胞中的mTOR蛋白及β-酪蛋白的表达量显著增加,说明一定浓度的5-Aza可以提高乳腺泌乳信号通路中关键蛋白mTOR的表达水平,最后提高β-酪蛋白的表达水平,表明DNA甲基化也参与了奶牛泌乳调控。本实验试图从DNA甲基化方面揭示影响奶牛乳品质差异的原因,进一步完善奶牛泌乳的分子机制。

应用活细胞RNA检测纳米技术检测乳腺上皮细胞MCF-10A及乳腺癌MCF-7细胞的miR-142-3p表达

传统的核酸检测技术如放射性核素、荧光、化学修饰的探针以及核酸扩增等技术无法检测活细胞中核酸的表达量。而活细胞RNA纳米检测技术和传统的检测技术相比,利用纳米金颗粒为探针能对活细胞进行检测,实验步骤更为简单,可以在自然的、无扩增的条件下观察RNA,这可真实地反应基因表达与表型之间的关系。miRNA是一类非编码RNA,其长度为20~24个碱基,在生命活动中起重要的作用。本文应用活细胞RNA检测纳米技术结合荧光定量PCR分别检测正常的乳腺上皮细胞系及乳腺上皮癌细胞系中内源性miR-142-3p的表达,发现乳腺癌细胞系内源性miR-142-3p的表达显著高于正常乳腺上皮细胞系中miR-142-3p的表达,结果提示miR-142-3p可能在乳腺癌细胞发生发展中起到调控作用。

DNA甲基化对奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳糖合成的影响

以健康的泌乳期中国荷斯坦奶牛的乳腺上皮细胞(DCMECs)为实验模型,构建DNMT3A过表达载体pcDNA3.1-DNMT3A,用脂质体转染奶牛乳腺上皮细胞,采用荧光定量PCR技术检测奶牛乳腺上皮细胞中DNMT3A的mRNA表达,采用Bovine milk fat ELISA KIT检测细胞中的乳脂含量,采用Bovine lactose ELISA KIT检测细胞中的乳糖含量。结果表明,过表达DNMT3A后,奶牛乳腺上皮细胞生成的乳脂和乳糖含量均减少,表明DNA甲基化水平升高能够抑制奶牛乳腺上皮细胞乳脂和乳糖的合成与分泌。

大学生对“互联网+”的认识度调查与研究——以南充三高校为例

为调查大学生对“互联网+”的认知度,研究“互联网+”创新创业模式对大学生思想、眼界、行动等方面的影响。本课题通过问卷调查的方式对南充市三高校的大学生进行调查研究,发现绝大部分同学在学习、娱乐等方面使用互联网非常频繁,但对“互联网+”的了解程度却极低,同时存在大学生获得“互联网+”创新创业信息渠道少、“互联网+”创新创业意识缺乏等诸多不良因素。对此,我们针对以上情况提出一些合理建议,帮助大学生正确全面的认识和利用“互联网+”,增加其自主学习意识和敢于创新创业的勇气。