基于学科核心素养导向下的农村高中化学生活化教学探究

高中化学新课程标准指出教学应联系生活,注重培养学生核心素养.本文将生活化教学理念融入农村高中化学教学课堂,阐述了农村高中化学生活化教学的实践意义,探讨了生活化教学在学科核心素养培养中的应用策略,设计了氯及其化合物的生活化教学案例,可为农村高中化学生活化教学和学科素养培养提供有益参考.

检测禽流感病毒RT-PCR一步法的建立及H5、H9亚型的鉴定

目的建立禽流感病毒(AIV)通用型RT-PCR一步法,并鉴定AIV H5和H9亚型。方法根据流感病毒高度保守的M1基因序列,设计一套通用型引物,建立AIVRT-PCR一步法。根据H5、H9亚型HA基因序列,分别设计一套特异性引物,其上、下游引物分别位于裂解位点两侧,应用RT-PCR一步法检测AIV H5和H9亚型,并验证所建立方法的敏感性;通过检测NDV、IBV和IBDV等RNA病毒及计算机软件模拟检测,验证其特异性。结果所建立AIV系列RT-PCR检测方法具有特异、敏感、简便和快速的特点。结论该方法可用于AIV的检测,H5、H9亚型的鉴定及致病性分析。

新型三体船横摇运动模式分析

对新型三体船模型在不同吃水下横摇运动模式进行实验研究。采用惯性测量系统MTI-G测得横摇衰减角速度曲线,并利用基于遗传寻优的系统辨识方法,进行横摇运动模式的辨识分析,验证该辨识模型及其方法的可行性;通过优化计算确定该船型在不同吃水下的横摇运动微分方程,初步探讨影响横摇运动相关参数的变化规律。该方法和研究结果可为此类三体船耐波性的深入分析和设计提供技术支撑。

鸡痘病毒PCR检测方法的建立

根据已发表的鸡痘病毒 (fowlpox virus,FPV) 4 b核心蛋白基因的核苷酸序列设计合成了 2对引物 ,通过对影响PCR扩增因素的优化 ,2对引物在同一反应条件下 ,以抽提 FPV DNA或直接用其毒液制备的模板均能分别扩增出预期的 5 4 9、136 1bp的片段。特异性检测表明 ,2对引物对 FPV10 2株、FPV2 82 E4 (北京 )、FPV2 82 E4 (吉林 )、v FV2 82重组鸡痘疫苗毒及 FPV临床分离株均能扩增出相应特异性片段 ,而用鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、羊痘病毒、鸡胚成纤维细胞 (CEF)制备的模板分别进行 PCR扩增却成阴性。敏感性检测表明 ,2对引物 (p1 ,2 、g1 ,2 )分别能检测到 10 - 2 、10 - 3fmol的 FPV DNA和 10 0 .5、10 - 0 .5TCID50 的病毒。以上结果表明 ,本试验所建立的 FPV PCR检测法具有较高的特异性和敏感性 ,模板制作简单 ,完全可用于

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测

利用杆状病毒表达系统对H 5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm-T-H 5HA质粒用B amHⅠ及N otⅠ酶切,获得HA基因片段,同时杆状病毒转座载体质粒pF astB acⅠ也用B amHⅠ及N otⅠ酶切,然后用T4DNA连接酶连接,构建了重组质粒pF astB ac-H 5HA。再将该重组质粒转化DH 10 B ac感受态细菌,在体内进行重组,并经三重抗性与蓝白斑筛选,得到杆状病毒重组质粒B acm id-H 5HA。将B acm id-H 5HA转染sf9细胞,获得重组杆状病毒,经SDS-PAGE和W estern b lotting检测表明,HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。

IL-18增强日本血吸虫DNA疫苗Sj23的免疫保护效果(英文)

将小鼠IL-18基因和日本血吸虫Sj23膜蛋白基因分别插入pVAX1载体,构建真核表达质粒pVAX/ mIL-18和pVAX/Sj23 ,联合或单独免疫小鼠,以pVAX1空载体作对照,免疫2次,间隔2周,2次免疫后4周攻击日本血吸虫尾蚴。体液和细胞免疫检测结果表明,联合免疫组能诱导小鼠产生较强的抗日本血吸虫成虫可溶性抗原(SWAP)IgG,较高水平的IFN-γ和IL-2。攻虫试验表明,联合免疫小鼠成虫减虫率和肝脏减卵率分别达41 .6 %和49 .4 %,明显高于pVAX/Sj23单独免疫组(减虫率和肝脏减卵率分别为26 .5 %和41 .4 %)。以上试验结果表明,IL-18能明显增强Sj23 DNA疫苗在小鼠体内的免疫应答,并且产生较强的保护作用。

辽宁省一起牛炭疽疫情的诊断

炭疽是由炭疽芽胞杆菌引起的一种人兽共患的烈性传染病。该菌可形成芽孢，具有坚强的抵抗力，能够在环境中长期存活，从而造成长期的持续的污染和再感染，牲畜等可通过接触土壤、被污染的水源等环境中的芽孢而感染。

鸡新城疫病毒HN基因亚单位疫苗诱导免疫保护的实验研究

实验分别将应用Ｂａｃ ｔｏ Ｂａｃ系统表达的新城疫病毒四平株和长春株血凝素－神经氨酸酶基因（ＨＮ基因）蛋白的重组杆状病毒感染Ｓｆ－９昆虫细胞后，２８ ℃培养７２ ｈ后，洗涤、收集昆虫细胞，离心浓缩，－２０ ℃冻融３次。用ＨＡ－ＨＩ实验和ＨＮ单抗中和试验测定表达产物的活性。将表达的重组蛋白作为亚单位疫苗免疫鸡。用间接ＥＬＩＳＡ和ＨＩ试验测定鸡体内抗体效价。免疫后第１５ ｄ用国家标准强毒ＮＤＶ Ｆ４８Ｅ８攻毒，统计免疫保护率。结果表明，表达的ＮＤＶ ＨＮ重组蛋白能够诱导鸡体产生抗ＮＤＶ 特异性ＩｇＧ抗体和ＨＩ抗体。实验Ⅰ组（四平株）雏鸡保护率为６５％，实验Ⅱ组（长春株）雏鸡保护率为１００％。

利用BrdU在CEF(TK^+)细胞中筛选TK^-重组鸡痘病毒

将新城疫病毒 (NDV)四平株 HN基因 ,插入不含报告基因、以 TK为侧翼的鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2中的复合启动子下游 ,获得重组表达质粒 p UTA- 2 HN。将重组表达质粒转染鸡痘病毒 (FPV)感染的鸡胚成纤维细胞 (CEF) ,培养、收获病毒后 ,用含 40 m g/ L 5 -溴 - 2 -脱氧尿嘧啶 (Brd U )的培养液 ,在 CEF(TK+)细胞中筛选培养 2代 ,然后用不含 Brd U的培养液进行病毒蚀斑纯化 ,成功筛选出表达 NDV HN蛋白的

葡萄籽原花青素对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用

目的:探讨葡萄籽原花青素(GSP)对小鼠睾丸扭转复位后生精功能的保护作用。方法:24只健康雄性昆明小白鼠(8周龄,25～27 g)随机分为3组:对照组、扭转组、治疗组,每组8只。扭转组及治疗组建立单侧睾丸扭转复位动物模型,治疗组于扭转复位前30 min腹腔注射GSP(50 mg/kg),术后采用腹腔注射方式连续给药3 d,每天1次,每次50 mg/kg。扭转组方法同治疗组,治疗同体积生理盐水。术后第4天取扭转侧睾丸,检测组织病理学参数和生精细胞凋亡指数(AI),并检测睾丸组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。对照组行假手术。结果:治疗组与扭转组相比,Johnsen评分上升[(7.38±0.92)分vs(5.00±1.85)分,P<0.05],生精小管直径略增大[(178.75±1.58)μm vs(176.50±1.60)μm,P>0.05],生精细胞层数增加[(5.75±0.71)层vs(3.75±1.03)层,P<0.05],生精细胞凋亡指数AI明显降低[(16.25±1.67)%vs(40.50±1.60)%,P<0.05)],SOD活性明显上升[(52.67±3.57)U/mg prot vs(29.04±4.46)U/mg prot,P<0.05],MDA含量明显下降[(2.91±0.04)nmol/mg prot vs(4.63±0.05)nmol/mg prot,P<0.05]。结论:GSP对小鼠睾丸扭转复位后生精功能损伤有明显的保护作用,其作用机制可能与其能清除氧自由基、抑制脂质过氧化、提高机体抗氧化能力有关。

禽流感病毒H5HA、H7HA、H9HA亚型血凝素基因在毕赤酵母中的表达

利用毕赤酵母表达系统进行了禽流感病毒H5HA、H7HA及H9HA亚型血凝素基因的真核表达研究。首先将H5HA、H7HA及H9HA基因片段分别插入酵母分泌型表达载体pPIC9K中,获得重组质粒pPIC9K-H5HA、pPIC9K-H7HA和pPIC9K-H9HA;再将所获重组质粒分别经SacⅠ、BglⅡ及SalⅠ线性化后,电转化GS115感受态细胞,以插入/替换的方式进行重组,并经MD平板与MM平板筛选,及PCR鉴定,得到重组酵母工程菌GS115/pPIC9K-H5HA、GS115/pPIC9K-H7HA及GS115/pPIC9K-H9HA;用甲醇诱导分泌表达目标蛋白。经SDS-PAGE和Western-blotting检测,结果表明,H5HA、H7HA及H9HA蛋白在毕赤酵母中均获得表达。酵母表达了上述目的蛋白,可直接进行抗原检测,并可用于抗体检测试剂盒及亚单位疫苗制备的辅助研究。

重组鸡痘病毒vFV282疫苗株理化特性测定

将重组鸡痘病毒疫苗株vFV282经酸、碱、热、氯仿、乙醚以及胰蛋白酶处理,接种到CEF上,观察处理前后重组鸡痘病毒疫苗株vFV282毒力活性的变化,分析这些理化因子对重组鸡痘病毒疫苗株vFV282的影响.结果在pH 3.0～pH 9.0范围内,pH变化不会造成该重组鸡痘病毒疫苗株vFV282毒力活性的显著变化.该重组鸡痘病毒疫苗株vFV282经50 ℃ 60 min、55 ℃ 30 min或60 ℃ 15 min即可被灭活,对氯仿敏感,经胰蛋白酶37 ℃作用1 h,TCID50降低2.55 logTCID50/0.1 mL,对乙醚不敏感,经乙醚作用24 h, TCID50下降1.0 log TCID50/0.1 mL.

鸡痘病毒弱毒疫苗株在鸡组织内的分布、消长规律及毒性试验

通过两侧翅内侧皮肤无血管处刺种和滴鼻、点眼等途径给10日龄商品蛋公鸡接种鸡痘病毒(FPV)弱毒疫苗株,利用PCR的方法检测其在鸡体内的分布与消长规律并对其毒性进行了研究。刺种组:接种后6 h在刺种部位皮肤即可检测到病毒DNA;接种后1 d,皮肤、肺、脑PCR检测阳性;7 d,在皮肤、肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;10、15 d,肝为阳性;21 d,脾、法氏囊PCR检测为阴性,肝为疑似;28 d,除刺种部位皮肤外所有内脏器官中均未检测到病毒DNA,但刺种部位皮肤一直到接种后35 d仍可检测到病毒DNA。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。滴鼻点眼组:基本规律与刺种组相同。接种后3 h,在肺部即可检测到病毒DNA;6 h,在肺和脑部PCR检测成阳性,法氏囊为疑似;1 d,在肺、脑、心、脾、肾、法氏囊均可检测到病毒DNA,肝为疑似;21 d,肺、肾、法氏囊、脑均为阳性,其中脑一直持续到接种后28 d。而对照组在整个试验期间PCR检测均为阴性。毒性试验表明,FPV弱毒疫苗株虽使用安全但通过翅内侧皮肤无血管处大量刺种存在导致全身皮肤感染出痘的危险。

表达狂犬病病毒糖蛋白的重组鸡痘病毒的构建和鉴定

将 RVG基因插入到鸡痘病毒表达载体 p UTA- 2 Sm a 位点获得重组转移载体 p U TA- RVG,利用脂质体转染已感染中国鸡痘病毒疫苗株 2 82 E4株 2～ 3h的鸡胚成纤维 (CEF)细胞 ,收获病毒后 ,用 Brd U法进行加压筛选重组病毒 ,PCR检测到重组病毒 RVG基因 ,Western blot检测出 RVG,从而证实已成功构建了表达

利什曼原虫研究进展

利什曼原虫能够引发利什曼原虫病,其黏附于巨噬细胞,黏附后随巨噬细胞的吞噬活动进入细胞内并大量增殖,使感染者肝脾肿大,然而由于感染途径、剂量和种株的不同,利什曼原虫的致病性也存在差异。利什曼原虫的检测方法有许多,常见有ELISA、PCRI、FAT等。PCR技术不光应用于诊断利什曼原虫病,还被广泛应用于利什曼原虫的种属鉴定及不同种利什曼原虫体内基因的表达和克隆等方面。另外,原位杂交方法也可检测利什曼原虫,但应用原位杂交方法对利什曼原虫进行的研究还较少。利什曼原虫体内存在一种高度保守性蛋白(LACK),国外学者认为LACK是研究利什曼原虫疫苗的一个很好的候选抗原。

犬瘟热研究进展

犬瘟热是由犬瘟热病毒引起的一种高发传染病,宿主范围包括大部分食肉目动物。犬瘟热病毒可以感染不同器官和组织的上皮细胞、间质细胞、神经内分泌细胞及造血干细胞,引发全身型或神经型的临床过程,并在中枢神经系统和淋巴组织中形成持续感染,免疫抑制和脱髓鞘性脑脊髓炎是代表性的病症,而淋巴细胞介导的细胞毒性作用的缺乏则与病毒在中枢神经系统的持续感染有关。犬瘟热发病机制与病理学的研究对于犬瘟热的免疫预防和临床诊治有重要的意义。

新城疫病毒F基因与传染性法氏囊病毒VP0基因在鸡痘病毒中共表达

目的 新城疫病毒（NDV）F基因和传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP0基因在鸡痘病毒中表达,以便研制新城疫和传染性法氏囊多价重组疫苗。方法 利用鸡痘病毒282E4株非必需区TK基因构建的表达载体PU-TA2,在已存在的复合启动子p7.5ATI下游同向插入F基因,反向插入复合启动子P7.5ATI,并在其下游反向插入VP0基因,构建由2个相同的复合启动子在相反方向分别表达F和VP0蛋白的PATI2-F-VP0表达载体。使其与鸡痘病毒282E4株共转染CEF细胞后,用BUDR法筛选重组病毒,通过间接免疫荧光法检测阳性重组病毒。用Western blot法检测F和VP0蛋白。结果 在重组病毒株中,用Western blot法可检测到F和VP0蛋白。结论 已成功地获得可同时表达F蛋白和VP0蛋白的重组鸡痘病毒。

犬瘟热病毒间接免疫酶组化检测方法的建立

为对犬瘟热病毒(CDV)进行组织定位检查,本实验利用犬瘟热抗CDV单克隆抗体(MAb),采用间接免疫酶组化法对6只人工感染的比格犬肠组织的病毒抗原进行定位检测。结果表明,利用犬瘟热抗CDV MAb建立的间接免疫酶组化方法具有较高的特异性和灵敏性,可原位检测病犬肠组织中CDV抗原的分布,其抗原的阳性表达主要在小肠绒毛和李氏隐窝的上皮细胞胞浆内,表明CDV主要侵害小肠的粘膜上皮组织。

NDV长春株生物学特性及与国外毒株HN蛋白基因的同源性比较

以新城疫病毒 ( NDV)长春株接种 9日龄 SPF鸡胚增殖后 ,进行了蚀斑纯化 (三代 )鉴定 ,差数、蔗糖密度梯度离心提纯和生物学特性鉴定。结果表明 ,该病毒的鸡胚平均致死时间 ( MDT)大于 1 6 8h,雏鸡脑内致死性 ( ICPI)为 0 .2 5,雏鸡静脉致死性 ( IVPI)为 0 ,血凝解脱时间超过 1 2 0 h,血凝素热稳定性 56℃ 5min仍具有血凝活性。系统发育进化树分析表明 ,NDV长春株与 La Sota株亲缘关系最近 ,为弱毒株。参考多株 NDVHN基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR一次性扩增出 NDV长春株的全长 HN基因。将该 HN基因插入 p KS( -)后 ,进行了序列测定。序列分析表明 ,该 HN基因核苷酸长度为 1 731 bp,编码 577个氨基酸 ,序列中有 5个糖基化位点 ,1 2个半胱氨酸残基 ,与国外发表的 NDV毒株序列相符 ,核苷酸同源性为88.1 %～ 98.8% ,推导的氨基酸同源性为 91 .1 %～ 98.8%。

减毒水泡性口炎病毒诱导宫颈癌HeLa细胞的凋亡及其作用机制

目的:研究减毒水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus,VSV)对宫颈癌HeLa细胞的凋亡诱导作用,并探讨其可能的机制。方法:将减毒VSV以1.0 MOI的接种密度感染HeLa细胞,在6、12、18、24和30 h后收集细胞,MTT法检测HeLa细胞的增殖;AO/EB染色观察HeLa细胞凋亡形态学变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测HeLa细胞早期凋亡率,流式细胞术分析HeLa细胞sub-G1凋亡峰,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,caspase试剂盒检测HeLa细胞caspase-3、caspase-8及caspase-9的活性。结果:减毒VSV感染HeLa细胞12和24 h后,HeLa细胞增殖活力分别为(78.4±1.9)%和(63.1±5.6)%(P<0.01);早期凋亡细胞率分别为(16.88±2.48)%和(31.9±4.24)%(P<0.01),sub-G1凋亡峰分别为(14.85±1.48)%和(21.05±2.28)%(P<0.01)。随着减毒VSV感染时间的增加,HeLa细胞线粒体跨膜电位逐渐降低(P<0.05),caspase-9和caspase-3的活性显著升高(均P<0.05)。结论:减毒VSV能够抑制HeLa细胞的增殖,并通过caspase-9和caspase-3依赖的途径诱导HeLa细胞凋亡。