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邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达
被引量:
5
1
作者
马忠华
罗如新
+3 位作者
夏怡丰
王文东
陈文峻
蒯本科
《微生物学报》
CSCD
北大核心
2000年第6期579-585,共7页
根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全...
根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 80 1bp ,有一个阅读框 ,编码 2 55个氨基酸 ,与增氧产碱菌 (Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比 ,在 693位相差一个碱基 (C→A) ,导致编码产物在 2 2 8位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到 pBluescrip tIIKS质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pBt1 2G ,在大肠杆菌JM1 0 9中可表达邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶 (C1 2 0 )的活性 ;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到 pET 30a质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pET30A ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3) plysS中可表达目的蛋白。C1 2 0是芳香族化合物降解过程中的关键酶 ,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因 ,利用草坪草降解环境中芳香族污染物 ,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG ,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C1 2 0的活性。
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关键词
邻单胞菌
(tfd
C)
PCR
克隆
表达
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职称材料
题名
邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达
被引量:
5
1
作者
马忠华
罗如新
夏怡丰
王文东
陈文峻
蒯本科
机构
复旦大学生命科学学院生物化学系
复旦大学环境科学与工程系
出处
《微生物学报》
CSCD
北大核心
2000年第6期579-585,共7页
基金
国家自然科学基金资助项目!( 3 9770 4 78)&&
文摘
根据已报道的邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶基因 (tfdC)序列 ,设计PCR引物 ,从一株邻单胞菌 (Plesiomonas)的 pL1质粒上扩增到tfdC基因片段 ,连接到 pGEM T载体上 ,并转化大肠杆菌JM1 0 9菌株 ,筛选到阳性克隆。序列分析结果表明 ,PCR产物全长 80 1bp ,有一个阅读框 ,编码 2 55个氨基酸 ,与增氧产碱菌 (Alcaligeneseutroplus)的tfdC基因相比 ,在 693位相差一个碱基 (C→A) ,导致编码产物在 2 2 8位相差一个氨基酸。将目的片段克隆到 pBluescrip tIIKS质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pBt1 2G ,在大肠杆菌JM1 0 9中可表达邻苯二酚 1 ,2 双加氧酶 (C1 2 0 )的活性 ;将翻译起始密码子为ATG的目的片段克隆到 pET 30a质粒载体上 ,筛选到阳性克隆 pET30A ,在大肠杆菌BL2 1 (DE3) plysS中可表达目的蛋白。C1 2 0是芳香族化合物降解过程中的关键酶 ,为了进一步在草坪草中表达tfdC基因 ,利用草坪草降解环境中芳香族污染物 ,将该基因翻译起始密码子由GTG突变成ATG ,突变后的基因在大肠杆菌中可正常表达C1 2 0的活性。
关键词
邻单胞菌
(tfd
C)
PCR
克隆
表达
Keywords
Plesiomonas
Catechol 1
2\|dioxygenase gene (\%tfd\% C)
PCR
Cloning
Expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
邻单胞菌邻苯二酚1,2-双加氧酶基因(tfd C)的克隆及其在大肠杆菌中表达
马忠华
罗如新
夏怡丰
王文东
陈文峻
蒯本科
《微生物学报》
CSCD
北大核心
2000
5
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