大鼠Armcx3基因真核表达载体的构建及表达

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是一种高发于中老年的神经系统退行性疾病，临床表现为静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等。以往研究表明，线粒体动态变化失衡，是引起神经元细胞死亡和帕金森病发生的一个重要因素。

“战后海外华人变化国际学术讨论会”综述

一、会议概况 1989年4月25日至28日,在中国厦门市鼓浪屿观海园旅游村举行了“战后海外华人变化国际学术讨论会”。此次规模盛大的华人问题讨论会由中国华侨历史学会(北京)、福建华侨历史学会(福州)、厦门大学南洋研究所(厦门)、新加坡南洋学会(新加坡共和国)共同主办,以复旦大学田汝康教授为首的十五位国内外专家、学者以及知名人士组成了大会组织委员会,田汝康教授任主任委员。

F11基因复合杂合变异导致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症一个家系的分析

目的探讨1个F11基因新变异导致复合杂合性遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症家系的分子致病机制。方法选取2020年11月30日因"尿路结石"就诊于温州医科大学附属第一医院的1例遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症男性先证者及其家系成员(3代7人)作为研究对象,收集先证者的临床资料,检测先证者及其家系成员的相关凝血指标。提取外周血基因组DNA进行PCR扩增,用DNA直接测序法分析先证者F11基因的全部外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区序列及家系成员相应的变异位点区域。用生物信息学软件分析氨基酸变异位点的保守性,分析变异对蛋白质功能的影响。根据美国医学遗传学与基因组学学会(ACMG)相关变异评级指南对变异位点进行评级。结果先证者为36岁男性,其活化部分凝血活酶时间(APTT)为89.2 s,明显延长,FⅪ活性(FⅪ:C)和FⅪ抗原(FⅪ:Ag)分别为2.0%和3.5%,均极度降低。基因测序发现先证者和其姐姐的F11基因第7外显子存在父源c.689G>T(p.Cys230Phe)杂合错义变异,第13外显子存在母源c.1556G>A(p.Trp519*)杂合无义变异。保守性分析结果表明Cys230呈高度保守。c.1556G>A(p.Trp519*)为已报道的致病性变异。依据ACMG变异评级指南,c.689G>T评级为可能致病变异(PM2_Supporting+PM5+PP1+PP3+PP4)。结论F11基因第7外显子c.689G>T杂合错义变异及第13外显子c.1556G>A杂合无义变异考虑是该FⅪ缺陷症家系的致病原因。

一例遗传性凝血因子F13缺陷症家系的基因变异分析

目的分析一个遗传性凝血因子XIII(coagulation factor XIII,FXIII)缺陷症患者一种新的基因变异,初步探讨其分子致病机制。方法PCR扩增F13A1、F13B基因所有外显子、侧翼序列以及5′端、3′端非翻译区,DNA直接测序。采用ClustalX-2.1-win软件分析氨基酸变异位点的保守性;用Mutation Taster、PolyPhen-2、PROVEAN、SIFT 4个在线生物信息学软件分析变异位点对蛋白功能的影响;用Swiss-PdbViewer软件对变异位点进行蛋白模型和氨基酸相互作用分析。结果在FXIII缺陷症患者F13A1基因第4外显子发现c.515G>C(p.Arg171Pro)杂合错义变异,该变异在同源物种间高度保守,4个在线生物信息学软件均显示p.Arg171Pro变异可能影响FXIII蛋白功能。蛋白模型分析显示,野生型Arg171与Pro27、Thr28各有1个氢键,与Glu102有2个氢键;当发生p.Arg171Pro变异后,Arg171与Pro27、Glu102之间的3个氢键均消失,形成一苯环结构,使蛋白质的内部结构发生了改变。结论F13B基因未发现变异。F13A1基因p.Arg171Pro杂合错义变异可能与该患者FXIII水平降低有关;p.Arg171Pro变异为国内外尚未报道过的新的F13A1基因变异。

一例复合杂合突变导致遗传性凝血因子Ⅺ缺陷症患者的表型与遗传学分析

目的对1例遗传性凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症患者进行凝血指标与基因水平的分析,初步探讨其分子发病机制。方法用ELISA方法检测FⅪ抗原(FⅪ:Ag),用一期凝固法检测活化部分凝血活酶时间(APTT)、FⅪ活性(FⅪ:C)等相关凝血指标,并进行表型诊断。用Sanger测序法分析先证者F11基因所有外显子、侧翼序列、5′和3′端非翻译区及家系成员相应的突变区域DNA。用多重序列对比软件ClustaX-2.1-win分析突变位点的序列保守性;用MutationTaster、PolyPhen-2、PROVEAN和SIFT在线生物信息学软件评价突变的危害性;用Swiss-Pdb Viewer软件分析氨基酸突变后FⅪ蛋白空间构象和次级键的改变。结果先证者活化部分凝血活酶时间(APTT)延长为84.7 s(参考范围:29.0~43.0 s),FⅪ:C和FⅪ:Ag分别降低为3%和1.6%;大儿子、二女儿、大孙子、二外孙女APTT均稍延长,FⅪ:C、FⅪ:Ag均有所降低,为正常对照的50%左右。测序发现先证者F11基因存在第8号外显子c.841C>T(p.Gln263stop)杂合无义突变和第13号外显子c.1546G>A(p.Val498Met)杂合错义突变;其大儿子和大孙子存在p.Val498Met杂合错义突变,二女儿和二外孙女存在p.Gln263Stop杂合无义突变。保守性分析表明Val498在同源物种间高度保守,Gln263在同源物种间中等保守;Mutation Taster评分结果显示p.Gln263stop和p.Val498Met的结果分别为1.000分和0.998分,预示突变为有害突变,可引起疾病;PolyPhen-2、PROVEAN和SIFT评估p.Val498Met的结果分别为1.00、–2.09、0.001,表明突变对蛋白质正常功能运行有害。p.Val498Met突变蛋白模型显示,突变前Val498与Ala517之间有两条氢键,当突变为Met498后,与Ala517之间的氢键没有变化,但与Pro560及Thr575各增加了一条氢键,并与Thr575形成了空间位阻,破坏了FⅪ蛋白的催化结构域。结论先证者p.Gln263stop和p.Val498Met复合杂合突变是导致其FⅪ缺陷症的分子机制,其中p.Val498Met突变为国内首次报道。