RNA干扰Rbl-2基因调控DNA甲基化转移酶介导心脏干细胞凋亡

目的:视网膜母细胞瘤样蛋白2(Rbl-2)在调控DNA甲基化转移酶(DNMT)中发挥重要作用,而DNMT影响干细胞的分化。本文旨在探讨调控Rbl-2基因的表达对心脏干细胞凋亡的影响。方法:分离培养人心脏干细胞,转染Rbl-2 siRNA。采用real time RT-PCR检测Rbl-2和DNMT-3B mRNA表达水平,Westernblotting检测DNMT-3B蛋白表达和caspase-3活化片段,并以Annexin V-FITC/PI双染色-流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:在人心脏干细胞中,转染siRNA后Rbl-2 mRNA表达水平与阴性对照组相比显著降低(P<0.01),同时DNMT-3B mRNA和蛋白表达水平与阴性对照组相比均显著升高(P<0.01),差异显著。与阴性对照组相比,转染Rbl-2 siRNA的人心脏干细胞caspase-3激活,表现为caspase-3活性片段与caspase-3前体的比值显著增高(P<0.01),annexin V阳性细胞凋亡率上升(P<0.05)。结论:Rbl-2基因在心脏干细胞的生存中具有正性调控作用,抑制其表达能促进心脏干细胞的凋亡,其调控机制与表观遗传学的修饰密切相关。

NKX2.5基因的表观遗传学改变与先天性心脏病的关系

先天性心脏病（简称先心病）是小儿先天畸形中最常见的疾病，虽然现在有先进的医疗技术来诊断和治疗先天性心脏病，但其患病率和致死率仍然很高。先天性心脏病的病因大多数为遗传-环境相互作用的结果．且多为心血管畸形而不伴有其他畸形，包括了全部先心病病例的90％以上。NKX2．5基因是心肌细胞中的关键转录因子之一．在心脏发育过程中起重要的作用，但其在先天性心脏病中的调控机制尚不清楚。

97例先天性心脏病儿童DNMT表达情况分析

目的:DNA甲基化转移酶(DNA methylation transferase,DNMT)表达异常可能在先天性心脏病(Congenital heart disease,CHD)心脏缺损中发挥重要作用。本文旨在探讨CHD儿童DNMT表达情况与非CHD儿童DNMT表达情况是否存在差异。方法:收集97例包含房间隔缺损(ASD)、室间隔缺损(VSD)或动脉导管未闭(PDA)的CHD儿童与50例非CHD儿童外周血,提取白细胞总RNA。采用及real-time RT-PCR检测两组儿童DNA甲基化转移酶1(DNMT1)及DNA甲基化转移酶3B(DNMT3B)mRNA表达水平。结果:CHD病例组儿童外周血中DNMT1和DNMT3BmRNA表达水平均较正常对照组高(P<0.01)。结论:DNA甲基化转移酶异常升高可能在CHD发病机制中发挥重要作用。

转染isl1基因促进骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化

目的:Isli蛋白在心脏发生和多能心脏祖细胞分化调节中发挥着重要作用,本文旨在探寻转染isl1基因是否能提高骨髓间充质干细胞(BMSCs)向心肌样细胞分化的能力。方法:利用携带isl1基因的慢病毒(LVS-isl1)感染人骨髓间充质干细胞,通过Puromycin筛选获得稳定细胞株,并对其进行RT-PCR和Western blotting鉴定。以共培养为基础,用real-time PCR、Western blotting以及免疫荧光法检测Isl1蛋白的心肌诱导能力。结果:RT-PCR和Western blotting表明成功获得稳定细胞株BMSC-isl1,real time-PCR结果显示BMSC-isl1组较之BMSCs组和BMSC-vehicle组GATA结合蛋白4、NK2转录因子5、肌细胞增强因子2C和兰尼碱受体2的表达量分别提高了2.3、2.7、2.6和3.2倍;Western blotting以及免疫荧光法结果均提示BMSC-isl1组内心肌肌钙蛋白T、心肌肌钙蛋白I和α-辅肌动蛋白的表达均比BMSCs组和BMSC-vehicle组要高。结论:转染isl基因的BMSCs不仅可以稳定表达Isli蛋白,而且在微环境共培养条件下,可以提高BMSCs向心肌细胞分化的能力。

硒蛋白P对非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏的保护作用研究

目的探讨硒蛋白P(Sepp1)对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏的保护作用及其可能的机制。方法30只Wistar大鼠随机分为对照组(n=10)、模型组(n=10)、补硒组(n=10),分别喂食标准饲料、高脂饲料和补硒(亚硒酸钠)干预饲料。第16周末安乐死法处死全部大鼠,观察肝脏病理组织学改变,检测血浆中Sepp1含量与肝功能指标丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和血脂指标游离脂肪酸(FFA)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)变化情况。结果与对照组比较,模型组肝组织Sepp1含量降低,ALT、AST、FFA、TC、TG、LDL-C含量升高,HDL-C含量降低,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,补硒组Sepp1含量升高,ALT、AST、FFA、TC、TG、LDL-C含量降低,HDL-C含量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论Sepp1可改善肝功能及血脂紊乱,对NAFLD大鼠的肝脏损害起保护作用。