SCF/c-Kit反应轴调控ADSCs在糖尿病创面修复中的作用研究

目的探讨干细胞因子(SCF)/干细胞因子受体(c-Kit)信号调节脂肪间充质干细胞(ADSCs)增殖、迁移的作用机制,及其在糖尿病创面愈合中的作用。方法分离培养ADSCs。将其分为ADSCs组、ADSCs+SCF(4 ng/ml,24 h)组和ADSCs+SCF+c-Kit siRNA(4 ng/ml,24 h)组;利用Western blot检测c-Kit、p-AKT、AKT蛋白的表达;采用CCK-8、细胞克隆形成检测增殖情况;采用Transwell法检测迁移情况。采用链脲佐菌素腹腔注射复制糖尿病小鼠模型,并复制背部直径为2cm的全层皮肤缺损模型。将6只糖尿病裸鼠随机分为实验组和对照组,对照组小鼠于创面周围以皮内注射方式注射1×10~6个未处理的ADSCs,实验组小鼠注射等量的经SCF(4 ng/ml)预处理24 h后的ADSCs。10 d后处死各组裸鼠,计算创面愈合率,苏木精-伊红染色法检测真皮层与表皮层间的厚度,比较两组的差异。结果 SCF诱导c-Kit的表达呈时间、浓度依赖性(P<0.05)。SCF促进ADSCs的增殖、迁移,c-Kit siRNA抑制ADSCs的增殖、迁移(P<0.05)。SCF促进p-AKT的表达,c-Kit siRNA抑制c-Kit、p-AKT的表达。实验组糖尿病裸鼠创面愈合率更高,真皮层与表皮层厚度大(P<0.05)。结论 SCF/c-Kit反应轴激活PI3K/AKT信号通路,促进ADSCs增殖、迁移。SCF预处理能够促进糖尿病裸鼠创面愈合。

HGF/c-Met反应轴对脂肪干细胞修复烧伤创面的调控

背景:研究发现,肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)能促进脂肪干细胞增殖迁移,进而促进创面愈合。目的:观察HGF/c-Met调节脂肪干细胞增殖和迁移的作用机制及其对烧伤创面愈合的影响。方法:将提取的人脂肪干细胞按实验要求分为空白对照组(未处理的脂肪干细胞)、HGF组(10μg/L,24 h)、c-Met si RNA+HGF组(10μg/L,24 h);采用Western blot技术检测c-Met、AKT、p-AKT的蛋白表达,CCK-8和Transwell法分别检测细胞增殖和迁移情况。将12只裸鼠随机分为2组,用99℃烫头接触裸鼠背部皮肤5 s,构建直径为1 cm的皮肤Ⅲ度烫伤模型。实验组创面周围皮肤内注射1×106个10μg/L HGF处理24 h的脂肪干细胞,对照组注射等量未处理的脂肪干细胞。所有裸鼠在实验第7天处死,取新生创面全层皮肤组织,进行苏木精-伊红染色,计算创面愈合率和再上皮化厚度。结果与结论:(1)HGF能够诱导c-Met表达(P<0.05);HGF促进脂肪干细胞的增殖和迁移,c-Met si RNA对脂肪干细胞的增殖与迁移起抑制作用(P<0.05);HGF促进p-AKT蛋白表达,c-Met si RNA抑制p-AKT蛋白表达;(2)实验组创面再上皮化厚度大于对照组(P<0.05),创面愈合率高于对照组(P<0.05);(3)结果表明,HGF干预的脂肪干细胞能通过诱导c-Met基因的表达,激活PI3K/AKT信号通路,提高脂肪间充质干细胞的增殖与迁徙能力;HGF干预的脂肪干细胞能促进裸鼠烫伤创面的愈合。

扬州市高三学生整形现状调查

目的了解扬州市高三学生整形行为现状及影响因素。方法随机调查扬州市5所学校(公立2所,私立、中专、职高各1所)学生500人。结果有效调查466人,已实施整形28人,手术率为6.0%,男生为4.9%,女生为7.0%。整形项目男生以激光包皮环切(36.4%)、牙齿矫正(27.3%)、微创大汗腺清除(18.2%)为主,女生以牙齿矫正(29.4%)、激光点痣(23.5%)、微创大汗腺清除(17.6%)、瘢痕修整术(17.6%)为主。计划整形34人,占7.3%。46.8%的在所在市医院就诊,53.2%的在外地就诊。63.2%的从网络获取整形相关情况,31.0%的从身边朋友,去正规医院咨询仅占5.8%。34.0%的对微整形手术持接受态度,31.0%的表示不接受;25.0%的对大整形手术持接受态度,41.0%的表示不接受。整形动机以对自己外貌不满意占比最高(35.8%),其次为提升自信心(33.7%)。结论目前扬州市高三学生对整形保持较理性态度,微整形接受度较高,整形手术以微整形项目为主。

三维生物打印抗菌型水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用

目的探讨三维生物打印负载纳米银的甲基丙烯酸酐化明胶(GelMA)水凝胶对大鼠全层皮肤缺损创面的作用。方法采用实验研究方法。采用扫描电子显微镜观察不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒的形态、粒径、分布和含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶的孔隙结构,并计算孔径大小。处理1、3、7、14 d,采用质谱仪检测含终质量分数15%GelMA和终质量浓度10 mg/L纳米银的水凝胶的纳米银释放浓度。培养24 h,检测含终质量浓度0(无纳米银)、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径。取浙江大学医学院附属第二医院泌尿外科2020年7月收治的1名健康5岁男童包皮环切术后废弃包皮和该院整形外科2020年7月收治的1名健康23岁女性抽脂手术后废弃脂肪,采用酶解法分别提取成纤维细胞(Fb)和脂肪干细胞(ASC)。将Fb分为仅有培养基的空白对照组和另加入含相应终质量浓度纳米银溶液的2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组、10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组,培养48 h,采用细胞计数试剂盒8检测Fb增殖活性。将Fb分为进行相应处理的0 mg/L含银GelMA水凝胶组、10 mg/L含银GelMA水凝胶组、50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组,于培养1、3、7 d,同前检测Fb增殖活性。将ASC与GelMA水凝胶混合种植,分为三维生物打印组和非打印组,于培养1、3、7 d,同前检测ASC增殖活性并行活/死细胞荧光染色观察ASC生长情况。以上实验中样本数均为3。于18只雄性4~6周龄SD大鼠背部各制作4个全层皮肤缺损创面,分别设为单纯水凝胶组、水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组并移植相应支架。分别于伤后4、7、14、21 d,行大体观察并计算创面愈合率(样本数为6);于伤后7、14 d,对创面行苏木精-伊红染色观察组织病理学改变(样本数为6);于伤后21 d,对创面行Masson染色观察胶原排列情况(样本数为3)。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、Bonferroni校正、独立样本t检验。结果不同质量浓度的纳米银溶液中的纳米银颗粒均呈圆形,散在分布,粒径均匀。含不同终质量分数GelMA的含银GelMA水凝胶都呈现大小不一且相互连通的孔隙结构。含终质量分数10%GelMA的含银GelMA水凝胶的孔径明显大于含终质量分数15%和20%GelMA的含银GelMA水凝胶(P值均<0.05)。处理1、3、7 d,含银GelMA水凝胶的体外纳米银释放浓度的变化趋势相对平缓;处理14 d,其体外纳米银释放浓度迅速增加。培养24 h,含0、25、50、100 mg/L纳米银的GelMA水凝胶对金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的抑菌圈直径分别为0、0、0.7、2.1 mm和0、1.4、3.2、3.3 mm。培养48 h,2 mg/L纳米银组、5 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显高于空白对照组(P<0.05),10 mg/L纳米银组、25 mg/L纳米银组、50 mg/L纳米银组Fb的增殖活性均明显低于空白对照组(P<0.05)。与0 mg/L含银GelMA水凝胶组相比,培养1 d,50 mg/L含银GelMA水凝胶组、100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性均明显降低(P<0.05);培养3 d,50 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显升高(P<0.05),100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低(P<0.05);培养7 d,100 mg/L含银GelMA水凝胶组Fb的增殖活性明显降低(P<0.05)。培养1 d,三维生物打印组的ASC增殖活性与非打印组比较,差异无统计学意义(P>0.05);培养3、7 d,三维生物打印组的ASC增殖活性均明显高于非打印组(t值分别为21.50、12.95,P<0.05)。培养1 d,三维生物打印组死亡ASC数略多于非打印组。培养3、5 d,三维生物打印组和非打印组中的绝大多数ASC为活细胞。伤后4 d,单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面渗液较多,水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥且未见明显感染迹象。伤后7 d,单纯水凝胶组和水凝胶/纳米银组大鼠创面仍有少量渗液,水凝胶支架/纳米银组和水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面干燥结痂。伤后14 d,4组大鼠创面上的水凝胶均脱落。伤后21 d,仅单纯水凝胶组仍有少量创面未愈合。伤后4、7 d,水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率均明显高于其他3组(P<0.05)。伤后14 d,水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面愈合率明显高于水凝胶/纳米银组和单纯水凝胶组(P值均<0.05)。伤后21 d,单纯水凝胶组大鼠创面愈合率明显低于水凝胶支架/纳米银/ASC组(P<0.05)。伤后7 d,4组大鼠创面上的水凝胶均保持在位;伤后14 d,单纯水凝胶组大鼠的水凝胶已与创面脱离,而其余3组仍有部分水凝胶存在于创面新生组织中。伤后21 d,单纯水凝胶组大鼠创面胶原排列无序,而水凝胶/纳米银组、水凝胶支架/纳米银组、水凝胶支架/纳米银/ASC组大鼠创面胶原排列相对有序。结论含银GelMA水凝胶具有良好的生物相容性及抗菌性能,其三维生物打印的双层结构能更好地与大鼠全层皮肤缺损创面新生组织相融合并促进创面愈合。

烧伤引起的异位骨化研究进展

异位骨化是烧伤的一种罕见并发症,其发病率和风险因素尚不明确。笔者通过对国内外有关烧伤引起的异位骨化的文献进行归纳整理,寻找烧伤后发生异位骨化的危险因素以及预防和治疗的新进展,了解到烧伤创面大小、深度、愈合时间等与异位骨化有关,非甾体抗炎药、放射治疗及其联合治疗等可以用于异位骨化的预防,手术是治疗异位骨化的有效手段。