利用生物信息学对缺血性脑卒中相关microRNA和mRNA的分析筛选与qRT-PCR验证

目的利用生物信息学分析筛选与缺血性脑卒中(IS)相关的microRNA(miRNA)和mRNA,通过实验鉴定关键基因、利用Cytoscape构建miRNA-mRNA相互作用网络,探讨其在IS中的作用及其主要调控的相关信号通路。方法从基因表达数据库(GEO)中下载微阵列数据集GSE58294(mRNA谱)、GSE16561(mRNA谱)和GSE43618(miRNA谱),对GEO2R鉴定差异基因和mRNA、DAVID数据库筛选得到的差异表达基因(DEGs)进行功能及通路富集分析,通过STRING构建差异基因的蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络、MCODE插件从PPI中提取相互作用最密切的网络和关键基因,通过TargetScan预测差异表达miRNA(DEMs)的靶基因;利用氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)细胞模型、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证筛选得到的关键基因,利用蛋白免疫印迹(WB)检测铁死亡标志蛋白SLC2A3及GPX4的蛋白表达水平。结果共筛选到198个DEGs,基因本体(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)结果显示,198个基因主要参与Toll样受体信号通路、肌动蛋白细胞骨架调控及细胞凋亡;从PPI网络中鉴定出12个关键基因(CEACAM1、CKAP4、ITGAM、STOM、SLC2A3、ADAM8、DEGS3、MOSPD2、FPR2、MCEMP1、CLEC4D及ADGRG3)和26个DEMs;根据miRNA和mRNA的靶向关系构建miRNA-mRNA作用网络对12个关键基因进行了验证,除MCEMP1外,其余11个关键基因都随再灌注时间延长而上调;利用生物信息学分析人外周血样本发现,SLC2A3与GPX4呈负相关;WB结果显示,当SLC2A3表达上调时、GPX4表达下调(P<0.05)。结论IS发生后DGEs和DEMs表达上调,本研究共筛选到198个DEGs,确定了12个关键DEGs和26个DEMs,构建了12个miRNA-mRNA调控网络,这些基因可能是IS的发病的潜在调控机制,在炎症过程的发生中起着重要作用。

GIV对脑缺血/再灌注损伤模型中神经炎症反应的影响

目的探讨包含88A的卷曲螺旋结构域蛋白GIV是否对脑缺血再灌注损伤模型中的神经炎症应答反应有影响。方法构建C57BL/6小鼠的大脑中动脉栓塞再灌注模型(MACO/R)及BV2小胶质细胞的氧糖剥夺/复氧模型(OGD 6 h+R 24 h),TTC染色检测小鼠的脑梗死面积;Longa神经生物学评分评价小鼠的神经功能缺损程度;ELISA检测小鼠外周血及细胞培养物上清液中白细胞介素(IL)-6和肿瘤坏死因子(TNF)-α的释放水平、Western blot检测小鼠梗死灶周围皮质区组织中卷曲螺旋结构域蛋白(GIV)、TREM2及TLR4的蛋白表达;不同浓度(1、5、10μg/ml)的脂多糖(LPS),刺激BV2细胞24 h建立神经炎症模型,qRT-PCR检测IL-6、TNF-α、IL-1β的mRNA水平、Western blot检测GIV的表达;运用siRNA干扰技术敲低GIV基因的表达后进行OGD/R培养处理;ELISA检测细胞培养基上清液中IL-6和TNF-α的释放浓度;Western blot检测GIV的敲低效率。结果成功构建的MCAO/R及OGD/R模型均激活了神经炎症应答反应,诱导了GIV的蛋白表达降低;MCAO/R诱导了小鼠外周血中IL-6和TNF-α的释放浓度增加,促进了TREM2及TLR4的蛋白表达;LPS激活了BV2细胞IL-6、IL-1β和TNF-α表达,但不影响GIV的表达;siRNA干扰GIV基因的表达后进一步增加炎症因子IL-6和TNF-α的表达。结论GIV基因可能特异性地参与调控脑缺血再灌注损伤诱导的神经炎症应答反应,其可能是脑缺血再灌注损伤的一个潜在治疗靶点。

国外税务审计管窥

税务审计是税务机关依据国家税收法律、法规和相关规章制度，对纳税人依法履行纳税义务、扣缴义务情况进行的审计。税务审计在维护税法权威、加强纳税人的纳税意识、提高税法遵从率、治理腐败、规范税收管理以及防止逃漏税款等方面有着重要作用。适当借鉴国外税务审计的做法，对于加强我国税务审计工作具有重要意义。

探究幼儿教育中如何进行家园携手提升幼儿的自护能力

幼儿阶段的孩子十分活泼,并且有着十足的好奇心,但是智力水平及体力水平都发展有限,所以很多行为自己没办法预见后果,很多成年人感觉危险的事情,幼儿偏偏喜欢尝试一下,所以时常发生危险。而幼儿园肩负着教育幼儿的重担,在平时的教学中一定要格外关注幼儿自护能力的提升,但是想要真正提升幼儿的自护能力,单纯地凭借幼儿园单方的力量难以实现,需要家长积极配合,实现家园共育是关键。

厘清认知路径 促进深度学习——“小数的初步认识”教学思考与设计

人教版《数学》三年级下册“小数的初步认1识”对小数含义的阐述是“1分米是1/10米,还可1以写成0.1米”,即先把1分米转化成1/10米,再把1/10米改写成0.1米。